创造酶切位点PCR-RFLP检测PON2(rs12026)基因多态性

目的:建立简便易用的PON2基因单核苷酸多态(rs12026)的检测方法。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断PON2基因SNP位点多态性。结果:设计一对特异引物并PCR扩增含PON2多态位点的DNA片段,根据限制性内切酶BsmAI酶切结果判断PON2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的PON2多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

创造酶切位点PCR-RFLP检测MTHFR(rs2274976)基因多态性

目的建立简便易用的MTHFR基因单核苷酸多态(rs2274976)的检测方法。方法应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断MTHFR基因SNP位点多态性。结果设计一对特异引物,其中正向引物3’末端与多态相邻,倒数第二位碱基为错配碱基C可在PCR扩增后与多态G等位基因及相邻片段形成CCGG结构,使用限制性内切酶MspI进行RFLP检测可判断MTHFR多态性。结论应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MTHFR多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

应用创造酶切位点PCR-RFLP检测乙醇脱氢酶2基因多态性

目的建立简便易行经济适用的乙醇脱氢酶2(ADH2)基因单核苷酸多态性检测方法。方法根据单碱基突变位点的碱基替代情况设计引物,其中一条引物根据突变位点邻近序列设计,人为引入错配碱基,使引物3′端和单碱基突变的一种突变型在PCR扩增后形成一个酶切位点,并应用相应内切酶进行酶切鉴定,通过PCR-RFLP技术判断ADH2基因SNP位点多态性。结果设计一对特异引物并PCR扩增含ADH2多态位点的DNA片段,使用限制性内切酶Bsh1236I酶切判断ADH2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的ADH2多态位点检测方法具备简便、经济、快速的特点。

应用创造酶切位点PCR-RFLP检测POT1基因rs1034794位点多态性

目的建立人端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)rs1034794位点多态性的检测方法。方法应用创造酶切位点法(created restriction site PCR,CRS-PCR)根据单碱基突变位点的碱基替代情况设计PCR引物。其中1条引物根据突变位点邻近序列设计,引入错配碱基,使得引物3’端和单碱基突变的一种突变型在PCR扩增后形成1个酶切位点,PCR产物用PCR-限制性片段长度多态性(PCR restriction fragment length polymorphism,PCRRFLP)法进行分析。结果设计1对特异引物,其中正向引物3’末端与多态相邻,倒数第三位碱基为错配碱基A可在PCR扩增后与多态T等位基因及相邻片段形成AGCT结构,使用限制性内切酶Alu I酶切效果较好。结论应用CRS-PCR方法创造的酶切位点可以有效而简捷地检测POT1(rs1034794)基因多态性。

创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用探讨

目的:探讨创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用及其注意事项。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断多个基因多态性。结果:共对MGMT、ADH2、MTH-FR和PON2基因多种多态位点进行了实验研究,均成功完成检测。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的检测方法具备简便、经济、快速的特点,适宜推广应用。

应用创造酶切位点法检测单碱基突变

应用引物错配技术结合单碱基突变位点而配合成一个酶切位点,使之成为可用PCR-RFLP方法分析的突变位点,是对单碱基突变位点进行基因型鉴定的有效而简捷的手段。本文以鸡胞外脂肪酸结合蛋白(Extracelluarfattyacidbindingprotein,EX-FABP)基因单碱基突变的基因型检测为例,探讨了应用创造酶切位点PCR(CreatedRe strictionSitePCR,CRS-PCR)检测单碱基突变基因型的思路、方法和策略。

双创造酶切位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测MGMT基因多态性的应用

目的建立简便易行、经济适用的MGMT基因4个单核苷酸多态性位点的检测方法。方法应用碱基错配创造酶切位点原理设计引物,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术判断MGMT基因四个SNP位点多态性。结果设计一对引物PCR扩增含MGMT84多态位点的DNA片段,另一对引物PCR扩增含MGMT基因143、160、178三个多态位点的DNA片段,使用4种限制性内切酶分别酶切判断4个位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MGMT四个多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

联合应用巢式PCR和创造酶切位点法检测单核苷酸改变

此文介绍了一种检测单核苷酸改变的方法。联合应用巢式PCR和创造酶切位点法,操作简便,结果可靠,能有效地对SNP位点进行分型。本文以M134位点的突变检测为例,探讨联合应用巢式PCR和创造酶切位点法检测单核苷酸改变的思路、方法和策略。

pGH基因全序列ApaⅠ酶切位点多态性与生产性能的相关分析

本实验利用PCR-RFLP技术分析了约克夏和长白猪pGH基因ApaⅠ酶切位点多态性及其与生产性能的关系.结果表明,在pGH基因序列中共检测到5种基因型,4种等位基因,基因型频率和等位基因频率在2个猪品种间分布差异不显著;约克夏ApaⅠ酶切多态位点中,AC基因型个体在165日龄体重和70-165日龄日增重上显著高于AA基因型个体(P<0.1);但长白猪ApaⅠ多态位点不同基因型在这两个生产性状上的差异不显著.

