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颈部2个皮纹切口与传统“L”形切口颈淋巴结清扫术对机体血清创伤细胞因子的影响 被引量:2
1
作者 耿中利 王薇 +3 位作者 单美慧 任光辉 董朝 马斌林 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1260-1264,共5页
目的:比较颈部2个皮纹切口与传统"L"形切口颈淋巴结清扫术对患者机体血清创伤细胞因子白细胞介素(IL)-2,IL-6,C-反应蛋白(CRP)的影响。方法:对2008年12月至2011年7月在新疆医科大学附属肿瘤医院行保留皮神经颈淋巴结清扫术(即... 目的:比较颈部2个皮纹切口与传统"L"形切口颈淋巴结清扫术对患者机体血清创伤细胞因子白细胞介素(IL)-2,IL-6,C-反应蛋白(CRP)的影响。方法:对2008年12月至2011年7月在新疆医科大学附属肿瘤医院行保留皮神经颈淋巴结清扫术(即保留皮神经的Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅵ区清扫)的58例甲状腺癌患者按照患者意愿分为2组,第1组26例采用颈部2个横行皮纹小切口行颈淋巴结清扫术,第2组32例采用传统颈部"L"形切口行颈淋巴结清扫术,检测并比较2组所有患者的术前1 d、术后1,3,5 d血清细胞因子IL-2,IL-6,CRP的含量。结果:2个皮纹切口与"L"形切口术后第1天血清IL-2含量均有下降,但变化差异无统计学意义(P〉0.05),术后第3天开始两组均恢复到术前水平;两组术后第1天血清IL-6值均升高,术后第3天均有下降,且术后第5天两组均基本恢复到术前水平;两组血清CRP含量术后第1,3天和5天均较术前明显上升,差异有统计学意义(P〈0.05),2个切口和"L"形切口术前和术后组间差异无统计学意义(P〉0.05)。术后随访8~40个月未出现局部及颈部淋巴结复发。结论:颈部2个皮纹切口颈淋巴结清扫术与传统"L"形颈淋巴结清扫术相比,对机体血清应激细胞因子影响相当,并不增加创伤性,其在不影响颈淋巴结清扫效果的同时又兼顾了功能与美容,是甲状腺癌保留皮神经的Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅵ区淋巴结清扫的一种较为理想的手术入路。 展开更多
关键词 分化型甲状腺癌 二个皮纹切口 淋巴结清扫 血清创伤细胞因子
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创伤弧菌溶细胞素基因在大肠杆菌中的表达及溶血活性鉴定 被引量:10
2
作者 李桂军 楼永良 严杰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期852-854,860,共4页
目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,并对其溶血活性进行评价。为今后的免疫学活性研究和单克隆检测试剂盒的研发奠定基础。方法构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲合层析(HisTag)纯化重组蛋白,并用... 目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,并对其溶血活性进行评价。为今后的免疫学活性研究和单克隆检测试剂盒的研发奠定基础。方法构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲合层析(HisTag)纯化重组蛋白,并用溶血试验验证重组蛋白活性。结果用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)重组蛋白VVC。利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU。结论成功用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素并对其纯化、复性条件进行优化。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 E.coli表达 溶血活性
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创伤弧菌溶细胞素基因重组蛋白复性条件的优化及溶血活性鉴定 被引量:6
3
作者 李桂军 谢旦立 楼永良 《温州医学院学报》 CAS 2007年第4期320-323,共4页
目的:对由大肠杆菌表达系统表达的创伤弧菌溶细胞素蛋白包涵体的复性条件进行优化并对其溶血活性进行评价。方法:表达、提取并纯化重组蛋白,并对其包涵体利用PBS透析复性、16种不同复性液透析复性和柱上复性方法进行复性比较,复性蛋白... 目的:对由大肠杆菌表达系统表达的创伤弧菌溶细胞素蛋白包涵体的复性条件进行优化并对其溶血活性进行评价。方法:表达、提取并纯化重组蛋白,并对其包涵体利用PBS透析复性、16种不同复性液透析复性和柱上复性方法进行复性比较,复性蛋白用溶血试验验证其活性。结果:利用三种蛋白复性方法,重组蛋白均不同程度得到复性,其中复性液中盐酸胍、助溶剂及盐离子作用显著。柱上复性效果明显,其复性率高达98%。利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU。结论:成功对重组蛋白包涵体复性条件进行优化,并对复性后蛋白质的溶血活性进行鉴定,为今后的免疫学活性和变性蛋白质复性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 复性条件 溶血活性
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创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Jurkat-T淋巴细胞凋亡的研究 被引量:3
4
