Mg^(2+)和Na^+对多核酶系统体外切割反应的影响(英文)

为了进一步了解2价Mg2+和1价Na+存在与否的情况下,多核酶系统对底物RNA的切割效率,构建了pGEM-Coat′A,pGEM-Coat′A196Rz质粒和pGEM-MDR1靶质粒.通过用SP6/T7转录试剂盒在体外转录RNA,在无细胞系统进行切割反应,反应产物通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,干胶、X光片曝光自显影,利用ImageJ生物图像分析软件分析.结果表明,多核酶系统的切割效率依赖于二价Mg2+的浓度,切割产物随Mg2+浓度的增加而增加,而且具有反应时间的依赖性.在Na+浓度低于200mmol/L且单独存在时,没有切割产物生成.相反,在Na+和Mg2+共存时,表现出Na+抑制Mg2+诱导的切割活性,切割效率明显低于Mg2+单独存在时的结果.这些结果提示,在生理环境下,Mg2+对于多核酶系统对底物的切割反应是必需的,而Na+则不是.

微量热法研究10-23脱氧核酶切割反应的热动力学

选用乙型肝炎病毒(HBV)前区C/C区2031位点的序列作为底物RNA片段,并合成相应的10-23脱氧核酶,然后用微量热法研究10-23脱氧核酶的热动力学。在近生理条件下,通过微量热法测定10-23脱氧核酶切割反应的热动力学参数。根据热流曲线得出底物RNA不同浓度的反应初速率v0,再作出v-[S]曲线,通过Lineweaver-Burk作图得出10-23脱氧核酶切割反应的最大速率vmax为2.5×10-9mol/(L.s)、米氏常数Km为0.045nmol/L、催化常数Kcat为0.107min-1。

基于切割反应的二茂铁类荧光探针的设计及其在次氨酸的细胞成像分析中的应用

次氯酸（HOCl）是一种重要的活性氧（ROS）物种。在噬菌细胞中，髓过氧化物酶-H2O2-Cl^-体系产生的HOCl可杀死病原体，但强氧化性的HOCl也会对生物体产生损伤，并与一系列疾病相关。因此，设计合成HOCl的高选择性荧光探针，进而发展在体、成像分析方法对于深入揭示HOCl的生物功能具有重要的意义。

分子信标核酶探针用于核酶切割反应的实时监测

发展了一种新型分子信标核酶探针用于核酶切割反应的实时监测.该探针由核酶底物修饰构建而成,它将核酶切割反应的信息实时同步转换为荧光信号.与已有研究方法比较,是一种非同位素标记、高灵敏高特异的核酶切割反应实时监测方法.为核酶活性分析、核酶动力学研究提供新型有效的手段,也为核酶在基因治疗中的深入研究提供了全新的方法和思路.应用该探针,快速、实时监测了丙型肝炎病毒核酶的切割效率.

菲咯啉铜切割DNA反应的微量热法研究

利用流动式和间歇式微量热法研究了菲咯啉铜(Ⅱ)-巯基乙醇-O_2体系切割小牛胸腺双链DNA(ds DNA)反应的热力学,确定该DNA断链的总反应为较快的放热反应和焓驱动的反应,但该反应的前期为快速吸热过程,310.15K和pH=7.0时该反应的总摩尔反应焓(△_rH_(m,3))和前期摩尔反应焓(△_rH_(m,1))分别为-35.1和7.29kJ·mol^(-1).同时采用琼脂糖凝胶电泳法观察到了菲咯啉铜(Ⅱ)-巯基乙醇-O_2体系对DNA链的断裂现象.

