利钠肽受体家族在恶性肿瘤发生、发展中的作用及临床应用价值

利钠肽受体(NPR)家族包括利钠肽受体A(NPRA)、利钠肽受体B(NPRB)及利钠肽受体C(NPRC)。除NPRC、NPRA和NPRB属于鸟苷酸环化酶受体家族的成员。NPR家族广泛分布于人体中,具有多种生理功能。NPR家族在许多恶性肿瘤中表达,在肿瘤的发生发展中起着重要调控作用。NPR家族在恶性肿瘤中的表达和功能已在许多动物模型和研究中得到证实,但NPR家族表达的机制尚不清楚,对其机制的研究尚未应用于肿瘤的临床治疗。该文综述了NPR家族在恶性肿瘤发生、发展中的作用及其潜在的临床价值。

心肌缺血对大鼠延髓利钠肽受体表达的影响

目的:探讨大鼠延髓腹侧部利钠肽受体A(NPR-A)、利钠肽受体C(NPR-C)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和酪氨酸羟化酶(TH)的表达在心肌缺血后不同时程的动态变化。方法:大鼠分为空白对照组、假手术组和模型组。建立心肌缺血模型后,于术后3、7、14、18和28 d取材,用Western blotting方法检测延髓腹侧部吻段、尾段内NPR-A、NPR-C、ChAT和TH表达。结果:在模型复制后的上述时点,延髓腹侧部NPR-A的表达显著升高(P<0.05),NPR-C表达的升高晚于NPR-A,TH的表达显著低于空白对照组(P<0.05),在延髓腹侧部吻段ChAT的表达低于空白对照组(P<0.05),而在尾段与对照组无显著差异。结论:延髓心血管中枢内NPR-A和NPR-C的表达在心肌缺血后均显著升高,而ChAT和TH的表达则显著降低。利钠肽、ChAT和TH可能都参与了心肌缺血后心血管系统的植物神经调控。

利钠肽受体-A基因敲除对小鼠心血管系统的影响

目的研究利钠肽受体-A(NPR-A)在小鼠心血管系统中的作用。方法选择16周龄NPR-A基因敲除小鼠(实验组)与野生型小鼠(对照组)各7只,用鼠尾动脉血压心率测定仪测量小鼠的尾动脉收缩压(SBP)及心率(HR);小鼠处死后计算其心脏质量与体质量(HW/BW)比值;心肌组织行Masson染色后,用图像分析系统测量心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积和管腔面积之比(PVCA)。结果与对照组比较,实验组SBP、HW/BW、CVF及PVCA均明显升高,HR无明显统计学差异。结论NPR-A基因敲除小鼠表现为高血压、心室肥厚和纤维化。

心肌缺血对大鼠孤束核利钠肽受体表达的影响

目的 探讨心肌缺血后大鼠孤束核内利钠肽受体NPR-A和NPR-C表达的时程变化,并检测其与胆碱能和儿茶酚胺能神经元之间的关系.方法 雄性SD大鼠分为对照组、假手术组和模型组.复制心肌缺血模型,并于术后的3、7、14、18和28 d取材;用Western blot检测孤束核区域NPR-A和NPR-C的表达量;免疫荧光化学法观察NPR-A、NPR-C与ChAT、TH在孤束核内的共表达.结果 在缺血后14 d孤束核区NPR-A的表达显著低于对照组（P＜0.05）,而后逐渐升高,至缺血后28 d显著高于对照组（P＜0.01）;NPR-C的表达从缺血第3～18天均显著低于对照组（P＜0.01）;孤束核内仅见少量的NPR-A/TH双标记神经元,而NPR-C/TH则较多;未见ChAT与NPR-A或NPR-C双标记神经元的分布.结论 心肌缺血后,在孤束核内利钠肽的调节作用增强,这种调节可能不是直接影响胆碱能和儿茶酚胺能神经元的活动来实现的.