作者 姚蔚 谢旦立 +1 位作者 郭雅君 楼永良 《温州医学院学报》 CAS 2011年第4期332-336,共5页
目的:探讨创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的作用及凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。方法:利用基因工程方法体外表达、制备和纯化rVvhA;MTT法检测rVvhA对Jurkat T淋巴细胞的细胞毒活性影响;Annexin-V/PI双... 目的:探讨创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的作用及凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。方法:利用基因工程方法体外表达、制备和纯化rVvhA;MTT法检测rVvhA对Jurkat T淋巴细胞的细胞毒活性影响;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测rVvhA诱导Jurkat T淋巴细胞凋亡情况;Hochest33258荧光染色激光共聚焦显微镜观察rVvhA诱导Jurkat T细胞核形态的改变;分光光度法检测凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。结果:纯化复性后rVvhA的纯度达到92%以上;MTT结果显示rVvhA活性蛋白能显著抑制Jurkat T淋巴细胞的生长,有效浓度为1.5 HU/mL;流式细胞仪和激光共聚焦检测发现rVvhA作用后Jurkat T淋巴细胞核固缩,产生亮蓝荧光,1.5 HU/mL rVvhA,作用4 h后即可有效诱导其凋亡,凋亡率为(39.13±3.33)%,对照组为(3.43±0.34)%,且能被Caspase全酶抑制剂一定程度抑制。1.5 HU/mL rVvhA作用Jurkat T淋巴细胞3 h,Caspase-3酶活性达到高峰。结论:rVvhA能损伤人Jurkat T淋巴细胞,诱导其发生细胞凋亡,Caspase-3可能在rVvhA诱导的Jurkat T细胞凋亡过程中起重要作用。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 人JurkatT淋巴细胞 细胞凋亡
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创伤弧菌溶细胞素诱导细胞凋亡的研究现状及展望 被引量:1
5
作者 江闰德 郑里翔 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第12期1759-1760,共2页
创伤弧菌溶细胞素(Vvc)是创伤弧菌唯一分泌至细胞外,具备创伤弧菌种属特征性的细胞外蛋白质[1]。其由结构基因VvhA编码,相对分子质量为50 851×103,水溶性好,对热不稳定[2-3]。创伤弧菌溶细胞素的活性和毒素非常强,是创伤弧菌引发... 创伤弧菌溶细胞素(Vvc)是创伤弧菌唯一分泌至细胞外,具备创伤弧菌种属特征性的细胞外蛋白质[1]。其由结构基因VvhA编码,相对分子质量为50 851×103,水溶性好,对热不稳定[2-3]。创伤弧菌溶细胞素的活性和毒素非常强,是创伤弧菌引发细胞、组织损伤的重要毒力因子之一。实验证明,每毫克纯化的Vvc活力可达81 000溶细胞单位(81 000HU/mg)。通过小鼠尾静脉注射毫克级以下水平的Vvc。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 细胞凋亡 综述
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创伤弧菌溶细胞素在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控 被引量:1
6
作者 李桂军 楼永良 +1 位作者 桂静 肖美英 《检验医学教育》 2008年第4期39-44,共6页
目的:用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC772应激因子基因表达情况。方法:构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×Hi... 目的:用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC772应激因子基因表达情况。方法:构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×His Tag)纯化重组创伤弧菌溶细胞素(rVVC),并用溶血试验验证重组蛋白活性。复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后,RT-PCR方法检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白90(HSP90)基因分泌调节情况。结果:用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)rVVC。兔红细胞溶血试验检测表明,rVVC具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU(溶血单位)。RT-PCR结果显示,rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力,但具有时间、剂量依赖性。结论:表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达。提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 大肠杆菌表达 溶血活性 应激因子
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生长因子与角膜内皮细胞创伤修复
7
