超声波辅助优化博落回根原阿片碱、别隐品碱提取工艺的研究

试验旨在使用超声波辅助优化博落回根原阿片碱、别隐品碱的提取工艺。采用单因素试验筛选提取工艺中的时间、液料比、提取次数的最佳条件,通过正交试验确定最佳提取条件;采用硅胶层析纯化原阿片碱、别隐品碱,使用液相色谱、红外光谱、紫外光谱表征所得产物。结果显示,液料比30 mL/g、提取1次、提取时间为30 min时,原阿片碱、别隐品碱提取率最高,分别为92.64%、90.93%。表征结果显示,提取物经柱层析纯化所得物质确定为别隐品碱和原阿片碱。研究表明,试验所用方法简单、快速,可为博落回资源的利用提供参考。

别隐品碱抗心律失常作用及其单相动作电位的作用

目的观察别隐品碱(ALL)的抗动物心律失常作用。方法以氯仿诱发小鼠室颤、以CaCl2-ACh混合液诱发小鼠心房纤颤、肾上腺素致豚鼠心律失常,以乌头碱诱发的豚鼠左室乳头肌收缩节律改变,选择大鼠结扎冠状动脉前降支,观察ALL抗心律失常的效应。记录豚鼠和大鼠心脏的动作电位和单相动作电位。结果 ALL能明显降低氯仿诱发小鼠室颤率,应用30,100 mg／kg的ALL后,CaCl2-ACh混合液诱发小鼠心房纤颤或扑动的发生率从 100％降低到53．3％和33．3％。ALL使肾上腺素致豚鼠心律失常的持续时间降低,并对乌头碱诱发的大鼠心室乳头肌收缩节律失常有明显拮抗效应。ALL可明显延长其心脏的动作电位时程和不应期,这可能是其抗心律失常效应的电生理基础。结论 ALL呈现出多种抗实验性心律失常的作用。

别隐品碱抗心律失常效应及其对动作电位的影响

目的研究别隐品碱(ALL)抗心律失常效应及其对心室肌动作电位的影响.方法选择大鼠和豚鼠以静脉给乌头碱、哇巴因和氯化钡造动物心律失常的模型,观察ALL对心律失常的效应,分离豚鼠乳头状肌观察ALL对动作电位的影响.结果ALL(30和100mg/kg)对乌头碱、哇巴因和氯化钡致动物实验性心律失常有良好的对抗作用,使各种试剂诱发的室早、室速、室颤及停搏的剂量增加.ALL可降低动作电位上升幅度(APA)和0相最大上升速率(Vmax).3.0～100.0 μmol/L的ALL以浓度依赖性方式使离体乳头状肌动作单位时程(APD)延长,其中30.0μmol/L的ALL使APD90延长67.5%.结论ALL具有抗实验性心律失常的效应,此效应可能与其影响心肌组织的电生理密切相关.

HPLC法同时测定博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱的含量

目的采用HPLC法同时检测博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱含量。方法采用Luna-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH 3.5)-乙腈(78∶22)为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温25℃,检测波长284 nm。结果原阿片碱、别隐品碱含量测定方法的线性关系良好,线性范围和相关系数分别为4.2～52μg/mL(r=0.999 4),6.9～86μg/mL(r=0.999 9);平均回收率分别为99.2%、99.4%;RSD分别为0.9%、1.8%(n=6)。结论该方法操作简便、准确、灵敏度高,适合于博落回中原阿片碱、别隐品碱含量的同时测定,不同部位两种生物碱均存在一定的差异。

超声-酶法提取两面针中别隐品碱的工艺优选

以别隐品碱提取率为指标,先考察提取溶剂加酸和酶解预处理对两面针超声提取的适用性,再用正交试验优化超声功率、提取次数和溶剂量,最后动态过程优化超声提取时间。结果证明提取溶剂p H≤3不利于别隐品碱的提取。最佳工艺条件为:复合酶预处理后,以体积分数60%乙醇超声(250 W)提取3次,第1次以7倍量溶剂提取18 min,第2次以3倍量溶剂提取12 min,第3次以2倍量溶剂提取12 min,别隐品碱提取率为89.5%。该工艺经济、高效、节能、省时,可为开发利用别隐品碱提供实验基础。

