基于RNA-Seq数据分析环格列酮和胰岛素诱导延边黄牛前脂肪细胞分化的差异表达基因

试验旨在探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARγ)激动因子(环格列酮)和胰岛素对延边黄牛前脂肪细胞脂质代谢的影响及可能的调控机制。试验分为对照组(CON,5%FBS)、胰岛素处理组(I组,5%FBS+10 mg/L胰岛素)、环格列酮处理组(C组,5%FBS+10 mg/L环格列酮)、胰岛素+环格列酮处理组(IC组,5%FBS+10 mg/L胰岛素+10 mg/L环格列酮)。各组处理144 h,通过RNA-Seq技术对其进行转录本测序,差异表达基因进行GO功能注释和KEGG富集分析。差异表达基因分析结果显示,与对照组相比,IC组差异表达基因数量为1764个,比I和C组分别多276和569个,3个试验组间共有371个差异基因;IC组上调基因数量为974个,分别比I和C组多140和249个,IC组下调基因为790个,I和C组下调基因分别为654和470个。差异基因的GO分析表明,各处理组的差异基因参与了细胞过程、代谢过程以及生物过程的调节;在分子功能上,主要是分子功能调节剂、转运活性、转录调节活性等;在细胞成分上,大多数差异基因被富集到细胞器、细胞膜及胞外区等。KEGG通路分析发现,差异表达基因主要富集在FoxO、PPAR、TGF-β、p53等信号通路。综上所述,胰岛素和环格列酮单独处理与二者共同处理对延边黄牛前脂肪细胞分化的调控机制有所差别,其中二者共同处理对分化的促进作用更加明显。本研究结果为研究环格列酮与胰岛素在调节脂肪生成中的功能和分子机制提供了依据。

硫化氢、同型半胱氨酸和环格列酮对胱硫醚-γ-裂解酶基因及蛋白表达的影响

目的:探讨硫化氢、同型半胱氨酸及环格列酮对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)基因及其蛋白表达的影响。方法:应用不同浓度的硫氢化钠(300、1 000μmol/L)、同型半胱氨酸(10、100、1 000μmol/L)及环格列酮(10、100μmol/L)作用于HUVEC,48 h后提取细胞总RNA,应用荧光定量PCR(realtime fluores-cence quantitative PCR,RTFQ PCR)及蛋白质印迹技术(Western blot)检测CSE基因和蛋白表达的变化。结果:硫氢化钠在生理浓度(300μmol/L)时可增加HUVEC CSE基因及蛋白的表达(P<0.05)。高浓度同型半胱氨酸引起HUVEC CSE基因及蛋白表达减弱(P<0.05)。环格列酮适宜浓度(10μmol/L)时也可增加HUVEC CSE基因及蛋白的表达(P<0.05)。结论:高浓度同型半胱氨酸对细胞水平上CSE的转录与翻译有抑制作用。从基因水平和蛋白质水平检测发现硫化氢和环格列酮可以调节CSE的转录与翻译,并可逆转高浓度同型半胱氨酸对CSE的作用。

PPAR-γ激动剂环格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨应用过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂环格列酮减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及其量效关系。方法70只健康SD大鼠建立心肌缺血再灌注模型后,随机分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、环格列酮组1(cig1组)、环格列酮组2(cig2组)、环格列酮组3(cig3组),每组14只。各组中又随机分为两个亚组。亚组1(6只)在缺血30min、再灌注120min后,以Evans blue、NBT双重染色法测定心肌梗死面积;亚组2(8只)以生物信号分析系统监测记录缺血1、30min,再灌注后1、30、60、90、120min各时间点的左室舒张末压(LVEDP)、左室内压(LVSP)及左室内压发展最大速率(±dp/dt)等血流动力学指标。实验结束时取心肌组织,光镜下观察心肌组织损伤情况,免疫组化法检测心肌组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,比色法测定心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与S组比较,I/R组大鼠心肌梗死面积增大,心肌MPO活性升高、中性粒细胞(PMN)浸润严重,心肌细胞因子TNF-α、IL-6含量明显增多,心肌组织高表达ICAM-1(均P<0.01)。Cig各组缺血前60min预先应用PPAR-γ激动剂环格列酮可减小心梗范围,改善心脏舒缩功能,降低心肌MPO活性及心肌TNF-α、IL-6含量,并能抑制心肌组织ICAM-1的表达,起到减轻MIRI的作用。结论PPAR-γ激动剂环格列酮通过减少PMN浸润,降低心肌促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量,抑制心肌ICAM-1的表达,从而减少心肌缺血再灌注时心肌梗死面积,改善心脏舒缩功能,起到保护心肌的作用。