博莱霉素切割DNA反应的定量测定及其影响因素

用硫代巴比妥酸反应分析了博莱霉素 Ａ５ （ Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ ）对 Ｄ Ｎ Ａ 的断裂作用在 Ｆｅ２＋ 和 Ｏ２存在下， Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５能导致 Ｄ Ｎ Ａ 链断裂研究了一些因素对 Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ 催化 Ｄ Ｎ Ａ 断链反应的影响，设计并建立了 Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ 切割 Ｄ Ｎ Ａ 反应的定量测定方法，并测得 Ｋｍ 约为１５３ μｍ ｏｌ· Ｌ－ １， Ｖｍ ａｘ 约为００４６ Ａ５３２ｎｍ Ｕｎｉｔ·ｓ－ １

分子信标用于平阳霉素切割DNA反应的实时监测

报道了一种实时监测平阳霉素(BLM A5)氧化切割DNA过程的荧光分析方法。利用分子信标核酸探针作为BLM A5底物和探针分子,通过检测BLM A5切割分子信标反应过程中荧光信号的变化,实现了对BLM A5在Fe2+和O2介导下切割DNA反应的实时监测。同时,考察了一些金属离子和抗肿瘤药物对BLM A5切割DNA反应的影响。在此基础上建立了一种快速、灵敏的BLMA5定量测定方法,线性响应范围为0.05～1.0μmol/L。

全反式维甲酸合钇(Ⅲ)配合物对DNA的切割和键合作用(英文)

以紫外光谱、荧光光谱、粘度法和凝胶电泳方法研究了全反式维甲酸合钇!配合物与DNA的作用。结果表明,该配合物能在生理条件下比配体和金属离子更有效地切割质粒DNA,体系离子强度和pH值的变化对配合物的切割活性有较大影响,自由基捕捉剂的加入不影响配合物的切割活性。该配合物对DNA的切割可能通过水解机理进行。该配合物可使DNA的粘度增加,使EB-DNA体系的荧光强度和DNA溶液的紫外吸收强度降低。据此推断,该配合物主要以嵌入方式与DNA作用。

二(2-苯并咪唑亚甲基)胺合锰(Ⅱ)配合物水解切割DNA

本文合成并表征了二(2鄄苯并咪唑亚甲基)胺合锰髤配合物。我们利用凝胶电泳实验研究,发现该配合物在近生理条件下,能有效地切割双链pBR322DNA。通过采用在反应体系中加入自由基清除剂,无氧操作实验,脱水丙二醛产物分析,以及T4DNA连接酶连接实验等方法,确认该切割反应是通过水解途径进行的。进一步地,我们对切割反应进行了较详细的动力学研究,求出其催化速率常数Kcat为0.72±0.02h-1(pH=8,37℃)。

增生性糖尿病视网膜病变玻璃体切割术后玻璃体再出血危险因素分析

目的分析增生性糖尿病视网膜病变(PDR)患者玻璃体切割手术(PPV)后玻璃体再出血(PVH)的危险因素。方法采用病例对照研究方法,选择2012年6月至2019年5月于天津医科大学眼科医院收治的首次行PPV治疗的PDR伴玻璃体积血(VH)患者1848例1848眼,其中男979眼,女869眼;平均年龄(55.72±10.39)岁。所有患眼均行经睫状体平坦部标准三通道PPV。术后随访6~24个月,平均(379.34±231.28)d。按PPV术后是否发生PVH分为PVH组和无PVH组,再根据PVH发生时间分为早期PVH组和晚期PVH组。1848例1848眼中PPV后发生PVH 170眼,占9.19%,其中早期PVH 30眼,晚期PVH 140眼,发生时间为术后6~450 d。纳入统计分析的基线因素包括性别、年龄、糖尿病病程、手术前糖化血红蛋白(HbA1c)等;眼部因素包括术前是否完成全视网膜激光光凝、术前3 d是否抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗、晶状体状态、是否合并虹膜新生血管(NVI)等;手术因素包括术中是否发现视盘新生血管(NVD)伴出血、是否联合白内障超声乳化、手术结束时是否行玻璃体腔内注射抗VEGF药物治疗等。采用二元多因素Logistic回归分析PDR伴VH患者PPV术后PVH的危险因素。结果多因素Logistic回归分析显示,年龄(OR=0.940,P<0.01)、术前高HbA1c水平(OR=1.878,P<0.01)、合并视网膜静脉阻塞(RVO)(OR=8.310,P<0.01)、糖尿病饮食控制血糖(OR=3.030,P=0.019)、糖尿病病程(OR=1.044,P<0.01)、高血压病史(OR=1.802,P<0.01)、合并肾脏或心脑血管疾病(OR=18.377,P<0.01)、术前合并NVI(OR=7.488,P<0.01)、未联合白内障超声乳化手术(OR=1.628,P=0.023)、NVD伴出血(OR=2.691,P<0.01)、术毕玻璃体腔内注射抗VEGF药物治疗(OR=0.181,P<0.01)、术毕玻璃体腔无菌空气填充(OR=1.901,P=0.024)与PVH相关。早期PVH组和晚期PVH组术前基线、眼部和手术因素等指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论低龄、术前高HbA1c、合并RVO、糖尿病饮食控制治疗、糖尿病病程、高血压病史、合并肾脏或心脑血管疾病、术前合并NVI、未联合白内障超声乳化手术、NVD伴出血、术毕未行玻璃体腔内注射抗VEGF药物治疗、术毕玻璃体腔无菌空气填充是PDR伴VH患者PPV术后发生PVH的危险因素。