心肌缺血对大鼠肾皮质利钠肽受体表达的影响

目的探讨大鼠肾皮质利钠肽受体A(NPR-A)和受体C(NPR-C)的表达在心肌缺血后不同时程的动态变化。方法大鼠分为空白对照组、假手术组和模型组。分别于复制心肌缺血模型后的第3、7、14、18、28天取材,用Western blotting方法检测肾皮质内NPR-A和NPR-C的表达。结果在上述时间点上,肾皮质NPR-A的表达显著性降低(P<0.01),NPR-C表达呈现由缺血后第3天到缺血后第18天由低到高的波动变化,到缺血后第28天逐渐恢复至空白对照组水平。结论心肌缺血后,动物机体钠和水的滞留与NPR-A表达的降低以及NPR-C表达的升高密切相关。

利钠肽受体-A基因敲除小鼠的繁育与鉴定

目的:繁殖和鉴定NPR-A基因敲除小鼠。方法:将所引进的雄性野生型和雌性NPR-A基因敲除杂合子小鼠进行交配繁殖,可以得到野生子、杂合子及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定。结果:NPR-A基因敲除小鼠的饲养和繁殖均获得成功,成功获得了较多的NPR-A基因敲除纯合子小鼠。结论:雌、雄性NPR-A基因敲除杂合子小鼠交配是繁育NPR-A基因敲除纯合子子鼠的较好方法;用PCR方法能够精确鉴定NPR-A基因敲除纯合子子鼠。

免疫绵羊利钠肽受体C胞外区对阿勒泰羊血液生理生化指标的影响

利钠肽(NP)具有促进机体脂肪分解的作用,但其半衰期受利钠肽受体C(NPRC)表达水平调控,通过免疫途径中和机体NPRC有望延长NP发挥作用的时间。本研究根据大肠杆菌对密码子的偏爱性对绵羊NPRC胞外区基因进行密码子优化,通过全基因合成技术合成优化后的NPRC胞外区(NPRCo)基因并构建大肠杆菌表达载体pET28a(+)-NPRCo。经IPTG诱导后NPRCo在E.coli BL21(DE3)中获得表达,经Ni-NTA纯化和Western Blotting鉴定获得重组NPRC胞外区(rNPRCo)。选取16只2月龄左右雌性阿勒泰羊,随机分为试验组和对照组,分别于颈部皮下免疫rNPRCo 200μg/只或生理盐水。2周后加强免疫1次(100μg/只)。分别于免疫前、免疫后第15天、第30天、第90天和第180天空腹静脉采集血液,分离血浆用于测定抗体和血液生理生化指标。结果表明,主动免疫rNPRCo后阿勒泰羊可持续产生高水平的抗体;主动免疫rNPRCo对阿勒泰羊血液中葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇浓度均无显著影响,但可显著升高免疫后第15天、第180天时甘油和第180天游离脂肪酸浓度,并显著降低免疫后第180天时血浆中甘油三酯浓度。由此可见,免疫重组绵羊利钠肽受体C胞外区蛋白质对雌性阿勒泰羊脂肪代谢具有一定的调节作用。

人内淋巴囊的利钠肽受体

心房利钠肽是一组激素,在上世纪80年代早期发 现于心房乳头肌上,它们作用于平滑肌,在肾脏有舒张血管、利尿排钠的作用。

电针对焦虑大鼠胸腺组织形态、心钠肽和利钠肽受体-A表达的影响

目的通过观察电针对焦虑模型大鼠胸腺组织形态、胸腺心钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和利钠肽受体-A(natriuretic peptide receptor type A,NPR-A)表达的影响,探讨针刺调节焦虑障碍免疫功能的可能机制。方法将34只健康SD大鼠随机分为空白组(10只)、模型组(12只)和电针组(12只)。模型组和电针组大鼠均采用慢性不可预见性应激刺激方法复制焦虑模型。电针组运用电针刺激内关和神门穴,隔日1次,每次留针15 min,持续15日。其余两组在同一时间以相同方法固定15 min,未予电针治疗。运用高架十字迷宫实验测试大鼠焦虑行为;光学显微镜观察胸腺组织病理改变;免疫组化法观察胸腺ANP、NPR-A的表达。结果模型组大鼠胸腺组织形态发生重度萎缩,胸腺小叶结构不清,胸腺皮髓界限不清,淋巴细胞排列疏松,胸腺小体体积明显增大。电针组大鼠胸腺轻度萎缩,胸腺小叶结构存在,皮髓分界清楚,皮质区淋巴细胞稠密,髓质区增宽。与空白组比较,模型组大鼠在开臂的次数(open-arms entries,OE)占进入开闭臂总次数的百分比(OE%)明显下降(P<0.05),ANP表达升高(P<0.05),NPR-A表达降低(P<0.01);与模型组比较,电针组OE%值明显升高(P<0.05),ANP表达降低(P<0.05),NPR-A表达升高(P<0.01)。结论电针除具有降低大鼠焦虑情绪的作用外,还可通过干预胸腺ANP的合成和分泌及其特异性受体NPR-A的表达,改善由于慢性应激所致的胸腺受损。

