大鼠皮肤切创愈合过程中VEGF,TGF-β1蛋白的表达

目的:通过研究皮肤切创愈合过程中血管内皮生长因子(Vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、转化生长因子β1(Trans forming growth factor-β1,TGF-β1)的表达与损伤时间的关系,探讨VEGF、TGF-β1能否在法医学判断损伤时间方面作为一个指标。方法:用大鼠建立皮肤切创模型,按随机原则分为实验组、正常对照组和死后损伤组,采用免疫组化(Immunohi stochemistry,IHC)方法对大鼠皮肤切创愈合过程中VEGF、TGF-β1的表达变化进行观察。结果:实验组VEGF、TGF-β1在创伤周围组织中的表达高于对照组及死后伤组(P<0.05);VEGF在创伤后3～24h主要在中性粒细胞、巨噬细胞和成纤维细胞中表达,阳性表达的强度与创伤后时间正相关;2d出现在新生肉芽组织血管内皮细胞、巨噬细胞及成纤维细胞中,呈强阳性表达,于伤后4d达到峰值;以后各组阳性细胞逐渐减少,呈弱阳性表达,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);TGF-β1的生前伤后变化规律与VEGF基本相似。结论:VEGF、TGF-β1在创伤修复过程中的表达呈现时序性规律,可以为法医学损伤时间推断提供一种新的指标。

对人和鼠腹部皮肤切创缘壁伤后不同时间纤维连接蛋白变化的研究

作者应用免疫组织化学 PAP 法对人体腹部4小时以内切创缘 FN 进行染色观察,发现在切创早期创缘 FN 随着时间延长就有明显变化。为法医鉴定早期切创时间提供了新的依据,同时还发现鼠和人腹部切创经过时间虽相同,但创缘 FN 染色强度却不同。

应用PAP法检测成人皮肤切创纤维连接蛋白推断损伤时间

应用PAP法，对15例成人腹部不同时间组（2小时以内）手术切创皮肤进行研究，观察Fn的分布、含量变化及其与损伤时间的关系；同时作H．E和Masson三色染色对比观察。结果发现：创伤即刻，创壁仅有少量Fn阳性颗粒；15分钟后，创壁表面Fn含量增多，呈薄层、断续的细条状；以后，随着时间延长，创壁表面Fn含量逐渐增多，呈连续细带状；至2小时，创伤局部Fn含量明显增多，创壁表面Fn是较宽带状，创壁内Fn亦增多，并是浓度梯度改变。PAP法检测Fn，可为鉴别生前与死后损伤、推断早期损伤时间，提供新的手段。

不同损伤时间大鼠皮肤切创Fos表达研究

目的研究皮肤切创在伤后不同时间段Fos的表达。方法在大鼠皮肤切创模型石蜡切片上进行Fos免疫组化染色。结果伤后10min,表达量开始增高,伤后3h达高峰,以后又逐渐降低,至损伤1d后,表达量与对照组无显著性差别。结论Fos为皮肤伤后的敏感指标,但需结合其他指标综合评价。

皮肤切创愈合过程中TLR2、TLR4表达及其法医学意义

目的探讨皮肤切创组织中单核-巨噬细胞TLR2和TLR4阳性表达与损伤时间的相关性,以寻找损伤时间推断的新方法。方法应用免疫组织化学技术研究45例不同损伤时间小鼠皮肤切创组织中TLR2、TLR4的表达情况,同时以3例正常小鼠皮肤组织作对照。结果皮肤切创组织中单核-巨噬细胞TLR2和TLR4阳性表达与损伤时间具有相关性。单核-巨噬细胞TLR2、TLR4阳性细胞比率(单核-巨噬细胞阳性细胞数与中性粒细胞、单核-巨噬细胞及成纤维细胞三种阳性细胞总数之比率)与损伤时间的回归方程分别为y=23.8099+0.9572x-0.0077x2+1.5×10-5x3(R2=0.872);y=25.2256+0.7893x-0.0059x2+1.0×10-5x3(R2=0.879)。结论TLR2、TLR4在小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区内单核-巨噬细胞阳性表达比率与损伤时间相关;检测损伤区单核-巨噬细胞TLR2、TLR4的表达可望成为推断损伤时间的新方法。

