趋化因子受体CXCR3及初始/记忆T淋巴细胞在原发性胆汁性肝硬化患者肝脏和外周血中的变化

目的通过研究原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者与非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者外周血和肝脏内淋巴细胞及其活化状态(分子标记:HLADR+CD3+)、初始T细胞(CD45RA)、记忆T细胞(CD45RO)及趋化因子受体CXCR3,了解肝内淋巴细胞活化状态及其影响因素。方法流式细胞法检测两种肝病患者外周血和肝内淋巴细胞分子标记CD3、CD4、CD8、HLADR+CD3+、CD45RA、CD45RO、CXCR3,进行统计分析。结果 PBC患者在外周血中以CD4+T淋巴细胞为主,肝内浸润淋巴细胞CD8+T和CD4+T淋巴细胞无明显差异;肝内与外周血比较:CD4+T淋巴细胞明显减少,CD4/CD8比例明显降低,HLADR+CD3+T淋巴细胞差异无显著性,CD45RA明显低于外周血,CD45RO则差异无显著性,CXCR3高于外周血中。与NASH患者比较:PBC患者肝内CD4+T细胞增多,CD4/CD8上升,HLADR+CD3+增高,CD45RO、CD45RA减少,CXCR3增多;外周血T淋巴细胞及HLADR+CD3+两组间差异无显著性,CD45RA减少,CXCR3两组间差异无显著性。结论 PBC患者外周血淋巴细胞及其活化状态与肝内免疫状况有关;肝内CD4+T淋巴细胞较NASH患者增多,提示CD4+T的活化和增殖是PBC发生和发展的关键环节;记忆性T淋巴细胞数量(CD45RO)控制在一定范围内可能是自身免疫反应得以不断进行的原因;CXCR3与T淋巴细胞向肝脏定向迁徙有关。

下调DC-SIGN-ManLAM结合信号恢复树突状细胞活化初始T细胞的能力

目的探讨利用RNAi下调DC-SIGN与ManLAM结合信号对树突状细胞(dendritic cells,DCs)活化初始T细胞能力的影响。方法利用筛选出的人DC-SIGN分子RNAi有效靶点,构建并包装产生慢病毒表达载体。实验分为:干扰组、空载体组和空白对照组。利用慢病毒表达载体下调DCs表面DC-SIGN分子水平,流式细胞仪、RT-PCR及Westernblot检测各组DCs DC-SIGN分子水平变化,在LPS存在下,与ManLAM共培养18 h后,流式细胞仪检测DCs表面成熟标志物,ELISA方法检测DCs刺激CD4+CD45RA+初始T细胞向Th1分化能力,以了解下调DC-SIGN与ManLAM结合信号对DCs活化初始T细胞的能力的影响。结果①包装慢病毒产生浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/ml。②流式细胞仪检测干扰组DCs表面DC-SIGN分子表达水平较其余2组显著降低(F=14.19,P<0.05),RT-PCR检测干扰组DC-SIGN目的条带灰度值/内参灰度值(0.252 5±0.139 6)与空白对照组(0.572 2±0.190 9)及空载体组(0.548 7±0.119 3)相比灰度值显著下降(F=8.142,P<0.05),Western blot检测干扰组DCs内DC-SIGN蛋白水平均显著低于空载体组和空白对照组(F=51.376,P<0.05)。③干扰组DCs的成熟标志物CD86(F=15.59,P=0.004)、CD83(F=18.03,P=0.003)、HLA-DR(F=7.684,P=0.022)水平较空载体组和空白对照组明显增高。④DCs与初始T细胞共培养,干扰组分泌IFN-γ(F=18.434,P=0.003)、IL-2(F=31.08,P=0.001)水平较空载体组和空白对照组显著增高。结论利用RNAi慢病毒载体下调DCs表面DC-SIGN水平,减弱DC-SIGN与ManLAM结合信号,能够恢复DCs的成熟受阻,最终使得DCs活化初始T细胞的能力恢复。

骨髓间充质干细胞对同种异体T淋巴细胞不同亚群功能的影响

研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对同种异体T淋巴细胞不同亚群的细胞因子分泌、细胞周期和增殖能力的影响,探讨BMSC对同种异体T淋巴细胞各亚群功能的影响,以阐明BMSC对免疫调节的作用机制。分离纯化鉴定BALB/c小鼠BMSC,取C57小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,免疫磁珠法富集T淋巴细胞,BMSC与T淋巴细胞共培养,监测淋巴细胞增殖能力,流式细胞术分析CD4+、CD8+、CD4+CD45RBhigh、CD4+CD45RBlow、CD8+CD45RBhigh、CD8+CD45RBlow各T淋巴细胞亚群IFN-γ、IL-4分泌水平及对DNA周期的影响。结果BMSC能明显抑制由同种异体抗原诱导的T淋巴细胞增殖,可使CD4+和CD8+T淋巴细胞分泌IFN-γ水平下降,IL-4水平无影响。具有明显抑制CD4+CD45RBhigh、CD4+CD45RBlow和CD8+CD45RBhigh、CD8+CD45RBlow亚群IFN-γ的表达并且在不同亚群抑制程度不同。骨髓间充质干细胞通过抑制T淋巴细胞的增殖和不同功能亚群分泌细胞因子从而抑制免疫反应。