利钠肽C受体介导C型利钠肽舒张猪冠状动脉的作用机制

目的探讨利钠肽C受体(NPR-C)途径在C型利钠肽(CNP)舒张猪冠状动脉中的作用机制。方法采用猪冠状动脉环张力测定法,观察CNP和NPR-C激动剂cANF4-23对猪冠状动脉的舒张作用,然后加入NPR-C阻断剂cANF4-28、Gi蛋白阻断剂百日咳毒素(PTx)和四种钾通道阻断剂,观察对两者舒张血管效应的影响。结果10-6 mol/L的CNP和cANF4-23对血管的最大舒张率分别为36.51%±3.96%和42.37%±17.60%,两组舒张血管作用比较差异无统计学意义(P>0.05);cANF4-28和PTx均能降低CNP和cANF4-23的舒张血管作用(P<0.05);四乙胺、格列苯脲或氯化钡均能明显抑制CNP的血管舒张作用(P<0.05);氯化钡使cANF4-23的血管舒张作用明显降低(P<0.05)。结论 NPR-C受体途径的舒张血管作用可能是通过Gi蛋白耦联内向整流钾通道实现的。

C型利钠肽及其受体在水牛卵泡中的表达分析

为了探明C型利钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)及其受体(natriuretic peptide receptor,NPR)在水牛卵泡中的表达模式,本研究首先采用实时荧光定量PCR技术检测水牛卵巢中利钠肽家族主要成员A型、B型、C型利钠肽(ANP、BNP、CNP)及其Ⅰ型、Ⅱ型受体(NPR1、NPR2)的mRNA表达情况,然后利用免疫组化技术对水牛卵泡中CNP及NPR2蛋白进行定位,最后利用实时荧光定量PCR技术检测颗粒细胞和卵丘细胞中CNP及NPR2的mRNA表达规律。结果显示,水牛卵巢主要表达CNP及NPR2,且在各级卵泡中均有表达,其中,CNP主要在壁层颗粒细胞中表达,NPR2主要在卵丘细胞中表达;颗粒细胞上CNP mRNA表达水平显著高于卵母细胞周围的卵丘细胞(P<0.05),而卵丘细胞上NPR2mRNA表达水平显著高于颗粒细胞(P<0.05)。综上所述,在利钠肽主要家族成员和受体中,CNP和NPR2在水牛卵巢中呈现强表达,CNP主要在壁层颗粒细胞中表达,而NPR2主要在卵母细胞周围的卵丘细胞中表达。

利钠肽C受体在利钠肽舒张猪冠状动脉血管中的作用

目的:探讨利钠肽C受体是否参与3种利钠肽的舒张血管作用。方法:采用离体血管环灌流方法,观察心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、C型利钠肽(CNP)、硝酸甘油和利钠肽C受体激动剂cANF4-23对猪冠状动脉的作用;然后加入利钠肽C受体阻断剂cANF4-28观察利钠肽舒张血管作用的变化。实验分为8组(n分别=8):分别为ANP组、BNP组、CNP组、硝酸甘油组、cANF4-23组、cANF4-28+ANP组、cANF4-28+BNP组和cANF4-28+CNP组。结果:CNP组冠状动脉最大舒张率(36.5±4.0)%低于ANP组(60.4±22.6)%、BNP组(68.5±11.5)%和硝酸甘油组(53.8±6.9)%,差异均有统计学意义(P均<0.05);其余各组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。cANF4-28+CNP组最大舒张率为(21.3±10.3)%与CNP组(36.5±4.0)%比较冠状动脉最大舒张率明显减弱(P<0.05),差异有统计学意义。cANF4-23组冠状动脉最大舒张率为(42.4±17.6)%,与CNP组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:3种利钠肽对猪冠状动脉均有良好的扩张作用;利钠肽C受体参与了CNP对猪冠状动脉的舒张作用,而没有参与ANP和BNP的扩张冠状动脉作用。