原阿片碱和别隐品碱对DNA拓扑异构酶I的抑制活性

目的研究原阿片碱(protopine)和别隐品碱(allocryptopine)对DNA拓扑异构酶I(TOPO I)活性的影响。方法以pBluescript-II-KS(+)DNA为底物,采用琼脂糖凝胶电泳检测protopine和allocryptopine对TOPO I介导的pBluescriptDNA解旋反应的影响。结果在同等浓度下(100μmol/L),protopine和allocryptopine具有显著的TOPO I抑制作用,且抑制浓度与阳性对照药喜树碱相当。结论对TOPO I活性的抑制可能是protopine和allocryptopine体外抗肿瘤作用机制之一。

普罗托品和别隐品碱的药代动力学研究进展

原阿片碱和α-别隐品碱是普罗托品类生物碱中重要的两种生物碱,具有抗菌、消炎等多种生物活性,因其还具有抗寄生虫生物活性,将是一个兽药和药物饲料添加剂开发的新选择。近年来,兽药药代动力学研究逐渐开始采用高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法。文章综述了近十几年来这两种生物碱在大鼠、兔、比格犬等动物的体内药代动力学研究进展。

基于UPLC-Q-TOF-MS的α-别隐品碱在大鼠体内的代谢产物分析

目的分析α-别隐品碱经灌胃给药后在大鼠体内的代谢产物,阐明其在大鼠体内的代谢途径。方法大鼠灌胃给药α-别隐品碱20 mg·kg-1后,分别收集血浆、尿液及粪便样品,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)技术进行分析,获得各样品中代谢产物的保留时间、精确分子量、二级碎片信息。利用MetabolitePilotTM代谢软件进行预测,预测结果结合原型化合物的质谱裂解规律进一步进行裂解行为的分析,鉴定α-别隐品碱在大鼠体内的代谢产物。结果共鉴定出25个代谢产物,Ⅰ相代谢产物主要为α-别隐品碱甲氧基去甲基化、亚甲二氧基开环及开环后去甲基、氧化产物,Ⅱ相代谢产物主要为Ⅰ相代谢产物的葡萄糖醛酸、硫酸结合产物及少量葡萄糖基化产物。结论采用UPLC-Q-TOF-MS结合MetabolitePilotTM软件及化合物的质谱裂解规律可实现α-别隐品碱代谢产物的快速分析,为进一步研究其药效物质基础提供参考。

别隐品碱对小鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的观察别隐品碱(All)对小鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法利用双酶法消化得到单个心室肌细胞,全细胞膜片钳记录ICa-L。记录台式液中细胞电流作为自身对照,细胞池中灌流含All的细胞外液,药物终浓度经预实验选取30.0μmol/L,待药物浓度在细胞池稳定后记录电流的改变,观察ICa-L对All的浓度依赖性,记录电流和动力学参数改变。结果①当刺激电位为0 mV时,30.0μmol/L All可使ICa-L峰值密度由-6.3±0.6 pA/pF增加至10.5±0.3 pA/pF(n=10,P<0.01),All增大的效应随浓度增高而加强;②ICa-L半失活电压V1/2右移,从对照的-23.5±2.6 mV移至-14.8±3.4 mV(n=10,P﹤0.05);③通道恢复时间常数(τ)从对照时的214.1±7.8 ms缩短至174.0±9.5 ms(n=9,P﹤0.01)。结论 All增加心室肌细胞ICa-L,增大窗电流。

别隐品碱对小鼠心房肌细胞T-型钙电流的作用

目的研究别隐品碱对小鼠心房肌细胞的T-型钙电流的影响。方法采用胶原酶Ⅱ急性消化分离小鼠心房细胞,别隐品碱被用灌流法作用于细胞,应用电压钳模式测量小鼠心房肌细胞T-型钙电流(I_(Ca,T))。结果在细胞外应用30μM别隐品碱能降低小鼠心房肌细胞I_(Ca,T)电流密度。在-40 mV电压下,使其峰值密度从(3.3±0.4)pA/pF减少至(1.7±0.2)pA/pF(n=15,P<0.01)。门控机制检测结果显示,别隐品碱可使I_(Ca,T)通道电流的稳态激活过程发生改变,曲线正向移动,使其失活后恢复时间常数(τ)延长,从(54.9±3.3)ms变为(75.6±3.4)ms(n=15,P<0.01)。揭示别隐品碱的作用机制可能通过抑制I_(Ca,T)稳态激活和失活后恢复过程所致。结论别隐品碱可降低小鼠心房肌细胞T-型钙电流密度,可能与其延迟通道激活及失活后再激活有关。