作者 彭伟 《咸宁医学院学报》 2001年第1期71-73,共3页
关键词 角膜内皮细胞创伤 修复 生长因子
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高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(HSH40)对创伤患者手术红细胞压积和动脉血氧分压的影响
8
作者 钱伟民 崔敬伟 +3 位作者 杨伯梅 王福涌 李荣 张芫祥 《中国中医药现代远程教育》 2010年第17期226-227,共2页
目的研究高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(以下简称:高渗晶胶液)对创伤患者手术红细胞压积和动脉血氧分压的影响。方法选择创伤评分〉12分的创伤病人病人50例,随机分为高渗晶胶液(HSH)A组和6%中分子羟乙基淀粉130/0.4注射液(HS... 目的研究高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(以下简称:高渗晶胶液)对创伤患者手术红细胞压积和动脉血氧分压的影响。方法选择创伤评分〉12分的创伤病人病人50例,随机分为高渗晶胶液(HSH)A组和6%中分子羟乙基淀粉130/0.4注射液(HS130)B组,每组25例。两组病人均采用静吸复合全麻,麻醉诱导芬太尼2ug.kg^-1、阿曲库铵0.5mg.kg^-1、丙泊酚2mg.kg^-1,麻醉维持吸入1%-3%异氟醚,丙泊酚5mg.kg-1.h-1和阿曲库铵5mg.kg^-1.h^-1。气管插管后行机械控制呼吸,呼吸参数潮气量10ml.kg-1呼吸频率12bpm。B组在术前以20ml.min-1的速度输入HS130500ml。A组在术前以10ml.min^-1的速度输入高渗晶胶液250ml。监测给药后10、15、25、60min收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)和中心静脉压(CVP)。两组病人在给药前和给药后1小时分别采集动脉和静脉血进行血气分析,测定红细胞压积(Hct)、血红蛋白(Hb)、动脉血氧含量(CaO2)、静脉血氧含量(CO2)、血钠离予浓度(Na^+),并计算动静脉血氧分压差P(a-)O2。记录给药后1h尿量。结果与B组相比A组SBP升高(P〈0.05);与B组相比A组HR降低(P〈0.05);与B组相比A组CVP升高(P〈0.05);与B组相比A组Hct降低(P〈0.05);与B组相比A组CaO2、CO2、P(a-)O2,两组差异无显著性(P〉0.05):与B组相比A组尿量增多(P〈0.05);与B组相比A组Na+升高(P〈0.05)。结论应用高渗晶胶液对创伤患者于术病人的血流动力学稳定,虽然降低了病人的Hct,但对病人的组织氧供无明显影响,可以有效安全应用于创伤病人。 展开更多
关键词 高渗晶胶液创伤细胞压积血氧含量
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雌激素诱导外周血间充质干细胞动员和归巢促进失血性休克大鼠创面愈合的作用 被引量:3
9
作者 陈晓明 朱娱 +2 位作者 吴跃 李涛 刘良明 《感染.炎症.修复》 2017年第1期6-11,65,共7页
目的:观察雌激素动员外周血间充质干细胞归巢对失血性休克大鼠皮肤创面愈合的影响。方法:制备失血性休克SD大鼠模型,在其背部正中线两侧各制作一个全层皮肤缺损创面(直径2 cm)。96只大鼠随机分为4组:假手术对照组(予动、静脉插管但不放... 目的:观察雌激素动员外周血间充质干细胞归巢对失血性休克大鼠皮肤创面愈合的影响。方法:制备失血性休克SD大鼠模型,在其背部正中线两侧各制作一个全层皮肤缺损创面(直径2 cm)。96只大鼠随机分为4组:假手术对照组(予动、静脉插管但不放血、不补液)、失血性休克组(失血性休克模型大鼠以2:1的乳酸林格液和羟乙基淀粉行常规液体复苏)、雌激素低剂量组(给予失血性休克大鼠雌激素0.2 mg/kg+常规液体复苏)、雌激素高剂量组(给予失血性休克大鼠雌激素0.5 mg/kg+常规液体复苏)。观察不同时相点各组动物皮肤创面愈合程度、愈合时间、组织血流量、ATP酶活性以及间充质干细胞动员、归巢情况。结果:与假手术对照组相比,失血性休克大鼠皮肤创面愈合缓慢,在第4天、第8天愈合率分别为(15.40±0.01)%、(36.80±1.25)%(P<0.05),组织血流量及ATP酶活性明显降低(P<0.01)。雌激素能明显促进皮肤创面的愈合,显著改善组织血流量,增强ATP酶活性,增加受损皮肤组织和血液中间充质干细胞的数量。与失血性休克大鼠相比,低剂量雌激素组第4天、第8天皮肤创面愈合率分别为(22.10±0.01)%、(46.40±1.25)%,其外周血及受损皮肤组织中间充质干细胞数量明显增多,同假手术组第4天创面愈合率[(37.10±4.32)%]、第8天创面愈合率[(67.70±1.79)%]相比,愈合仍较为缓慢(P<0.05);高剂量雌激素具有更好的促创面愈合效果,其第4天、8天创面愈合率分别为(28.40±0.12)%、(57.30±2.01)%(P<0.05),且间充质干细胞在皮肤创面及外周血中增多更为显著。失血性休克组创面完全愈合时间[(23.98±1.56)d]较假手术对照组[(14.98±1.21)d]显著延长(P<0.01),高剂量雌激素组(16.87±1.56)d和低剂量雌激素组[(22.67±1.78)d]创面愈合时间明显缩短(P<0.05),且高剂量雌激素组创面愈合时间最短。结论:雌激素可动员间充质干细胞归巢,促进失血性休克大鼠创面愈合。 展开更多
关键词 休克 失血性皮肤创伤雌激素间充质干细胞
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大鼠压迫性脊髓损伤的特征性超微病理表现 被引量:6
10
作者 舒衡生 于建华 +2 位作者 孙志明 邵珩 刘津平 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期921-922,共2页