添加环格列酮对延边黄牛骨骼肌卫星细胞成脂转分化的影响

试验旨在探究过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂(环格列酮)对延边黄牛骨骼肌卫星细胞成脂转分化的影响。试验分为4组:对照组(CON,不添加环格列酮)、CL组(5μmol/L环格列酮)、CM组(10μmol/L环格列酮)和CH组(20μmol/L环格列酮),利用不同浓度环格列酮处理骨骼肌卫星细胞96 h后,通过油红O染色法和甘油三酯的测定来验证脂滴的形成,并使用实时荧光定量PCR和Western blotting测定基因表达和蛋白质定量的变化来验证脂肪细胞的生成。甘油三酯测定和油红O染色显示,与对照组相比,添加环格列酮后,骨骼肌卫星细胞内有脂滴生成,且脂滴形成量和甘油积累量与环格列酮添加量呈正相关。实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明,与对照组相比,环格列酮组显著增加了成脂转录因子PPARγ、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)和围脂滴蛋白-2(PLIN2)基因的表达,显著下调了成肌相关因子MyoD的表达(P<0.05),且所有蛋白与基因表达趋势保持一致,表明环格列酮可以促进牛骨骼肌卫星细胞向脂肪细胞分化。

扇蜗同心环组合式相控阵列的超声场优化

以扇蜗同心环组合式相控阵列为研究对象,推导出超声场的计算公式,以及伪逆矩阵算法的超声合成方法。结合遗传算法,以强度增益作为适应度函数,通过改变声压的相角搜索其空间最优解,采用MATLAB编程仿真分析声场优化。结果显示:聚焦效果理想,焦平面位于几何焦点处;峰值尖锐,声强较大;焦点尺寸和旁瓣小。

维格列汀的空间构型与稳定性的关系

探讨维格列汀的空间结构及其稳定性的关联性。研究采用溶剂挥发法培养得到维格列汀的单晶,运用X射线单晶衍射技术对其立体结构进行解析。该化合物晶态下分子间存在氢键作用,相邻分子间凭借一对氢键形成类二聚体结构,以范德华力和氢键维系其在空间的稳定排列。质量标准中维格列汀的pH为9.7~10.7,因而在碱性和一定湿度下,在辅料微晶纤维素的作用下,破坏分子结构中的氢键,金刚烷上氨基碱性增强,易于进攻吡咯烷上氰基进而环合,这可能是长期放样或加入微晶纤维素,易产生杂质维格列汀环脒的原因。

环格列酮通过PPARγ及P38 MAPK信号途径诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂环格列酮（CGZ）对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法 以不同浓度的CGZ（10～50μmol/L）作用于体外培养的HL-60细胞24、48、72 h,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞生长抑制率,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡时的DNA梯状条带,流式细胞术（FCM）及膜联蛋白V（Annexin-V）/碘化丙啶（PI）双染色法检测CGZ单独及联合PPARγ拮抗剂GW9662作用后细胞凋亡率的变化,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western印迹检测药物作用后PPARγ表达水平的变化,并对半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路相关蛋白的表达水平进行检测.结果 30 μmol/L以上的CGZ可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系.药物作用后72 h50 μmol/L CGZ对细胞的生长抑制率为84%±11%,明显高于40、30μmol/L CGZ对细胞的生长抑制率（72%±13%、59%±13%,P＜0.01）,而且药物作用72 h后在琼脂糖凝胶电泳上可见典型的DNA梯状条带.RT-PCR及Western印迹结果表明,作用72 h后随着药物浓度的升高,PPARγ mRNA及蛋白的表达水平均逐渐升高,5μmol/L GW9662可以部分阻滞PPARγ的表达.FCM检测结果显示,CGZ（50 μmol/L）诱导的细胞凋亡只能部分被GW9662所阻滞（药物作用后72 h,CGZ诱导的细胞凋亡率为49.7%,CGZ＋GW9662的细胞凋亡率为36.2%,未加药对照组为3.2%）.Western印迹检测结果显示,MAPK信号途径中磷酸化P38（p-P38）的表达水平随药物浓度逐渐升高,同时caspase-3被活化出现相对分子质量为20 000的亚单位.结论 CGZ可以通过PPARγ依赖性和非依赖性途径诱导HL-60细胞凋亡,通过caspase-3活化以及激活P38 MAPK信号途径是CGZ诱导白血病HL-60细胞发生凋亡的重要作用机制之一.