别隐品碱衍生物的合成及其生物活性

【目的】测定别隐品碱化合物抗植物病原真菌和杀灭兔痒螨的活性,为后续结构优化和药品研发提供依据。【方法】以从博落回中分离的别隐品碱为原药,对其十元氮杂环进行结构修饰,合成了12种衍生物A1～A12,采用质谱(ESI-MS)、核磁共振谱(1 H NMR和13 C NMR)对其结构进行表征。以嘧菌酯为阳性对照,采用菌丝生长速率法,测定50μg/mL目标化合物对6种常见植物病原真菌(苹果腐烂病菌(Valsa mali)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、玉米弯孢病菌(Curvularia lunata)、马铃薯干腐病菌(Fusarium solani)、水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryza))的体外抗菌活性;采用浸虫法检测5mg/mL目标化合物对兔痒螨(Psoroptes cuniculi)的体外杀灭活性。【结果】确认了12种别隐品碱衍生物的结构,它们对供试菌均具有不同程度的抑制活性,对兔痒螨具有一定的杀灭活性。其中,以化合物A11的抑菌活性和杀螨活性最高,其对苹果腐烂病菌的抑制率达73.28%,对兔痒螨的致死率达61.55%。【结论】原药别隐品碱十元氮杂环上的羰基被还原成羟基后,不仅提高了其抗菌活性和杀螨活性,同时也拓宽了其抗菌谱。

别隐品碱和原阿片碱在猪肝S9的代谢研究

试验采用高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱(HPLC-QqTOF-MS)技术,进行别隐品碱(ALL)和原阿片碱(PRO)在猪肝S9中的代谢研究。通过比较这些代谢物的精确分子量和产物离子与前体离子或代谢物的变化,进行了这些代谢物的结构鉴定。结果显示,在猪肝S9中检测到低浓度的ALL和PRO,分别鉴定出4种ALL和3种PRO的代谢物,O-去甲基和C2-C3位亚甲二氧环环裂后去甲基分别为ALL和PRO是猪肝体外的主要代谢途径,且2,3-亚甲二氧环去甲基比9,10-亚甲二氧环去甲基更占优势。其研究结果可为解释博普总碱的药动学和食品安全性评价提供理论依据。

别隐品碱抗肝纤维化作用

目的探讨别隐品碱(allocryptopine)对实验性肝纤维化的防治作用。方法采用CCl4复合因素诱导大鼠肝纤维化与血吸虫致小鼠肝纤维化模型,观察别隐品碱在造模同时(预防给药)和造模后(治疗给药)给药对脏器指数、肝功能、纤维化血清指标、脂质过氧化指标、肝组织胶原(CoI、CoIII)及羟脯氨酸(Hyp)表达的影响,并进行肝脏病理学检查。结果对CCl4所致肝纤维化大鼠模型,各剂量别隐品碱预防给药均能不同程度地降低肝指数及CoI表达(P<0.05、0.01),其中高剂量明显降低CoIII表达(P<0.01),中剂量明显降低脾指数、丙氨酸氨基转移酶(AST)的量(P<0.05);别隐品碱治疗组大鼠的肝指数、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)的量、CoIII表达明显降低(P<0.05、0.01);预防给药与造模后给药均不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度。对血吸虫致肝纤维化小鼠模型,别隐品碱预防给药显著降低小鼠ALT的量与Hyp水平(P<0.05),高剂量别隐品碱治疗给药能明显降低肝指数,降低血清PCIII、碘透明质酸(HA)、ALT的量(P<0.05、0.01),中剂量组肝指数、PCIII、HA的量明显降低(P<0.05);治疗给药组大鼠肝脏病变明显减轻。结论别隐品碱对实验性肝纤维化大鼠有较好的保护肝细胞、改善肝功能、抗肝纤维化作用。

大孔树脂分离纯化小果博落回果实中普托品类总生物碱的研究

目的研究不同型号大孔吸附树脂纯化小果博落回果实中的普托品类总生物碱(以原阿片碱和别隐品碱计)的工艺条件及参数。方法以静态饱和吸附量、静态洗脱率为考察指标,比较了5种大孔树脂,并对AB-8树脂的吸附量、吸附率、洗脱率进行了考察,以普托品类总生物碱转移率和纯度为指标对树脂吸附工艺条件进行了筛选。结果所比较的5种树脂中,AB-8型树脂具有最佳吸附及洗脱参数,其最佳工艺:上柱液浓度为0.258mg.mL-1,上柱液pH=8,上柱流速为1mL.min-1,90%乙醇洗脱,洗脱剂用量为3BV,对小果博落回普托品生物碱的动态吸附率和洗脱率均>90%,洗脱物中普托品类总生物碱含量>90%。结论 AB-8树脂适合于小果博落回果实中普托品类生物碱的分离与纯化。