[目的]观察大鼠压迫性脊髓损伤的特征性超微结构改变。[方法]将20只W istar成年雄性大鼠置入后路脊髓压迫装置,制成压迫性脊髓损伤动物模型,4周后脊髓取材行高倍透射电镜观察。[结果]发现压迫性脊髓损伤是缺少炎性细胞反应的坏死,单方... [目的]观察大鼠压迫性脊髓损伤的特征性超微结构改变。[方法]将20只W istar成年雄性大鼠置入后路脊髓压迫装置,制成压迫性脊髓损伤动物模型,4周后脊髓取材行高倍透射电镜观察。[结果]发现压迫性脊髓损伤是缺少炎性细胞反应的坏死,单方向性髓鞘断裂和特征性创伤细胞的出现是此类损伤的特异性改变。[结论]这些特征性超微结构改变可为压迫性脊髓损伤的超微病理变化提供更为全面准确的描述,为临床确诊鉴别此类损伤提供可靠理论根据。 展开更多
关键词 脊髓损伤 超微结构 创伤细胞
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创伤弧菌溶细胞素vvhA基因在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控 被引量:18
11
作者 李桂军 桂静 +1 位作者 肖美英 楼永良 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期24-28,共5页
目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC7721应激因子基因表达情况。方法构建pET28a(+)-whA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6&#... 目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC7721应激因子基因表达情况。方法构建pET28a(+)-whA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×HisTag)纯化重组创伤弧菌溶细胞素(rVVC),并用溶血试验验证重组蛋白活性。复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后,RT-PCR方法检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白90(HSP90)基因分泌调节情况。结果用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)rVVC。兔红细胞溶血试验检测表明,rVVC具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU(溶血单位)。RT-PCR结果显示,rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力,但具有时间、剂量依赖性。结论表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90mRNA表达。提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 E.coli表达 溶血活性 应激因子
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抗重组蛋白rVVC多克隆抗体的制备及其保护作用的鉴定 被引量:2
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作者 姚蔚 周建娟 +2 位作者 李桂军 谢旦立 楼永良 《温州医学院学报》 CAS 2008年第6期502-506,共5页
目的:纯化rVVC免疫家兔,制备并纯化多克隆抗体。观察复性rVVC、纯化多克隆抗体、rVVC和纯化多克隆抗体混合作用肝癌细胞SMMC7721后,肝癌细胞SMMC7721形态学和活性变化,评估抗重组rVVC蛋白多克隆抗体对肝癌细胞SMMC772的保护作用。方法:... 目的:纯化rVVC免疫家兔,制备并纯化多克隆抗体。观察复性rVVC、纯化多克隆抗体、rVVC和纯化多克隆抗体混合作用肝癌细胞SMMC7721后,肝癌细胞SMMC7721形态学和活性变化,评估抗重组rVVC蛋白多克隆抗体对肝癌细胞SMMC772的保护作用。方法:纯化重组蛋白rVVC免疫日本大耳兔获得多克隆抗体,多克隆抗体经过硫酸铵盐析、Sephadex G25除盐和DEAE-Sephadex G100层析纯化并进行Westerm Blot鉴定和抗体效价分析。复性rVVC、纯化多克隆抗体、rVVC和纯化多克隆抗体混合物作用肝癌细胞SMMC7721后,显微镜观察并以MTT法确定抗重组rVVC蛋白多克隆抗体对肝癌细胞SMMC7721的保护作用。结果:兔抗重组rVVC多克隆抗体经盐析法、分子筛和阴离子交换层析法纯化后,得到较纯的IgG分子。免疫印迹结果显示,抗重组rVVC蛋白多克隆抗体与纯化抗原呈现特异性反应条带。显微镜观察和MTT结果表明,纯化多克隆抗体能够阻断重组rVVC活性蛋白对肝癌细胞SMMC772的损伤。结论:成功制备了具有保护和阻断作用的兔抗重组rVVC多克隆抗体,为以后rVVC促炎症、促应激作用机制和信号传导机制研究提供一个重要的阻断剂。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 多克隆抗体 保护作用 阻断作用
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创伤弧菌溶细胞素对小鼠肝脏CD4+T细胞线粒体数量及CD62L表达的影响 被引量:1
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作者 张婷 高晖 +4 位作者 李路茜 郑蒙蒙 谢旦立 郑易 楼永良 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期126-131,共6页
