阿根廷意大利腊肠青霉菌生长特征分解脂肪和水解蛋白能力的测定

以肉为主要原料的风干发酵香肠表面的青霉菌既能防止其受杂菌污染,又可作为抗氧化剂,避免香肠过度干燥,还能通过分解蛋白质、游离脂肪酸、乳酸来影响香肠风味。为了选育发酵剂,对青霉菌属的13株霉菌重要的生理性质如生长、水解蛋白和分解脂肪的活性进行了评价。这些菌株从称为“意大利腊肠”的阿根廷风干发酵肉肠中分离,根据色泽、菌丝体形态、生长特征筛选出来。本实验分析了意大利腊肠在干制过程中温度(14℃和25℃)、水分活度(aw)(0.90,0.95和1.00)、氯化钠添加量(2.5%)三个最重要的参数。所有用来分析的菌株随着培养基中温度、aw和加入的NaCl量不同显示出不同的生长率(K=mm/d)。对干制过程影响因素的研究发现:所有菌株都具有水解蛋白和分解脂肪的能力,但其能力在种内和种间都存在着差异。25℃时,添加NaCl能促进水解蛋白的活性,但在14℃时,结果难以确定。在25℃和14℃时,分解脂肪的活性也因盐含量的不同而变化。因此需要对发酵剂菌株的固有生理特征进行详细分析。

脂滴包被蛋白(perilipin)调控脂肪分解

脂滴包被蛋白(perilipin)包被在脂肪细胞和甾体生成细胞脂滴表面。基础状态下perilipin可减少甘油三酯水解,使其贮备增加;脂肪分解时磷酸化的perilipin能促进甘油三酯水解,而且该蛋白对激素敏感脂酶从胞浆向脂滴转位是必需的。据推测,perilipin可能在脂肪分解调控中起到“分子开关”的作用。蛋白激酶A(PKA)、细胞外信号调节激酶(ERK)等信号转导通路参与了脂肪分解。肿瘤坏死因子α(TNFα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂、瘦素(leptin)均可以影响perilipin的表达。新近研究表明,perilipin可通过蛋白酶体途径来调节其蛋白量的表达。脂肪分解调控中的关键蛋白perilipin可以和2型糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化等多种代谢性疾病及心血管疾病联系起来。

牛黄熊脱氧胆酸抑制TNF-α刺激3T3-L1细胞脂肪分解

目的探讨牛黄熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对TNF-α刺激3T3-L1细胞脂肪分解及其可能的机制。方法以3T3-L1前脂肪细胞经1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,设:①对照组;②TNF-α(50 ng/ml)组;③TUDCA(1 mmol/L)+TNF-α(50 ng/ml)组;④TUDCA组(1 mmol/L)。通过油红O染色观察脂滴形态变化并测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标,同时用Western blot检测脂滴包被蛋白perilipinA蛋白表达。结果 TNF-α可以显著刺激3T3-L1细胞脂肪分解,包括功能学显示甘油释放量显著增加[(2.784±0.104)mmol/L,P<0.01],形态学显示脂滴碎裂;TUDCA可以明显抑制TNF-α刺激的3T3-L1细胞脂肪分解,包括阻止脂滴形态的改变,逆转甘油的释放[(1.718±0.085)mmol/L,P<0.01]。通过Western blot检测结果显示TNF-α可以下调perilipin A蛋白表达[(0.227±0.004),P<0.01],而TUDCA可以阻断TNF-α对perilipin A蛋白表达的下调作用[(0.705±0.066),P<0.01]。结论 TUDCA可能通过阻止perilipin A蛋白下调而抑制TNF-α诱发脂肪分解,通过减少游离脂肪酸FFA,从而对胰岛素抵抗、糖尿病等具有一定的改善作用。

TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解及其相关基因转录表达的影响

为探讨TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解的调控作用及其机制,用1、101、00 ng.mL-13种剂量TNF-α作用体外培养的猪原代脂肪细胞24 h,及10 ng.mL-1TNF-α处理脂肪细胞1、6、12、244、8 h。使用甘油试剂盒,检测细胞甘油的释放量,RT-PCR检测ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipinA表达量变化。结果表明,TNF-α以浓度和时间依赖性的方式促进猪原代脂肪细胞甘油的释放(P<0.05);同时下调ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipin A mRNA表达量。说明:TNF-α主要通过下调perilipin A的表达,降低其对脂滴的保护作用,增加脂肪分解酶和脂滴的接触,促进了猪脂肪细胞的脂解作用。