核转录因子-κB圈套寡核苷酸对环格列酮诱导肺癌细胞分化作用的影响

目的 探讨核转录因子 κB(NF κB)圈套寡核苷酸在环格列酮对肺癌细胞A549增殖抑制和分化调控过程中的影响。方法 运用基因转染技术将NF κB圈套寡核苷酸转入人肺癌细胞A549中 ,凝胶阻滞分析实验 (EMSA)检测转染前后NF κB活性的变化 ,免疫印迹观察转染前后多药耐药蛋白 (mdr1)的变化。进而以 10 0 μmol/L环格列酮处理转染和未转染的细胞 1～ 4d ,生长曲线观察A 549细胞生长 ,流式细胞仪进行细胞周期分析 ,免疫印迹观察处理前后细胞周期素D1的变化。结果 (1)EMSA显示转染后NF κB活性明显下降 ,mdr1蛋白表达水平降低。 (2 )环格列酮能抑制A549细胞增殖。 (3 )转染NF κB圈套寡核苷酸增强环格列酮对A549细胞增殖的抑制作用 ,更多的细胞被阻滞于G1/G0 期 ,细胞中细胞周期素D1的水平更低。结论 NF κB圈套寡核苷酸能增加肺癌细胞A549对环格列酮的敏感性 ,即NF κB圈套寡核苷酸能协同环格列酮抑制肺癌细胞A

Experimental Study on Prevention and Treatment of Rat Passive Hermann Nephritis (PHN) with Ligustrazine

Objective: To explore the effects of ligustrazine on proteinuria, serumcreati-nine, urinary thromboxane A_2(TxA_2), metabolism of prostacyclinI_2(PGI_2)―6-keto-PGF_(1α), and renal pathological changes of SD rats with passive Hermannnephritis (PHN). Methods: The PHN model was induced by intravenous injection of rabbit anti-ratrenal tubular epithelial antigen (Tub―Ag) an-tiserum to SD rats. I. P. administration ofligustrazine to rats was given every 2 d for 1 to 5 weeks. The proteinuria, creatinine, TxA_2 and6-keto-PGF_(1α) were measured by sulfosaticylic acid, picric acid, and direct radioimmunoassayrespectively. The renal pathological changes were observed under light microscope, electronicmicroscope and by direct immunofluorescence staining rabbit and rat IgG. Results: The PHN ratstreated with ligustrazine had significantly less proteinuria, serum creatinine, urinary TxA_2 andpathological changes of kidney, and more urinary 6-keto-PGF_(1α) than those without administrationof ligustrazine. Conclusion: Ligustrazine decreases proteinuria, urinary TxA_2, and renal tissueinjury and increases urinary 6-keto-PGF_(1α). These data indicate that ligustrazine may modulatethe balance of TxA_2 and PG I_2 in rat PHN model and can be used for preventing and treatingmembranous glomerulonephritis.

ciglitazone对巨噬细胞CD36表达及胆固醇流入的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)的激动剂ciglitazone对THP-1巨噬细胞CD36表达及细胞胆固醇流入的影响。方法:以THP-1巨噬细胞为研究对象,用50 mg/L氧化低密度指蛋白(oxLDL)分别与不同浓度的PPARγ激动剂ciglitazone(0、5、10、15μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24 h后,采用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入,采用逆转录-聚合酶链式反应和Western blot分别检测CD36的表达。结果:oxLDL及不同浓度的ciglitazone与THP-1巨噬细胞共孵育后,与对照组比较(20.3%),加ciglitazone的处理组胆固醇流入随着浓度的增加而依次增加,分别为28.6%、37.2%、44.3%、48.7%,细胞CD36的表达上调。结论:ciglitazone可上调THP-1巨噬细胞CD36的表达,并增加细胞胆固醇流入。