目的研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对小鼠肝脏CD4+T细胞的细胞毒活性及其对线粒体数量和CD62L表达中的作用,了解其对肝脏不同类型CD4+T细胞存活率的影响。方法利用大肠埃希菌表达系统重组表达创伤弧菌溶细胞素,体外作用C57BL/... 目的研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对小鼠肝脏CD4+T细胞的细胞毒活性及其对线粒体数量和CD62L表达中的作用,了解其对肝脏不同类型CD4+T细胞存活率的影响。方法利用大肠埃希菌表达系统重组表达创伤弧菌溶细胞素,体外作用C57BL/6小鼠的肝脏单个核细胞,采用流式细胞术结合CD4、CD44、CD62L、Live/Dead、MitoTrackerRed和JC-1等荧光抗体(或探针)检测分析rVvhA对肝脏CD4+T细胞及其亚群的存活率、线粒体数量和线粒体膜电位的影响。结果rVvhA体外作用6h后,小鼠肝脏CIM+T细胞的存活率下降,rVvhA对CD4+初始T细胞和效应性T细胞均有杀伤作用,且CD4+T细胞CD62L的表达明显下调,此外,CD4+T细胞的线粒体数量减少,线粒体膜电位显著下降。结论重组创伤弧菌溶细胞素对CD4+T细胞的细胞毒活性可能与CD62L表达、抑制线粒体数量和膜电位有关。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 肝CD4+T细胞 线粒体 CD62L
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重组创伤弧菌溶细胞素诱导THP-1细胞损伤的机制研究
14
作者 陆晓雅 陈建林 +2 位作者 刘彪 谢旦立 楼永良 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期761-765,共5页
目的:研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对人单核细胞白血病细胞(THP-1)的损伤机制及其钙离子通道的研究。方法采用倒置显微镜、CCK-8法、Fluo3/AM法、caspase 活性检测等方法测定rVvhA对THP-1细胞的影响,并研究胞外Ca2+的内流途... 目的:研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对人单核细胞白血病细胞(THP-1)的损伤机制及其钙离子通道的研究。方法采用倒置显微镜、CCK-8法、Fluo3/AM法、caspase 活性检测等方法测定rVvhA对THP-1细胞的影响,并研究胞外Ca2+的内流途径。结果 rVvhA作用后细胞形态学变化明显,细胞皱缩、变形甚至裂解,且呈剂量依赖性。12μg/ml rVvhA 作用THP-1细胞1 h后胞外K+浓度升高,作用6 h后胞外LDH浓度显著升高。 Verapamil、Mibefradil和SKF-96365均不能抑制rVvhA引起的Ca2+内流。同时rVvhA可导致THP-1细胞的caspase-3和caspase-9活性升高,并呈时间依赖性。结论 rVvhA对THP-1细胞具有明显的损伤作用,且可能通过caspase-9/3途径诱导细胞凋亡,并能引起细胞内Ca2+浓度升高,升高的Ca2+可能通过细胞膜上形成的孔道被动入胞。 展开更多
关键词 重组创伤弧菌溶细胞 人单核细胞白血病细胞 细胞损伤 钙离子通道
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创伤弧菌溶细胞素对小鼠肝脏自然杀伤T细胞和TCRβ-细胞毒性差异 被引量:2
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作者 胡倩雯 黄显辉 +2 位作者 张婷 谢旦立 楼永良 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期200-201,共2页
创伤弧菌( Vibrio vulnificus),又称海洋弧菌,是一种革兰染色阴性的嗜盐性条件致病菌,主要存在于海水和海产品中,目前具体致病机制尚不明确。创伤弧菌经伤口或消化道感染人体后,可引起严重的创口感染、坏死性筋膜炎和原发性败血... 创伤弧菌( Vibrio vulnificus),又称海洋弧菌,是一种革兰染色阴性的嗜盐性条件致病菌,主要存在于海水和海产品中,目前具体致病机制尚不明确。创伤弧菌经伤口或消化道感染人体后,可引起严重的创口感染、坏死性筋膜炎和原发性败血症等疾病,其中原发性败血症的致死率高达50%以上[1]。该菌毒力因子众多,溶细胞素是其唯一分泌至胞外且具有种属特异性的外毒素,在该菌的感染致病过程中发挥着重要作用。自然杀伤T细胞(natural killer T cell, NKT)是一类既表达NK细胞表面分子(如小鼠NK1.1),又表达T细胞表面受体(如TCRα/β)的特殊免疫细胞,主要参与固有免疫应答,在抗感染和抗肿瘤中发挥重要作用。然而,由于NKT细胞的数量和百分比在各脏器(如肝脏、脾脏)中比例较低,且缺乏特异和敏感的标志物,使得其研究受到了一定限制。本研究通过流式细胞术结合 TCRβ、CD1d-tetramer 和 live/dead等荧光抗体或荧光染料染色分析重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)对小鼠肝脏NKT细胞的影响,并比较rVvhA对NKT细胞和CD1d-tetramer-TCRβ-细胞的杀伤作用,探讨其对肝脏中上述细胞的影响,为揭示创伤弧菌溶细胞素分子致病机制提供实验依据。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 自然杀伤T细胞 小鼠肝脏 TCRΒ 细胞毒性 NKT细胞 原发性败血症 细胞表面分子
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创伤弧菌溶细胞素对小鼠脾脏和肺脏T细胞细胞毒活性的差异性影响 被引量:1