饲粮能量水平对乌金猪脂肪组织脂类分解代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织脂类分解代谢相关基因表达的影响。选取体重约15kg的乌金猪54头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6头猪,分别饲喂消化能为11.74(低能组)、12.89(中能组)和14.22M J/kg(高能组)的饲粮,在体重30、60和100kg时屠宰取皮下脂肪组织,提取总RNA,荧光定量PCR法检测脂肪组织脂肪分解代谢相关酶和因子[激素敏感脂肪酶(HSL)、肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)、脂蛋白脂酶(LPL)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)]基因的表达水平。结果表明:饲喂高能量饲粮乌金猪在30和100kg体重时,脂肪组织HSL、CPT-Ⅰ和PPARγ基因的表达水平显著下降(P<0.05),LPL基因的表达水平显著升高(P<0.05);在60kg体重时,4种基因的表达水平均显著升高(P<0.05)。结果提示,高能量饲粮可降低乌金猪在30和100kg体重时脂肪的分解和脂肪酸的β-氧化,增强60kg体重时脂肪的分解和脂肪酸的β-氧化。

围产期奶牛的脂肪分解供能与脂肪组织重构

脂肪分解是围产期奶牛提供能量和缓解能量负平衡的一种重要方式。产后过度的脂肪分解可能伴随着急剧的脂肪组织重构,使奶牛的代谢压力增加,导致脂肪肝和酮病等营养代谢病。本文总结了围产期奶牛脂肪分解供能代谢过程及其主要调控因素,从脂肪细胞组成改变、细胞外基质变化、巨噬细胞浸润和血管新生4个方面阐述了围产期奶牛脂肪快速分解过程中脂肪组织重构的特点,并剖析了这些生物过程影响围产期奶牛健康和生产性能的机制。

脂肪组织甘油三酯水解酶参与脂肪分解调控

循环中游离脂肪酸增高与肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病密切相关,其主要来源于脂肪细胞内甘油三酯水解。调控脂肪分解的脂肪酶主要包括激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)和最近发现的脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL),后者主要分布在脂肪组织,特异水解甘油三酯为甘油二酯,其转录水平受多种因素调控。CGI-58(属于α/β水解酶家族蛋白),可以活化ATGL,基础条件下该蛋白和脂滴包被蛋白(perilipin)紧密结合于脂滴表面,蛋白激酶A激活刺激脂肪分解时,CGI-58与perilipin分离,进而活化ATGL。

脂肪分解和仿生物电刺激治疗对超重和肥胖的多囊卵巢综合征患者内分泌及代谢的影响

目的探讨脂肪分解和仿生物电刺激治疗对超重和肥胖的多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清学指标的影响。方法 81例体质量指数(BMI)≥23 kg/m2的PCOS患者,按患者意愿分为观察组(57例)和对照组(24例)。观察组给予脂肪分解和仿生物电刺激治疗,对照组仅宣教进行生活方式干预。观察两组各血清学指标的差异。结果观察组治疗后空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FIN)水平较治疗前降低(P<0.05)。对照组治疗前后各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂肪分解和仿生物电刺激治疗可降低超重和肥胖的PCOS患者血清FPG和FIN水平。

白细胞介素-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响

为了研究白细胞介素(Interleukin,IL)-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响及其分子机制,分化的猪脂肪细胞用不同浓度的IL-6(0、25、50、75、100 ng.mL-1)处理24或48 h。通过测定培养液中的甘油浓度检测脂肪细胞的脂解率;采用形态学观察检测脂肪细胞中甘油三酯积聚量的变化;分别用RT-PCR和Western blot检测脂肪细胞中perilipin A、PPARγ2(Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma2)、HSL(Hormone-sensitive lipase)和AT-GL(Adipose triglyceride lipase)的mRNA及蛋白表达。结果显示,IL-6以剂量和时间依赖性的方式刺激猪脂肪细胞的脂肪分解,同时PPARγ2和perilipin A的mRNA及蛋白表达被显著下调;HSL的mRNA表达显著上调,但其蛋白表达水平并未发生显著改变;ATGL的mRNA和蛋白表达均未发生显著改变。上述研究结果表明,IL-6通过抑制PPARγ2及其靶基因perilipin A的表达直接刺激猪脂肪细胞的脂肪分解。

瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建

为定量测定瘤胃脂肪分解菌,试验构建了脂肪分解菌实时荧光定量PCR的标准品及标准曲线。提取瘤胃微生物总DNA,以脂肪分解菌16S r DNA特异性引物进行PCR扩增,回收PCR产物,与PMD19-T Vector连接并转化大肠杆菌。阳性重组质粒经PCR和测序鉴定后,将提取的质粒DNA进行梯度稀释并作为模板,利用荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果显示:PCR产物与目的基因的相似性大于99%,以不同稀释度的重组质粒为模板获得的荧光定量PCR扩增曲线差异明显,构建了相关系数接近1的标准曲线,且熔解曲线峰值单一。试验建立的实时荧光定量PCR方法可用于瘤胃脂肪分解菌的定量检测,为进一步研究该菌在反刍动物瘤胃发酵中的分子机理奠定了基础。