环格列酮和油酸对延边黄牛脂肪细胞分化的影响

为探讨环格列酮和油酸对延边黄牛脂肪细胞分化的影响,试验采用胶原酶消化法在无菌条件下分离获得延边黄牛脂肪细胞,进行传代及诱导分化,观察细胞生长状态,绘制细胞生长曲线,通过油红O染色法及实时荧光定量RT-PCR方法研究环格列酮和油酸在延边黄牛脂肪细胞分化过程中的作用,对脂滴形成以及与脂肪细胞分化相关的主要标志基因PPARγ,SREBP1,C/EBPβ及SCD mRNA表达量的影响。结果表明:在不同分化处理144 h后,各处理组均可观察到有脂滴形成。其中,环格列酮单独处理时,显著提高了PPARγ、C/EBPβ和SCD基因mRNA的相对表达量(P<0.05);添加油酸后144 h,PPARγ基因的mRNA表达量与对照相比显著升高(P<0.05),SCD基因mRNA的表达量显著降低(P<0.05);同时添加环格列酮和油酸处理144 h后,PPARγ基因的mRNA表达量显著提高(P<0.05),但SREBP1和C/EBPβ及SCD基因的mRNA表达量无明显变化,说明在延边黄牛脂肪细胞的分化过程中,环格列酮和油酸对脂滴的形成及主要转录因子的表达量变化有着重要的调节作用。

共同富裕:理想与现实的统一

一、实现共同富裕是中国社会现实的要求 邓小平同志指出:“社会主义时期的主要任务是发展生产力,使社会物质财富不断增长。人民生活一天天好起来,为进入共产主义创造物质条件”(《邓小平文选》第3卷第171页)。但是,共同富裕不是一朝一夕可以实现的,它必须经过现实的努力,经过一系列环节。从中国经济发展的现状看,实现共同富裕的首要步骤就是要消灭贫困。而消灭贫困,正如江泽民同志在1994年3月3日召开的全国扶贫开发工作会议上所说。

日美企业人力开发的绝招

在企业人财物诸要素、产供销诸环节中,人是关键因素,处于核心位置。无论是经营活动,还是管理过程,都需要人去掌握和推动。一个经营管理的系统,实质上是一个人力使用系统。人力开发就是对人的智力技能进行开发,它包括使用、培养、考核、选拔等一系列环节。现代心理学研究表明,在现代工业条件下,人的智慧和潜力只发挥了一小部分,企业经营者的责任。

科普天地

随着科学技术和商品经济的发展,人类不断总结经验,超越自我,用自己的聪明才智和辛勤劳动,创造了巨大财富,积累了丰富的科学技术知识,使生产力得到极大的提高,但一味追求经济快速发展,同时也带来了资源浪费、生态破坏等一系列环境问题。使人类居住的环境产生了恶化,从以下几方面可以看出:

Acer专栏

日前,Acer宏碁电脑集团的台湾新竹厂及菲律宾苏比克湾厂同获ISO14001世界环境管理系统认证,此项认证表明宏碁集团在产品设计、制造、销售及废弃物处理等各环节的工作都符合最先进的国际环保规范,同时显示出Acer宏碁集团作为全球前三大制造厂商的国际化大企业的风范。 ISO14001系列环境管理标准是由联合国所属的国际标准化组织(ISO)制订,主要内容包括环境管理系统、环保核查、环保绩效的评估、生命周期分析、产品标准的环境考量等七大项。其目的在于敦促全球产业界重视环境污染问题,从原料的采购、生产过程、能源消耗及产品的包装与回收上都要符合环保的标准。此项认证已在业界逐渐形成一种共识,未来先进国家对于进口的产品。

Combined effect of hydroxypropyl-β-cyclodextrin and media pH on the solubility of prostaglandin E_1

Aim To investigate the combined effect of hydroxypropyl-β-cyclodextrin （HP-β-CD） and media pH on the solubility of prostaglandin E1 （PGE1） and construct a theoretical equation for the drug solubility as a function of HP-β-CD concentration and media pH. Methods The solubility of PGE1 under different pH conditions was determined. Then, the drug solubility in different concentrations of HP-β-CD acidic or pH neutral solutions was measured, respectively. Finally, a theoretical solubility equation for the drug as a function of HP-β-CD concentration and media pH was deduced and confirmed in experiment. Results PGEs was solubilized by HP-β-CD or by increasing media pH. The drug solubility as a function of HP-β-CD concentration was found to follow the AL-type complexation model in acidic or neutral pH media, suggesting that both the ionized and neutral drugs form 1：1 molecular ratio complexes. Conclusions The solubility of PGE1 may be improved by increasing media pH or by using HP-β-CD as a solubilizer. HP-β-CD and media pH can produce combined effect on the solubility of PGE1. The deduced equation for the drug solubility in this study effectively characterizes the roles of HP-β-CD and media pH in determining total solubility of the drug.