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作者 王永明 高晖 +2 位作者 郑蒙蒙 谢旦立 楼永良 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期812-816,共5页
目的:研究重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)对小鼠脾脏和肺脏T细胞亚群细胞毒活性作用及其组织差异性,了解其对脾脏和肺脏CD4^+初始T细胞和效应T细胞存活率的影响。方法利用大肠杆菌表达系统重组表达创伤弧菌溶细胞素(rVvhA),体外... 目的:研究重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)对小鼠脾脏和肺脏T细胞亚群细胞毒活性作用及其组织差异性,了解其对脾脏和肺脏CD4^+初始T细胞和效应T细胞存活率的影响。方法利用大肠杆菌表达系统重组表达创伤弧菌溶细胞素(rVvhA),体外作用于C57BL/6小鼠的脾脏和肺脏单细胞悬液,采用流式细胞术结合CD45.2、CD4、CD8、CD44、CD62L和Live/Dead等荧光抗体(或探针)检测分析rVvhA对CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的存活率及组织差异性的影响。结果 rVvhA体外作用于脾脏和肺脏的单细胞悬液6 h后,小鼠脾脏CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的存活率下降且CD4^+T细胞对rVvhA的细胞毒性更为敏感,小鼠肺脏CD4^+T细胞存活率轻微下降而CD8^+T细胞的存活率无明显变化,此外,脾脏CD4^+初始T细胞和效应T细胞的存活率均下降,而肺脏CD4^+初始T细胞和效应T细胞的存活率均未有明显下降。结论 rVvhA对脾脏和肺脏T细胞亚群细胞毒活性存在组织差异性,而这种差异性可能与组织间的CD4^+初始T细胞有关。 展开更多
关键词 创伤弧菌溶细胞 脾脏T细胞 肺脏T细胞 CD4^+初始T细胞
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Cognitive improvement following transvenous adipose-derived mesenchymal stem cell transplantation in a rat model of traumatic brain injury 被引量:7
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作者 Dongfei Li Chun Yang Rongmei Qu Huiying Yang Meichun Yu Hui Tao Jingxing Dai Lin Yuan 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2011年第10期732-737,共6页
The effects of adipose-derived mesenchymal stem cell (ADMSC) transplantation for the repair of traumatic brain injury remain poorly understood. The present study observed neurological functional changes in a rat model... The effects of adipose-derived mesenchymal stem cell (ADMSC) transplantation for the repair of traumatic brain injury remain poorly understood. The present study observed neurological functional changes in a rat model of traumatic brain injury following ADMSC transplantation via the tail vein. Cell transplants were observed in injured cerebral cortex, and expression of brain-derived nerve growth factor was significantly increased in the injured hippocampus following transplantation. Results demonstrated that transvenous ADMSC transplants migrated to the injured cerebral cortex and significantly improved cognitive function. 展开更多
关键词 adipose-derived mesenchymal stem cells traumatic brain injury brain-derived nerve growth factor CORTEX stem cell transplantation neural regeneration
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创伤弧菌溶细胞素A蛋白疫苗对创伤弧菌感染小鼠的保护作用机制的研究 被引量:1
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作者 黄菲 李昱 +1 位作者 刘晓斐 胡成进 《国际免疫学杂志》 CAS 2018年第1期1-6,共6页