基于PCR-RFLP法鉴定MTHFR基因A1298C位点的内切酶的筛选

寻找价格适宜的限制性内切酶,以期用于PCR-RFLP法对MTHFR基因A1298C位点的分型。根据dbSNP数据库中MTHFR基因A1298C位点的序列,通过各种在线酶切位点分析工具,查找可鉴定该位点的酶,再通过价格对比和分析多态位点上、下游是否存在干扰序列,从而确定候选酶。结合PCR创造酶切位点技术,一种价格便宜的常用酶HinfI具有鉴别该位点的潜力,不仅为该位点的独立检测并且为其与MTHFR基因C677T位点的联合检测奠定了基础。

应用CRS-RFLP技术检测hOGG1c.326位点的单核苷酸多态性

目的 探讨创造酶切位点的限制性片段长度多态检测技术 (CRS RFLP)检测单核苷酸多态性的方法及其应用。方法 应用CRS RFLP检测技术 ,检测hOGG1c 3 2 6位点的单核苷酸多态性 ,并与未引入错配位点时的限制性片段长度多态检测结果进行比较。结果 CRS RFLP的检测结果与未引入错配位点时的限制性片段长度多态的检测结果一致。结论 CRS RFLP检测技术适用于已知单核苷酸多态位点的检测 ,具有较好的应用前景。

鳜胰蛋白酶基因外显子3上SNP G169A位点鉴定和四种不同检测方法的比较

采用PCR产物直接测序法(DS)对鳜(Siniperca chuatsi)胰蛋白酶基因(TRY)进行单核苷酸多态性(SNPs)分析,发现外显子3上的G169A多态性。对312个样品进行分析,共发现三种基因型GG、GA、AA,其基因型频率分别为0.26、0.54、0.20,两个等位基因G和A的基因频率分别为0.53和0.47。用创造限制性酶切位点法PCR(CRS-PCR)、单管双向等位基因专一性扩增(SB-ASA)和单链构象多态性分析(PCR-SSCP)对该SNP位点进行验证。结果表明,CRS-PCR法不能对该SNP位点分型,PCR-SSCP和SB-ASA法可以且准确度分别为100%和96.67%。

广东人群药物代谢酶CYP2C9基因374G>A位点多态性调查

目的调查广东人群CYP2C9基因第3外显子374G>A位点多态性。方法应用创造酶切位点PCR扩增跨越374G>A位点的DNA片断,用MluI酶切PCR产物,通过PAGE-银染判断基因型。结果在受检的532例广东人中,未检出A374突变等位基因即CYP2C9*14等位基因,所有个体的基因型均为野生型纯合子G374/G374。结论 CYP2C9*14等位基因为广东人群的稀有等位基因。

碱基错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点的多态性

目的:细胞周期蛋白H(CCNH)基因rs3093816位点的多态性与许多癌症的发生风险升高有关,但由于此位点缺少合适的限制性内切酶位点,使聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)的使用受到限制。因此,本研究拟建立碱基错配长PCR引物法用于检测CCNH基因rs3093816位点。方法:通过创造性酶切位点PCR-RFLP方法在CCNH扩增产物中引入新的酶切位点,然后利用Cvi Q I酶区分PCR产物。本研究同时设计了碱基错配长PCR引物和碱基错配相对短PCR引物,比较分析碱基错配长PCR引物是否更简便经济。结果:与短引物法相比,长引物占扩增总片段的比例越大,酶切产物越容易区分,凝胶电泳需要的时间越短。结论:成功建立了错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点。

湘西黄牛LPL基因第2外显子的遗传多态性及其与生长性状的关联分析

为了探讨湘西黄牛分子遗传特征及寻找与生长性状相关的分子标记,采用创造酶切位点PCR-RFLP(CRS-PCR-RFLP)和测序技术检测了湘西黄牛LPL基因第2外显子的多态性,并进行了LPL基因的基因型与湘西黄牛生长性状的关联分析。多态性分析结果表明,湘西黄牛群体LPL基因第2外显子存在g.355420C>T和g.355427T>A 2个突变位点,且都处于中度多态,其中g.355420C>T位点为本试验新发现的突变位点,g.355427T>A位点所编码的氨基酸由苏氨酸转变为丝氨酸。基因型与生长性状的关联分析结果表明,g.355420C>T位点CC基因型个体的体高、体长和体重均显著大于CT和TT基因型个体(P<0.05),C等位基因对湘西黄牛的生长性状为正效应。g.355427T>A位点的TT和AT基因型个体的体高、体长、胸围和体重均极显著大于AA基因型个体(P<0.01),T等位基因为正效应。表明LPL基因第2外显子的g.355420C>T和g.355427T>A位点对湘西黄牛生长性状有显著影响,可能为湘西黄牛生长性状的分子遗传标记位点。