小鼠皮肤切创细胞因子的基因表达变化及其与损伤时间关系

目的 观察细胞因子在小鼠皮肤切创组织不同时间的基因表达变化及其与损伤时间的关系。方法用免疫组织化学染色法和RT-PCR法,检测小鼠皮肤切创组织中不同时间的白细胞介素-1α和-1β(IL-1α、-1βB),以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、吞噬细胞炎性蛋白-1α和-2(MIP-1α、-2)的基因表达变化。结果 皮肤切创后在早期可诱导IL-1α和IL-1β的基因表达,6h达第一次高峰,24h下降,第3d再次出现高峰后,第6d下降至正常水平;而MCP-1、MIP-1α和MIP-2则在损伤后6h左右开始出现,3d达高峰,然后呈下降趋势。在这些被检因子中,以IL-1α、IL-1β、MIP-1α和MIP-2的变化幅度较大,而MCP-1的变化相对较小。结论 切创组织中IL-1α、-1β和MCP-1,以及MIP-1α、-2的基因表达随伤后不同时间呈现一定规律性变化;同时对同一组织多种细胞因子检查推测损伤时间完全可行。

小鼠皮肤切创愈合过程中磷酸化 p38MAPK 表达及其与时间的相关性

目的探讨小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况,以及不同损伤时间p-p38MAPK的变化规律。方法应用免疫组织化学和Westernblot的方法检测33例小鼠皮肤切创后各个时间段p-p38MAPK表达情况。结果正常组织中有少量的p-p38MAPK表达。伤后3～12h损伤区p-p38MAPK主要表达于中性粒细胞中,1～5dp-p38MAPK阳性表达主要为单核细胞和成纤维细胞。7～14dp-p38MAPK阳性表达主要以成纤维细胞为主。阳性细胞率3～12h逐渐升高,1d有所下降,3、5d阳性细胞率保持在高水平,7～14d阳性细胞率逐渐降低。Westernblot显示各个时间段均有p-p38MAPK的表达。其中12h和3d为2个p-p38MAPK含量的高峰。结论在小鼠切创愈合过程中p-p38MAPK在损伤区对诱导中性粒细胞、单核细胞和成纤维细胞的凋亡起重要的作用,同时p-p38MAPK的规律性表达可用于损伤时间的推断。

人体腹部皮肤切创纤维蛋白渗出量变化与时间相关性的研究

本文应用组织化学Ｍａｓｓｏｎ三色方法，对人体腹部２小时以内皮肤切创壁纤维蛋白渗出量变化规律进行了研究，发现切刨早期创壁纤维蛋白沙出量随着时间的延续而明显增多，为推断早期切创时间，提供了新的较为简便的方法。

小鼠皮肤切创愈合过程中caspase-9、-3表达的研究

目的研究caspase-9、-3在小鼠皮肤切创愈合过程中的表达及其变化规律。方法在小鼠背部正中制作皮肤全层切创模型,应用免疫组化染色技术观察切创及切创周边区内caspase-9、-3的表达情况,以无切创的小鼠皮肤作为对照。结果对照组中caspase-9、-3表达于表皮层,毛囊及皮脂腺。伤后3h损伤区及损伤周边区中可见少量多核粒细胞表达caspase-9、-3,6~24h,部分浸润的多核粒细胞和单核细胞caspase-9、-3阳性,此后caspase-9、-3阳性细胞逐渐以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后caspase-9、-3阳性细胞率逐渐升高并在3d达到高峰,此后逐渐下降,至14d最低。结论caspase-9、-3可能引发正常小鼠皮肤表皮、毛囊和皮脂腺细胞的凋亡并参与正常皮肤细胞的自我更新;在小鼠皮肤切创愈合过程中,caspase-9、-3在多核粒细胞、单核细胞及成纤维细胞中表达,其时序性变化规律可望用于皮肤切创损伤时间的判定。