目的观察创伤弧菌溶细胞素A(vibrio vulnificus hemolysinA,VvhA)蛋白免疫对创伤弧菌致死剂量感染小鼠的保护作用,并探讨其可能的免疫保护机制。方法首先表达并纯化VvhA蛋白,然后建立VvhA蛋白免疫BALB/c小鼠动物模型。通过腹腔注... 目的观察创伤弧菌溶细胞素A(vibrio vulnificus hemolysinA,VvhA)蛋白免疫对创伤弧菌致死剂量感染小鼠的保护作用,并探讨其可能的免疫保护机制。方法首先表达并纯化VvhA蛋白,然后建立VvhA蛋白免疫BALB/c小鼠动物模型。通过腹腔注射致死剂量创伤弧菌感染后,连续72h观察小鼠存活率,并进行组织病理学检查以及肝功能指标检测;采用流式细胞术检测VvhA蛋白免疫BALB/c小鼠模后脾脏及腋窝和腹股沟淋巴结滤泡辅助性T细胞(follicular helper Tcells,Tfh)、GCB细胞表达。结果VvhA蛋白免疫组BALB/c小鼠72h生存率达83.3%。对照组BALB/c小鼠72h全部死亡。VvhA蛋白免疫组BALB/c小鼠主要脏器损伤显著减轻。VvhA蛋白免疫后小鼠脾脏、淋巴结Tfh细胞和生发中心(generminal center,GC)B细胞表达显著升高(P〈0.05)。结论VvhA蛋白免疫后能够显著减轻创伤弧菌致死剂量感染引发的过度炎症反应,其免疫保护机制可能是上调了Tfh和GCB细胞的表达。 展开更多
关键词 创伤弧菌 创伤弧菌溶细胞素A 免疫机制 滤泡辅助性T细胞 生发中心B细胞
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Effect of Astragalus Polysaccharide on the Cell-mediated Immunity of Traumatic Stress Mice
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作者 曾广仙 熊金蓉 +4 位作者 刘俊英 廖奕华 代丽红 李杏娟 沈关心 《Journal of Microbiology and Immunology》 2004年第2期126-130,共5页
To investigate the changes of immune functions and the effects of Astragalus polysaccharide (ASP) on the cell-mediated immunity of the traumatic stress model of mouse by amputation, 50 mice were randomly divided into ... To investigate the changes of immune functions and the effects of Astragalus polysaccharide (ASP) on the cell-mediated immunity of the traumatic stress model of mouse by amputation, 50 mice were randomly divided into 5 groups for study, in which the group A and B served as the normal control (by injecton of 0.5 ml of saline intra-peritoneally daily), and as the stress control (by intra-peritoneal injecton of 0.5 ml of normal saline into mice after amputation) respectively, to the group C, D and E of mice, 1000 mg/kg (high dose), 300 mg/kg (median dose) and 250 mg/kg (low dose). The CD4 + and CD8 + T cells as well as the expression of the c-fos protein were determined by immunohistochemical techniques, and the expressions of NF-κB mRNA and IL-10 mRNA were assayed by hybridization in situ . The experimental results showed that in comparison with the normal control group of mice (group A), the expression levels of NF-κB mRNA, IL-10 mRNA and the c-fos protein in the tissues of thymus and spleen in the stress controls were significantly elevated and the CD4 + T cells and CD4/CD8 ratio were decreased. However, in comparison with the stress control of mice (group B), the expressions of NF-κB mRNA and IL-10 mRNA were inhibited by ASP, and the CD4 + T cells and CD4/CD8 ratio were increased in groups C, D and E, but the level of c-fos protein was decreased. There was no significant difference in these parameters among group C, D and E. It is concluded that the functions of cell-mediated immunity of mice were disturbed under the stress condition of the traumatic injuries after amputation. And the immune functions can be effectively restored by the use of Astragalus polysaccharide. 展开更多