切达干酪成熟期间脂肪分解和氧化的研究

主要研究了切达干酪(Cheddar cheese)成熟过程中脂肪的分解和氧化。结果表明:切达干酪在成熟过程中酸度值(ADV)、羰基价(CBV)和硫代巴比妥酸值(TBA)随着时间的延长逐渐增大,过氧化值(POV)呈先增大后减小的趋势。

稻瘟菌诱导的水稻过氧羟基脂肪酸分解酶的分离

水稻叶片接种稻瘟病菌后，在非亲和性组合稻叶（１３１小种接种稻叶）中，过氧羟基脂肪酸分解酶（ＬｉｐｉｄＨｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ－ＤｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇＥｎｚｙｍｅ，简称ＬＨＤＥ）活性在接种３６ｈ后显著增加，６０ｈ增加到最大；在亲和性组合稻叶（００７小种接种稻叶）和健康稻叶中，ＬＨＤＥ活性在接种３６、４８和６０ｈ后无显著增加。接种后４８ｈ的稻叶中的ＬＨＤＥ活性分别是亲和性组合稻叶和健康稻叶中ＬＨＤＥ活性的４．３和６．０倍。通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ阴离子交换层析，接种后４８ｈ的稻叶中的ＬＨＤＥ分为ＬＨＤＥ１和ＬＨＤＥ２两个组分。ＬＨＤＥ１组分在健康稻叶、亲和性组合稻叶和非亲和性组合稻叶中变化不大，总活性分别为０．０８Ｕ、０．０９Ｕ和０．１０Ｕ；但ＬＨＤＥ２组分在非亲和性组合稻叶中显著增加，而在亲和性组合稻叶和健康稻叶中变化不大，总活性分别为８．７２Ｕ、１．３０Ｕ和１．９０Ｕ。由此说明ＬＨＤＥ２是侵染诱导性ＬＨＤＥ，可能参与水稻对稻瘟病的抗性反应。

五种功能因子体外促进原代大鼠脂肪细胞分解作用的研究

为了应用现有减肥体外筛选模型,对5种功能因子的减肥作用进行体外筛选,为其开发减肥作用的功能性食品提供科学依据,试验用油酸诱导SD大鼠原代成熟脂肪细胞建立肥胖细胞模型,通过检测脂肪细胞三酰甘油分解产生的甘油浓度,反映熊果酸、齐墩果酸、厚朴酚、芒果苷、芍药苷的体外减肥作用。结果表明:熊果酸、齐墩果酸具有显著促进脂肪细胞中三酰甘油分解的作用,高剂量芍药苷可显著促进脂肪细胞中三酰甘油的分解,芒果苷显著抑制脂肪细胞中三酰甘油的分解,厚朴酚对脂肪细胞中三酰甘油分解无显著影响。说明熊果酸、齐墩果酸可用于具有减肥功效的功能性食品的开发。

二甲双胍在大鼠原代脂肪细胞中抑制肿瘤坏死因子刺激的脂肪分解及其机制

目的:通过研究二甲双胍抑制肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)刺激的脂肪分解及其机制,为研究其改善胰岛素敏感性的作用提供新的思路。方法:本研究以SD大鼠原代附睾脂肪细胞为研究对象。附睾脂肪组织用胶原酶Ⅰ消化,细胞分离后分为对照组,二甲双胍(250或500μmol／L)干预组,TNF(50 ng／ml)干预组和二甲双胍加TNF共同干预组;以Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM)为培养液在37℃,5％二氧化碳环境中孵育24小时。比色法测定培养液中甘油的释放量作为评价脂肪分解的指标。用Western Blot的方法测定不同组别细胞中细胞外信号相关激酶(extracellular signal-related kinase,ERK)和磷酸化ERK的表达。实验数据应用GraphPad Prism4．0进行统计学分析。结果:二甲双胍浓度依赖地抑制TNF-α刺激的脂肪分解。TNF-α使甘油释放量增加2．7倍(P<0．001)。500μM二甲双胍较250μM抑制效应更强,分别使50 ng／ml TNF-α刺激的甘油释放量降低48．2％(P<0．001)和38．2％(P<0．001)。二甲双胍可以明显抑制TNF-α引起磷酸化ERK的增加,使其表达减少44．3％(P<0．01)。结论:二甲双胍通过抑制TNF-α引起的ERK磷酸化从而抑制其刺激的脂肪分解。提示在肥胖或糖尿病时,二甲双胍可能通过抑制TNF-α引起的脂肪分解,减少FFA的释放,从而进一步改善胰岛素敏感性。