大鼠腹部皮肤切创缘电镜酶组织化学研究

大白鼠腹部皮肤切创组织电镜酶组织化学研究发现:三磷酸腺苷酶(ATPase)定位于皮肤毛细血管质膜内侧和毛囊外根鞘。生前损伤15分钟,毛细血管质膜 ATPase 活性降低,酶颗粒减少;毛囊外根鞘酶活性丧失。死后酶活性与对照组无差异。

水中切创创壁纤维蛋白的扫描电子显微镜观察

水中尸体损伤鉴定是法医损伤鉴定中的一个难题。水中尸体上的损伤由于受到水的浸泡和腐败作用，致使创壁受到影响，常规组织学检查和一些生化、生物测定所获得的结果也因此在很大程度上失去了可信性。七十年代以来，国外有学者报告了应用SEM观察生前、死后皮肤切创壁纤维蛋白的情况，借以推断生前伤和死后伤。

小鼠皮肤切创后不同时间的Tenascin免疫组化染色变化

目的 探讨小鼠皮肤切创愈合过程中Tenascin表达变化及其与损伤时间的关系。方法制作小鼠背部全层皮肤切创模型，于伤后1、3、6、12h，1、3、6、9、12d分别观察切创周围皮肤、创缘皮肤及创腔肉芽组织的Tenascin免疫组化染色反应，并用图像分析技术检测Tenascin阳性染色的平均光密度，所得数据用SPSSforWindows10．0软件包进行统计学分析。对照用无切创皮肤。结果对照组仅见真皮乳头、毛囊免疫组化染色弱阳性反应；伤后3h在切创周围的真皮乳头及毛囊Tenascin阳性染色增加；伤后12h明显增强，1～3d达最大值（0．336±0．061；0．282±0．017）；伤后6d染色强度开始减弱，9～12d基本恢复正常。创缘皮肤及创腔肉芽组织伤后3～6h开始出现Tenascin阳性着色，12h明显增强，6d达最大值（0．410±0．051；0．460±0．027）；伤后9d阳性着色开始减弱，12d基本恢复正常。结论小鼠皮肤切创愈合过程中产生的Tenascin随损伤时间呈现一定的规律性变化。

小鼠皮肤切创后calpain 1和calpain 2的表达

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中calpain1和calpain2表达变化。方法应用免疫组织化学染色技术检测小鼠皮肤切创后calpain1和calpain2的表达。结果对照组的calpain1和calpain2均有表达,伤后1d calpain1阳性细胞率显著增加,达最大值。伤后3d阳性细胞比率显著下降。伤后5d阳性细胞比率再次显著增加,以后逐渐下降。伤后1d calpain2阳性细胞比率显著增加,伤后3d阳性细胞比率显著下降,达最低值。伤后5d阳性细胞比率再次显著增加,达最大值。伤后7d至10d,阳性细胞比率逐渐下降。结论小鼠皮肤切创后,calpain1和calpain2的表达随愈合时间而呈现双峰式变化。

应用ELISA测定成人皮肤切创纤维连接蛋白

应用双抗体夹心酶联免疫吸附剂测定法（ELISA），定量研究了12例成人腹部2小时以内手术切创皮肤可检测的Fn。实验批内变异系数＜5％，批间变异系数＜10％，检测Fn浓度范围3．91～1000ng／ml。结果：成人腹部每克皮肤可检测Fn含量为7．5920±1．7364μg（M±SD）；随着损伤时间延长，不同时间段创伤局部皮肤Fn的含量逐渐升高；各不同时间段与损伤即刻皮肤Fn含量的差值和损伤时间之间存在直线相关（r=0．9843）。经方差分析处理，发现创伤局部皮肤Fn含量在损伤经历30分钟后，有显著增加。本此结果可为推断切创形成的时间提供参考数据。