博落回叶与小果博落回叶中4种生物碱的含量比较

目的比较博落回叶与小果博落回叶中4种生物碱含量的差异。方法 采用反相高效液相色谱法对博落回叶与小果博落回叶中4种生物碱———原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量进行比较研究。结果在博落回叶中原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量分别为0.48%～2.00%、0.36%～1.72%、0.18%～0.81%、0.07%～0.33%,小果博落回叶中分别为0.01%～0.13%、0.07%～0.48%、0.24%～0.75%、0.35%～1.24%。结论博落回叶中原阿片碱与别隐品碱含量较高;小果博落回叶中血根碱与白屈菜红碱含量较高。

小果博落回中5种生物碱的提取与分离

旨在探索出一种简单快速提取与分离小果博落回5种主要生物碱的方法,采用乙酸乙酯和正丁醇依次萃取φ=50%的乙醇提取液,将总生物碱分为苯并菲啶类化合物和普罗托品类化合物;对苯并菲啶类化合物采用化学转化法和一次柱层析,获得碘化血根碱和碘化白屈菜红碱;对普罗托品类化合物进行一次柱层析,获得原阿片碱、隐品碱和别隐品碱。结果表明,此方法具有简单、快速、高效和适宜于规模化生产的特点。

TLCS法测定不同月份血水草中四种生物碱的含量

本文以薄层扫描(TLCS)法测定了1996年3月至9月采集的血水草地下部分四种主要生物碱,即血根碱(Ⅰ)白屈菜红碱(Ⅱ),原阿片碱(Ⅲ)和α-别隐品碱(Ⅳ)的含量.结果表明:血水草中总生物碱的含量3月和9月最高,6月、7月和8月最低.四种生物碱之间,又以Ⅱ含量最高,Ⅰ和Ⅳ次之,Ⅲ含量最低.各生物碱含量高峰期也不一致,Ⅰ和Ⅱ为3月和9月,Ⅲ为7月,Ⅳ为3月和7月.

新型博落回植物源农药--硫酸血根碱

博落回提取物为博落回属多年生草本植物的提取物,主要成分为血根碱,还含有白屈菜红碱、原阿片碱、α-别隐品碱和β-别隐品碱。血根碱具有广谱的杀虫和杀菌活性,可以有效防治农业上的多种病虫害。作为植物源农药,血根碱具有环境相容性好和作用谱广等特性,可以作为农业综合防治的重要手段。本文介绍新型博落回植物源农药的理化性质、毒性、环境生物安全性评价、生物活性和登记情况。

岩黄连化学成分

目的：研究岩黄连（Corydalis suxicola Bunting）的化学成分。方法：采用、硅胶低压柱层析、制备性薄层层析和重结晶等方法进行分离纯化，根据化舍物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果：从岩黄连中分离得到14个化舍物，分别为：去氢岩黄连碱（dehydrocavidine，1）、黄连碱（coptisine，2）、齐墩果酸（oleanolic acid，3）、刺檗碱（oxvacanthine，4）、胡萝卜苷（daucosterol，5）、别隐品碱（allocryptopine，6）、β-谷甾醇（β-sitosterol，7）、白桦脂醇（betulin,8）、环桉烯醇（cycloeucalenol，9）、白桦脂酸（betulinic acid，10）、β-香树脂醇乙酸酯（β-amyrinacetate，11）、小檗碱（berberlne，12）、四氢掌叶防己碱（tetrahydropalmatine，13）、巴马汀（palmatine，14）。结论：化合物3—11、14为首次从该植物中分离得到。

双波长HPLC法同时测定两面针药材中5种成分的含量

目的:建立同时测定两面针药材中5种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Luna C_(18),流动相为乙腈-水(含0.2%磷酸、0.25%三乙胺)(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为273、284 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:别隐品碱、盐酸血根碱、氯化两面针碱、白屈菜红碱、芝麻素检测质量浓度线性范围分别为0.8~200、0.2~50、0.44~110、0.208~52、0.944~236μg/mL(r均为0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为101.47%~103.92%(RSD=0.92%,n=9)、102.52%~104.68%(RSD=0.63%,n=9)、97.55%~101.22%(RSD=1.09%,n=9)、103.35%~104.93%(RSD=0.71%,n=9)、99.31%~103.86%(RSD=1.34%,n=9)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于两面针药材中5种成分含量的同时测定。