关键词 Trauma and injury Cell immunity ASTRAGALUS POLYSACCHARIDE IL-10 NF-κB T lymphocyte subsets c-fosImmunohistochemistry HYBRIDIZATION in situ
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Decline in the expression of IL-2 after trauma and changes in the nuclear transcription factors NFAT and AP-1 被引量:1
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作者 罗艳 梁华平 +2 位作者 胡承香 徐祥 王正国 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第9期1348-1351,150,共4页
OBJECTIVE: To investigate whether the decrease in expression of interleukin-2 (IL-2) after trauma is associated with changes in DNA binding activity of nuclear factor of activated T cells (NFAT) and activator protein-... OBJECTIVE: To investigate whether the decrease in expression of interleukin-2 (IL-2) after trauma is associated with changes in DNA binding activity of nuclear factor of activated T cells (NFAT) and activator protein-1 (AP-1). METHODS: Mice with closed impact injury with fracture in both hind limbs were adopted as the trauma model. Spleen lymphocytes were isolated from traumatized mice and stimulated with Con-A. Culture supernatants were assayed for IL-2 activity, and total RNA was extracted from spleen lymphocytes and assayed for IL-2 mRNA. DNA binding activity of NFAT and AP-1 were measured by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). The expression of c-Fos, c-Jun and JunB proteins was determined by the Western blot analysis. RESULTS: DNA binding activity of NFAT and AP-1 gradually decreased to a minimum of 41% and 49%, respectively, of the control on the 4th day after injury, which was closely followed by the decline in IL-2 activity and IL-2 mRNA. A decrease in the expression of c-Fos on the 1st and 4th day after trauma had no significant effect on c-Jun expression; the increase in expression of JunB was only on the 1st day after injury. CONCLUSION: Decreased IL-2 expression is, at least in part, due to a decline in the activation of NFAT and AP-1 in traumatized mice. The decline in DNA binding activity of NFAT and AP-1 is partly due to a trauma-induced block in the expression of c-Fos. 展开更多
关键词 Nuclear Proteins Animals Cell Nucleus DNA DNA-Binding Proteins Electrophoretic Mobility Shift Assay Female INTERLEUKIN-2 Male Mice NFATC Transcription Factors Proto-Oncogene Proteins c-fos Proto-Oncogene Proteins c-jun RNA Messenger Research Support Non-U.S. Gov't Transcription Factor AP-1 Transcription Factors
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