利钠肽受体2的缺乏促进小鼠二叶主动脉瓣、主动脉瓣疾病、左心室功能不全以及升主动脉扩张

主动脉瓣疾病是无有效药物治疗的细胞介导的病变过程。C型利钠肽（C-type natriuretic peptide,CNP）抑制瓣膜间质细胞（valve interstitial cells,VIC）的肌纤维形成和成骨过程,并且在出现主动脉瓣狭窄时水平下调。然而,CNP信号是否调节体内主动脉瓣的健康状态尚不清楚。该研究旨在确定小鼠CNP信号通路的缺失是否导致主动脉瓣疾病加速发展。

利钠肽系统与高血压的研究进展

利钠肽系统主要包括ANP、BNP、CNP及其受体NPRA、NPRB、NPRC,利钠肽通过与其受体结合从而发挥一系列生理作用如利钠、利尿、扩张血管而起降压作用。近年来研究发现,改变某一利钠肽或利钠肽受体成分表达,血压将出现不同程度改变(升高或下降);注射利钠肽可使血压下降。利钠肽系统在高血压诊治方面有可能在临床上受到日益重视。

雌二醇对大鼠生长板软骨细胞C型利钠肽及胰岛素样生长因子1表达的影响

目的·探讨不同浓度的17β雌二醇(17βE2)对大鼠生长板软骨细胞C型利钠肽(CNP)、利钠肽受体B(NPR-B)及胰岛素样生长因子1(IGF1)的调控作用,及其对软骨细胞增殖的影响。方法·Wistar大鼠8只,于出生后14 d处死,分离胫骨上段骺软骨板,取得软骨细胞并培养48 h后,于培养液中加入17βE2,并使其终浓度分别为10^(-4)、10^(-6)、10^(-8)、10^(-10)和10^(-12) mol/L,同时设空白对照组。继续培养48 h。之后利用CCK8法测定软骨细胞增殖能力,应用ELISA法测定培养液中CNP和IGF1的浓度,并利用实时定量PCR检测软骨细胞CNP、NPR-B及IGF1 mRNA的相对水平。结果·不同浓度的17βE2对生长板软骨细胞增殖有显著影响。当17βE2的浓度为10^(-8) mol/L时,其对软骨细胞的促增殖效应最强;当浓度进一步增至10^(-4) mol/L时,则抑制其增殖。随着17βE2浓度的增加,细胞培养液中CNP的浓度以及软骨细胞中CNP mRNA相对水平均出现明显差异,以10^(-8) mol/L组CNP的浓度和mRNA水平最高,10^(-4) mol/L组为最低。IGF1同样在10^(-8) mol/L组的浓度和mRNA表达水平达到最高,但最低值分别出现在10^(-10) mol/L组和10^(-12) mol/L组。软骨细胞增殖水平与CNP的mRNA及蛋白浓度均呈正相关(均P=0.000),但与IGF1的mRNA及蛋白浓度水平无明显相关性(均P>0.05)。结论·17βE2对大鼠生长板软骨细胞增殖调控具有剂量-效应关系,呈现出高浓度抑制、一定浓度范围内(10^(-10)~10^(-8) mol/L)促进的作用;该作用与其调节生长板软骨细胞表达CNP水平呈正相关。