激光切割技术在制造业中的应用研究

在现代制造业中,激光切割技术是一种先进且常用的技术形式。为了实现激光切割技术在现代制造业中的合理运用,以满足实际运作及发展需求,文章针对该项技术的应用进行深入探讨,概述了激光切割技术的基本情况,介绍了激光切割技术主要类型,并探讨了激光切割技术在制造业中的具体应用及发展方向。经研究发现,激光切割技术在当今的金属材料加工、非金属材料加工以及其他材料加工中都具有较强的应用优势。希望通过本次的分析,可以为激光切割技术的应用与现代制造业的发展提供一定参考。

U6嵌合型抗caspase-3核酶的体外及体内活性鉴定

为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３基因在细胞凋亡中的作用，及不同表达核酶的载体在体内的 表达效果，本研究对比了３种表达核酶的真核质粒，包括 ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动的 ｐｌ．５ＲＺ１０７（自我剪切）和ｐＲＺ１０７及ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动的嵌合于Ｕ６中的ｐＵ６ＲＺ１０７在 体外和在肝细胞ＢＲＬ－３Ａ内的活性，以期获得细胞内切割活性较高的的核酶载体方面 的信息．结果显示，具有自我剪切功能的质粒ｐ１．５ＲＺ１０７在体外切割靶ＲＮＡ的效率最 高，几达８０％；而体内ｃａｓｐａｓｅ－３在ＲＮＡ，蛋白水平及蛋白功能活性上均显著下降，证明 核酶在体内均可有效地表达并切割底物，以ｐＵ６ＲＺ１０７切割效率最高，约达６５％， ｐＲＺ１０７次之，ｐｌ．５ＲＺ１０７最低．结果表明，Ｕ６嵌合型核酶ｐＵ６ＲＺ１０７体内可有效地表 达核酶及下调靶ＲＮＡ水平，这不仅为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３在凋亡途径中的作用，也可为今后 的基因治疗提供研究基础．

脱氧核酶抑制近日基因period1表达的实验研究

研究脱氧核酶对近日钟基因period1(per1)表达的影响,进而寻找治疗和近日节律有关疾病的基因疗法.设计合成针对per1的脱氧核酶DRz164,DRz256,并构建pcDNA3-per1164:256体外转录载体,将转录产物和脱氧核酶混合,在一定反应条件下进行体外切割反应,地高辛酶联免疫及酶催化显色法检测脱氧核酶的体外切割效率.将pcDNA3-per1和DRz164或DRz256在脂质体的介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测脱氧核酶对近日基因表达的影响.于37℃孵育2h后,DRz164对底物的剪切百分率为63%,DRz256为50.5%.RT-PCR半定量检测per1mRNA表达水平明显下降,FCM结果显示细胞内Per1蛋白的合成受到抑制.脱氧核酶DRz164,DRz256体外具有定点切割近日钟基因per1mRNA组分的活性,使转染细胞per1mRNA和Per1蛋白表达下降.