初次卵裂时间是猪克隆胚胎发育潜能的重要标识

初次卵裂时间与哺乳动物胚胎发育潜能有关.比较了不同初次卵裂时间(20～24 h,早期;25～36 h,中期;37～48 h,晚期;20～48 h,对照)的猪孤雌(parthenogenetic,PA)、体细胞核移植(somatic cell nucleartransfer,SCNT)胚胎的囊胚发育率、扩张囊胚发育率和囊胚细胞数,评价其体外发育能力.发现早期卵裂的PA胚胎发育到第6天的囊胚发育率显著高于中期、晚期以及对照组(P<0.05;54.0%vs.19.6%,5.4%,18.7%).扩张囊胚发育率,早裂胚胎同样优于其他组.早期卵裂的SCNT胚胎发育到第6天的囊胚比率高于中期卵裂胚胎(32.2%vs.23.5%),而晚期卵裂胚胎发育到囊胚的比率最低(6.3%).早期卵裂的SCNT胚胎发育到第6天的扩张囊胚比率显著高于其余各组(P<0.05;18.9%vs.5.9%、3.1%、7.4%).囊胚细胞数在早期、中期、晚期三组之间表现出下降趋势.将早期卵裂的SCNT胚胎与未经挑选的对照组胚胎分别进行移植,观察其体内发育能力.移植早裂SCNT胚胎的受体在产仔数和克隆效率上均明显高于未经挑选胚胎的受体(4.7 vs.2.1;3.9%vs.0.9%),说明早裂胚胎着床后具有更强的发育能力.以上结果表明:初次卵裂时间可以作为猪克隆胚胎发育潜能的重要标识,选择早裂的胚胎进行移植,有助于提高克隆效率.

小型猪克隆胚胎体外培养阶段的优化

本试验从卵母细胞卵丘多少和初次卵裂时间早晚2个方面进行研究，旨在改善小型猪克隆方案的体外培养环节，提高克隆效率。将卵母细胞按卵丘多少分成3组，比较卵母细胞的成熟效果，取成熟效果好的卵母细胞进行后续试验；PA和SCNT试验均按初次卵裂时间早晚分成3组，在体外培养条件下，比较胚胎的卵裂率和囊胚率。结果表明，卵丘多的卯母细胞体外成熟39～40 h和卵丘少的卵母细胞体外成熟41～42 h，比不区分卵丘多少的卵母细胞体外成熟39～42 h的成熟效果要好；初次卵裂时间发生在26 h以前的胚胎比26 h之后的胚胎在数量和质量上都明显优越，前者胚胎的卯裂率和囊胚率显著高于后者，此结果在孤雌激活（parthenogenetic，PA）胚胎和体细胞核移植（somatic cell nucleartransfer，SCNT）胚胎的体外试验中均得到验证。本研究完善了小型猪克隆方案的体外培养环节，为器官异种移植提供相关技术参考。

发育潜能不同的猪孤雌胚胎差异表达基因的筛选

本试验以猪孤雌胚胎为材料,根据初次卵裂时间的早晚划分出发育能力不同的2组胚胎,比较其母源mRNAs丰度。利用mRNA差异显示技术（mRNAdifferential display reverse transcription PCR,DDRT-PCR）筛选出2组胚胎中表达丰度不同的母源mRNAs,并经反Northern blotting验证,结果发现,有8条差异表达的阳性cDNA片段（E1-E4;L1-L4）,克隆、测序后与GenBank数据库进行同源性比对分析,其中6条（E1、E2、E4、L1、L2、L4）与已知ESTs有较高的同源性,E3与人CPEB2的同源性为97%,L3与人hnRNPA1的同源性为89%。因此,CPEB2和hnRNPA1是影响胚胎发育能力的重要候选基因。