抗菌药物对创伤弧菌脓毒症大鼠血清抗炎／促炎细胞因子的影响

创伤弧菌（vibrio vulnificus，VV）是一种嗜盐性革兰阴性（G^-）弧菌，广泛存在于海水及海产品中，适应于热带、亚热带环境，可引起人体严重感染、脓毒症等。以往临床观察发现，脓毒症及其引发的多器官功能障碍综合征（MODS）是VV脓毒症患者死亡的主要原因。大量激活的炎性细胞所释放的多种内源性介质参与了脓毒症炎症反应过程，包括促炎细胞因子和抗炎细胞因子。

创伤弧菌vvhA基因的克隆、原核表达系统的构建及鉴定

目的克隆创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)溶细胞素基因(vvhA),构建原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用PCR技术从Vv GTC333和WZ01株DNA中扩增全长vvhA基因,T-A克隆后测定其核苷酸序列。采用pET32a质粒构建vvhA基因原核表达载体,在E.coliBL21(DE3)宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导目的重组蛋白rVvhA表达,采用Ni-NTA亲和层析法提纯rVvhA,SDS-PAGE检测表达和提纯效果。采用兔抗Vv全菌抗体的Western Blot和兔抗rVvhA血清的免疫扩散试验鉴定其免疫反应性和免疫原性。结果所克隆的vvhA基因核苷酸序列与GeneBank公布的同源性分别为96.09%和98.26%。在0.5 mmol/L IPTG诱导下,rVvhA产量可占细菌总蛋白的18%。提纯的rVvhA经SDS-PAGE后仅显示单一的蛋白条带。重组蛋白rVvhA能与兔抗Vv全菌抗体发生特异性结合,免疫家兔可获得高效价抗体。结论该研究成功地构建了创伤弧菌vvhA基因高效原核表达系统,所表达的rVvhA具有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Vv免疫检测试剂盒及疫苗的抗原。