利钠肽系统在肾脏的研究进展

利钠肽(ANP、BNP和CNP)是心房、心室肌及血管内皮细胞产生和分泌的一类具有强烈利尿、利钠、扩血管及降低血压等作用的多肽激素,通过结合靶器官的利钠肽受体(NPR-A、NPR-B和NPR-C)在全身和局部均发挥重要的调节作用。肾脏作为利钠肽最重要的靶器官之一,研究发现肾脏存在三型利钠肽及其受体的mRNA和蛋白质的表达,并形成一个局部的肾脏利钠肽系统。本文对肾脏利钠肽系统的研究现状及其重要意义作一综述。

利钠肽系统的调节及其在心力衰竭时的变化

利钠肽是心血管系统分泌的肽类,这一系统通过利尿利钠调节体液平衡,舒张血管,降低心脏后负荷;同时通过旁分泌/自分泌方式抑制心肌细胞肥大,减缓心室重构。利钠肽系统的激活是心力衰竭时心血管系统重要的代偿机制之一。重组人B型利钠肽(rhBNP)已用于治疗急性失代偿性心力衰竭,并能够迅速改善心力衰竭患者的临床症状。但是,rhBNP在临床使用过程中,除了药物的安全性曾引起较大的疑虑外,肾脏、血管等器官对利钠肽存在低反应性;而且在大规模的临床试验中,rhBNP也未能增加心力衰竭患者的生存率。因此,对利钠肽系统在心力衰竭时的调节研究,有助于对疾病的认识。

C型利钠肽与心力衰竭

C型利钠肽是利钠肽家族中的一员,高度保守,分布广泛,与心房利钠肽和脑利钠肽具有相似的结构和生理特性。C型利钠肽主要和利钠肽受体B结合,通过抗纤维化、抗过度增殖、抗过度肥大、抗炎症等生理效应在心血管疾病中发挥作用。心力衰竭时体内C型利钠肽的变化对疾病有预测意义,外源性C型利钠肽通过改善心脏功能对心力衰竭心脏起保护性作用。现就C型利钠肽的特征及其与心力衰竭的关系做一综述。

心钠素及其受体在不同年龄大鼠耳蜗中的表达

目的探讨心钠素(ANP)及利钠肽受体A(NPR-A)在不同年龄段大鼠耳蜗组织中的表达情况。方法分离不同年龄段大鼠耳蜗组织,采用RT-PCR方法检测ANP及其受体NPR-A的表达。结果在大鼠耳蜗组织中可以检测到ANP及NPR-A基因的表达,并发现随着大鼠发育成熟其耳蜗组织中ANP表达出现明显降低甚至消失,而NPR-A的表达无明显变化。结论ANP及NPR-A基因在耳蜗组织中表达,提示耳蜗组织具有合成ANP及NPR-A的能力,但随着内耳的成熟,ANP的表达逐渐降低而NPR-A的表达没有明显变化,因而推断ANP可能在大鼠耳蜗发育过程中具有重要作用,成熟大鼠内耳ANP的来源主要是机体旁分泌至内耳而发挥作用的。

针刺对焦虑大鼠心房利钠肽及其受体的影响

目的研究针刺对不可预知的慢性情绪应激(Chronic emotional stress,CES)焦虑模型大鼠心脏利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)及其利钠肽受体-A(natriuretic peptide receptor type A,NPR-A)的影响,探讨针刺"宁心安神"抗焦虑效应的外周作用机理。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(10只)、模型组(10只)和针刺组(10只)。模型和针刺组采用CES方法复制焦虑模型。选用具有"宁心安神"作用的"内关"和"神门"穴进行针刺治疗,每次治疗30min,隔日1次,持续15 d。运用高架十字迷宫实验测试大鼠焦虑行为;免疫组化法观察左、右心房ANP及NPR-A的表达。结果 (1)模型组大鼠在高架十字迷宫中进入开臂的次数(open-arms entries,OE)占进入开臂和闭臂总次数的百分比(OE%)较空白组明显下降(P<0.01),针刺组OE%值较模型组有明显升高(P<0.05);(2)与空白组相比,模型组大鼠左心房和右心房ANP及NPR-A表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组相比,针刺组较模型组左心房和右心房ANP及NPR-A表达水平均明显升高(P<0.05)。结论针刺"宁心安神"抗焦虑作用的发挥可能与其调节外周左、右心房ANP及NPR-A水平有相关。