慢性脑缺血对大鼠海马α-分泌酶表达和活性的影响

目的探讨慢性脑缺血对大鼠海马α-分泌酶的表达和活性的影响。方法双侧颈总动脉结扎制作大鼠慢性脑缺血模型,分别于术后10 d、30 d、90 d和180 d用Y迷宫测试其学习记忆能力;分别用定量PCR和免疫印迹法检测海马α-分泌酶ADAM 10和ADAM 17m RNA的表达和蛋白含量;用荧光法测定海马α-分泌酶的活性。结果 Y迷宫测试显示模型组术后30 d、90 d和180 d所需的电击次数较对照组逐渐增加(P<0.05;P<0.01)。PCR和免疫印迹结果显示,术后30 d、90 d和180 d海马ADAM 10和ADAM 17m RNA表达及其含量明显降低(P<0.05;P<0.01);酶活性检测显示模型组α-分泌酶活性于术后持续性降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论慢性脑缺血下调海马α-分泌酶表达,并抑制其活性,可能在阿尔茨海默病发病过程中有重要意义。

脑慢性低灌注老龄大鼠海马α-分泌酶ADAM17 mRNA表达及其酶活性的变化

目的探讨α-分泌酶在脑缺血后认知障碍发生机制中的作用。方法将48只老龄Wistar 大鼠随机分为低灌注组和假手术组,每组细分为术后1、2、4及16周4个亚组。永久性阻断大鼠双侧颈总动脉构建脑慢性低灌注模型;用 Y 迷宫测试大鼠学习记忆能力;用荧光定量 PCR 法检测大鼠海马α-分泌酶 ADAM17 mRNA 表达;用直接荧光法检测海马α-分泌酶活性。结果低灌注组术后2、4及16周 Y 迷宫测试成绩均显著下降。术后2、4和16周低灌注组α-分泌酶 ADAM17 mRNA 表达(与参照物比值分别为0.78±0.03、0.78±0.02和0.54±0.03)显著低于假手术组(分别为1.12±0.05、0.99±0.04和1.01±0.04),差异有统计学意义(均 P<0.01);而低灌注组α-分泌酶活性则于术后1、2、4和16周(荧光值分别为33880±1086、37496±817、32295±864和30069±1111)持续性显著降低,与假手术组(分别为39497±838、39802±1052、40137±776和39894±1076)相比,差异有统计学意义(均 P<0.01)。结论脑慢性低灌注下调海马组织α-分泌酶 ADAM17 mRNA 表达并抑制α-分泌酶活性,推测可能因此增加了α-分泌酶作用底物 APP 的量,间接激活 APP 代谢的β-分泌酶途径,最终增加脑内 Aβ的生成量,进而损害大鼠学习记忆能力。

缺氧及复氧对去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和淀粉样β分泌酶mRNA水平的影响

目的研究缺氧及复氧损伤对去整合蛋白和金属蛋白水解酶10(ADAM10)和淀粉样β分泌酶(BACE1)mRNA的影响。方法研究分为缺氧12 h组,缺氧24 h组及各自对照组。缺氧组在缺氧条件下(95%N2,5%CO2)分别培养SH-SY5Y细胞12 h和24 h后复氧,分别于0、12、24 h利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ADAM10、BACE1 mRNA水平;对照组在正常情况下培养,与缺氧组同一时间进行接种和处理。结果缺氧培养12 h后复氧各时间点ADAM10 mRNA表达下调(分别较对照组下降19.8%、41.4%、64.6%;P=0.005、0.038、0.001),缺氧培养24 h后复氧各时间点ADAM10 mRNA表达下调更明显(分别较对照组下降30.1%、75.9%、86.5%;P=0.009、0.005、0.043);BACE1 mRNA在缺氧24 h后复氧12 h和24 h表达上调(分别较对照组上调31.5%和35.1%;P=0.028、0.005)。结论缺氧及复氧可以降低ADAM10转录水平和增加BACE1转录水平。