脂肪分解代谢与运动训练

脂肪是机体能量储存的重要形式之一,是有氧耐力运动时的主要能源物质。酮体调节、甘油三酯和脂肪酸循环反馈调节等因素影响脂肪分解代谢,依据不同项目的运动强度和时间,针对性地制订运动方案,可有效增加运动员的脂肪分解代谢,提高机体的脂肪供能比例。

长白山大黄柳叶黄酮类成分促进脂肪分解作用的研究

目的研究大黄柳叶醇提取物及其黄酮类成分对喂饲高脂食料而引起的小鼠肥胖的抑制作用。方法用添加大黄柳叶醇提取物的高脂肪食料喂饲小鼠10周,测量小鼠体重、子宫周围脂肪组织重量、肝脏中三酰甘油的含量及大黄柳叶醇提取物对小肠刷状缘囊吸收脂肪酸的影响;检测从大黄柳叶中分离得到新的黄酮化合物地奥亭7-O-β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷在脂肪细胞中对去甲肾上腺素诱导脂肪分解的作用。结果大黄柳叶醇提取物可以抑制喂饲高脂食料引起的肥胖和脂肪肝。其主要活性成分为黄酮化合物地奥亭7-O-β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷,能够促进去甲肾上腺素诱导的脂肪分解,大黄柳叶醇提取物及单体化合物均无抑制胰脂肪酶活性的作用。结论大黄柳叶的减肥作用可能是由于大黄柳叶中含有促进脂肪分解作用的黄酮化合物地奥亭7-O-β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷及其他黄酮成分所致。

siRNA干扰ATGL基因表达对猪脂肪细胞脂肪分解的抑制作用

【目的】探讨猪脂肪甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)基因在脂肪细胞脂解中的作用。【方法】构建针对猪ATGL基因CDS区113和1 358位点的慢病毒干扰载体,包装后用其感染猪成熟脂肪细胞,检测ATGL和激素敏感脂酶(hormone-sensitive lipase,HSL)基因mRNA及其蛋白的表达情况;用甘油试剂盒检测细胞甘油释放量。【结果】成功构建了ATGL基因的慢病毒干扰载体,用其感染猪成熟脂肪细胞后,RT-PCR分析和Western印迹检测结果表明,试验组脂肪细胞ATGL的表达显著下调,HSL的表达没有明显变化;甘油释放量显著降低,其中针对ATGL基因CDS区113位点的siRNA1对ATGL mRNA的干扰效率达55%,甘油释放量降低了49%。【结论】成功构建了猪ATGL基因慢病毒干扰载体,其能显著降低ATGL基因mRNA及其蛋白在猪成熟脂肪细胞中的表达,降低脂肪细胞的甘油释放量,表明ATGL在猪脂肪细胞脂解中有着重要作用,且113位点是ATGL基因CDS区的最佳干扰靶位点。

《生物化学》课程中“脂肪酸的氧化分解”微课教学设计

随着信息化技术在教育教学中的逐步应用,"微课"辅助教学的优势逐步显现。《脂肪酸的氧化分解》是医学类专业基础课——《生物化学》的一个知识点,结合"微课"的特点和教学目标,本文对《脂肪酸的氧化分解》微课制作进行了专门的设计。教学设计包括学情分析、知识背景、教学目标与重难点、过程设计几个方面,并制作了相关微课,对教学效果进行了应用评价,以期和同行探讨微课在生物化学教学中的优缺点。

里芋提取物拮抗脂肪分解、促进脂肪合成生理活性研究

目的：对里芋提取物在脂肪代谢中的生理活性进行研究。方法：在体外调制动物脂肪细胞，分别进行脂肪分解和脂肪合成实验，后者用１４Ｃ同位素标记法。结果：有效浓度与生理活性呈一定的正比关系，其活性具不耐热性，有效部分为水溶性物质。结论：里芋含有拮抗肾上腺素诱发的脂肪分解和胰岛素类样作用的物质。

Hepatology|在长期喂养乙醇并突然暴饮的NIAAA小鼠模型中,脂肪分解对乙醇诱发脂肪肝起重要作用

酒精相关肝病(ALD)病理改变包括脂肪变性、炎症和损伤,这些疾病可能会发展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。肝脏从脂肪组织甘油三酯水解中获得约60%的脂肪酸,但这种脂肪分解途径在ALD进展中的作用,并未在任何选择性脂肪分解失活的遗传动物模型中被直接研究过。使用脂肪特异性比较基因CGI-58敲除(FAT-KO)小鼠作为脂肪分解受损的模型,研究显示,脂肪分解不足的小鼠在接受美国国家酒精滥用与酒精中毒研究所(NIAAA)长期喂养乙醇并突然暴饮时几乎完全免受乙醇诱导的肝脂肪变性和脂质过氧化的影响。