入侵中国大陆的红火蚁的鉴定及发生为害调查

根据形态特征鉴定结果首次证实红火蚁SolenopsisinvictaBuren入侵中国大陆 ,并调查了广东省吴川市红火蚁发生为害情况。调查结果表明 ,发生区内部分地点红火蚁发生密度较高 ,主要发生于较稳定的生态环境中 ,如荒坡、草地、长满杂草的田埂等。红火蚁已对当地农业生产、人们的身体健康、日常生活等造成了不利影响。此外 ,Cytb基因序列分析结果表明 ,采自美国佛罗里达和广东吴川的红火蚁与采自广东 4个地方的热带火蚁S .geminata (Fabr.)两物种间有 61个变异位点 ,种内变异为 0。限制性酶切多态实验 (RFLP)的结果显示 ,BamHI酶在红火蚁的特异扩增片段中有一个识别位点 ,而在热带火蚁中无酶切位点 ;MspI酶在热带火蚁的扩增片段中也有一个识别位点 ,而在红火蚁中无识别位点。有酶切位点的扩增产物在酶切后分别获得近 2 0 0bp与 2 5 0bp的片段各一带。因此 ,用PCR RFLP的方法可以简单快速地鉴别红火蚁和热带火蚁。

H-FABP基因型对中畜黑猪I系生长性能的影响

利用PCR RFLP技术(限制性内切酶采用HinfⅠ和HaeⅢ)检测了培育品种77头中畜黑猪I系的心肌脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因座位的遗传变异,同时对H FABP的不同PCR RFLP基因型对生产性能的影响作了初步统计分析,旨在探讨利用H FABP进行肉质性状辅助选择,是否对生产性能产生不利影响。结果表明,在H FABP基因5′上游和内含子2 区段,均发现HinfⅠRFLP 和HaeⅢRFLP、HinfⅠ* RFLP;结果显示,在HinfⅠRFLP位点上,HH和hh 2种基因型间个体170日龄体重差异显著(P<0.05),除此之外,未发现其它酶切位点的不同基因型个体生长性能之间的显著差异。研究结果为今后开展猪肉质性状和生产性能的分子辅助选育奠定应用基础。

猪Pit-1基因的多态性研究

选取7个中国地方猪种和3 个国外引入猪种共473 头,应用PCR SSCP技术在7 个中国地方猪种中检测到1个Pit 1基因第4外显子上的突变;应用PCR RFLP技术在3个国外引入猪种中,扩增长度为1 747 bp的片段中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点。遗传多态性分析结果表明:外显子4上的突变,在7个中国地方猪种中是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中沂蒙黑猪和巴马小型猪处于Hardy Weinberg平衡;北京黑猪、沂蒙黑猪、巴马小型猪、滇南小耳猪和香猪处于中度多态。RsaⅠ酶切多态位点的突变在3个国外引入猪种中也是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中大白猪和杜洛克猪处于Hardy Weinberg平衡;3 个国外引入猪种的多态信息含量均为中度多态。

大口黑鲈内含子1上SNP G208A的CRS-PCR检测方法

创造限制酶切位点PCR法是应用引物错配技术结合单核苷酸多态性(SNP)而配合成一个酶切位点,使SNP可用于PCR-RFLP分析的一种方法。应用CRS-PCR技术检测了大口黑鲈(Micropterus salmoides)IGF-I基因内含子1上SNPG 208A的多态性,并详述了CRS-PCR错配引物的设计方法,CRS-PCR引物设计和应用的注意事项,以促进CRS-PCR单核苷酸多态检测方法在水产动物研究领域的应用。

基因群体遗传多态性检测方法的比较研究

[目的]寻找基因的群体遗传多态性检测的理想方法,为基因突变的群体检测提供方法指导。[方法]以104头中国荷斯坦牛群为研究对象,扩增了牛TLR4基因243 bp特异性片段,分别采用SSCP和创造酶切位点的RFLP(CRS-RFLP)方法检测了扩增片段的第27 bp处C→T的突变,并对其方法进行了比较分析。[结果]结果表明,在104头个体的扩增片段中,SSCP未能检测出多态性,而CRS-RFLP方法检测出了多态性。[结论]在不能直接采用RFLP方法的情况下,与SSCP相比,创造酶切位点RFLP(CRS-RFLP)方法为群体多态性检测的理想选择。