Wistar大鼠早期切创创壁肌肉的透射电镜观察

目的 :探讨早期切创创壁肌肉损伤病变及发展过程 ,为法医学鉴定早期损伤时间提供病理学基础。方法 :用手术刀切开Wistar大鼠大腿肌肉 ,分别于即刻、1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟及 6 0分钟与死后不同时间作对照 ,在电镜下观察其形态改变。结果 :即刻时透射电镜观察肌肉未见异常 ;损伤 1分钟、5分钟和 15分钟时透射电镜观察肌肉 ,线粒体水肿空泡化从无到有 ,肌原纤维小灶性坏死随时间推移逐渐加重 ,肌原纤维间隙增宽越来越明显。损伤 30分钟、45分钟和 6 0分钟时 ,线粒体水肿空泡化更加严重 ,嵴消失 ,肌原纤维缩短呈波浪状改变 ,坏死、断裂并浓缩成块状 ,肌丝排列紊乱。核异质多 ,不规则 ,核周出现空泡 ,染色质均质化 ,肌浆见大量不等空泡 ,肌纤维大量坏死。死后损伤超生反应及波浪状改变以 15分钟时段最为明显。结论 :提示早期创壁肌肉损伤后不同时间各有其形态学特征 ,这为早期损伤时间推断的法医学鉴定提供了病理形态基础。

人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合中相关因素的研究

目的观察人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合过程中感染率的影响及VEGF(血管内皮生长因子)、TGF-β(转化生长因子β)表达的研究,探讨其促进皮肤愈合及减少瘢痕形成的机制。方法将40只雄性大鼠随机分成2组:每组20只,分为对照组与羊膜组。腹腔麻醉后,在背中线旁约1cm处做约4cm长的纵行切口,深达肌层,止血后间断缝合皮肤及皮下组织,对照组用纱布覆盖切口并包扎;羊膜组将处理过的羊膜直接贴敷在切口表面,纱布覆盖包扎。大鼠分笼饲养,给予消毒饲料及双蒸水,于切创后2、3、5、7d将大鼠脱颈椎处死,取切口处1.5cm×1.0cm皮肤组织,放入4%多聚甲醛中固定12h。固定后石蜡包埋,连续5m厚度切片,免疫组化分析VEGF、TGF-β的表达。结果 (1)2d及3d组TGF-β创口边缘表达:羊膜组TGF-β在创口边缘表达较对照组减少P<0.05。5d及7d组TGF-β表达实验组及对照组无明显区别。(2)羊膜组感染率(25%),较对照组感染率(50%)减少。(3)VEGF创口边缘表达:羊膜组与对照组比较P>0.05无统计学意义。结论 (1)羊膜贴附创口能减少TGF-β的表达但对VEGF创口边缘表达无影响。(2)羊膜贴附创口能减少创口的感染率。

颈部挑切创的法医学鉴定(附1例报告)

近年来,我们从工作实践中总结了刺器刺入颈部挑切颈前软组织杀人致死案的尸检经验,本文结合案例进行分析,现报告如下.

一种可靠的切创施力方向判断法

在法医检案中,切创较常见。确定受害人与加害人当时所处位置及状态,以分析作案过程和判定案件性质,均须确定切创的施力方向。笔者在多年的实践中发现,大凡切创,其起点创角处皮下组织充实,有时在创角内有一较长未损伤的皮下组织,而落点创角下沿创轴有一横行的创腔,其上壁为皮肤(见图1)。

红花注射液保存人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合中MMP-2,MMP-9影响的研究

目的:研究经红花注射液保存后的人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合过程中基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase-s,MMPS)-2,9表达的影响,探讨其促进切口愈合的机制,为其在临床的应用提供理论依据。方法:建立大鼠皮肤切创模型,观察切口愈合时间、感染率;在各时相点处死取材,应用免疫组织化学技术,通过计算机图像分析系统检测人胎羊膜对不同损伤时间大鼠皮肤组织中MMP-2,MMP-9的表达。结果:创后12h、1d、2d、3d,红花+羊膜组创缘周围MMP-2,MMP-9表达,较其他三组明显增强(P<0.05);红花+羊膜组感染率(5%)较其他三组明显减少(P<0.05)。结论:经红花注射液保存后的人胎羊膜在大鼠皮肤切创愈合过程中,可促进创缘周围MMP-2,MMP-9的表达;将其贴附创面能明显减少创口的感染率、促进创口的愈合。