三种噻唑烷二酮类药物对宫颈癌细胞增殖的影响

目的探讨吡格列酮、罗格列酮以及环格列酮三种TZDs对宫颈癌细胞(CCCs)增殖的影响以及潜在的分子机制。方法分别以0μM、2. 5μM、5μM以及10μM浓度的吡格列酮、罗格列酮以及环格列酮刺激人宫颈癌细胞系HeLa(HPV 18+),CCK-8方法检测细胞增殖,油红O染色分光光度计法检测脂肪累积,实时定量PCR检测PPARγmRNA的表达。结果 2. 5μM和5μM的吡格列酮、5μM的环格列酮、以及10μM的TZDs在刺激第5天时均可显著抑制CCCs的增殖(P <0. 05)。吡格列酮与20μM顺铂或者100μM的5-氟尿嘧啶联合刺激比单独10μM吡格列酮刺激更能显著抑制CCCs的增殖(P <0. 05)。10μM的TZDs均可显著增加CCCs中脂质的累积(P <0. 05)。2. 5μM、5μM和10μM的TZDs刺激CCCs 5 d,均可显著增加PPARγmRNA的表达(P <0. 05)。结论三种TZDs均可抑制CCCs的增殖,其机制可能与TZDs通过促进PPARγ的表达进而增加癌细胞中脂质的累积有关。

荷叶生物碱对THP-1源性巨噬细胞CD36及PPARγ表达的影响

目的观察荷叶生物碱对THP-1源性巨噬细胞CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨荷叶生物碱干预CD36表达及其信号传导途径。方法 THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后,随机分为四组:空白对照组、ox-LDL组、荷叶生物碱组、环格列酮组,油红O染色观察THP-1巨噬细胞内脂质变化,RT-PCR和Western blot检测CD36和PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,经ox-LDL干预后,THP-1巨噬细胞内脂质蓄积增加,CD36和PPARγ的表达增加;与ox-LDL组比较,经荷叶生物碱干预后,THP-1巨噬细胞内脂质积蓄减少,CD36和PPARγ的表达减少;与荷叶生物碱组比较,经环格列酮干预后,THP-1巨噬细胞内脂质无明显变化,CD36和PPARγ的表达增加。结论荷叶生物碱通过下调CD36的表达抑制巨噬细胞泡沫化进展,荷叶生物碱可能是通过下调PPARγ来抑制CD36的表达。

Receptor activator of NF-κB Ligand （RANKL） expression is associated with epithelial to mesenchymal transition in human prostate cancer cells

Epithelial-mesenchymal transition （EMT） in cancer describes the phenotypic and behavioral changes of cancer cells from indolent to virulent forms with increased migratory, invasive and metastatic potential. EMT can be induced by soluble proteins like transforming growth factor β1 （TGFβ1） and transcription factors including Snail and Slug. We utilized theARCaPE/ARCaPM prostate cancer progression model and LNCaP clones stably overexpressing Snail to identify novel markers associated with EMT. Compared to ARCaPE cells, the highly tumorigenic mesenchymal ARCaPM and ARCaPM1 variant cells displayed a higher incidence of bone metastasis after intracardiac administration in SCID mice. ARCaPM and ARCaPM1 expressed mesenchymal stromal markers of vimentin and N-cadherin in addition to elevated levels of Receptor Activator of NF-κB Ligand （RANKL）. We observed that both epidermal growth factor （EGF） plus TGFβ1 treatment and Snail overexpression induced EMT in ARCaPE and LNCaP cells, and EMT was associated with increased expression of RANKL protein. Finally, we determined that the RANKL protein was functionally active, promoting osteoclastogenesis in vitro. Our results indicate that RANKL is a novel marker for EMT during prostate cancer progression. RANKL may function as a link between EMT, bone turnover, and prostate cancer skeletal metastasis.