巨大侧耳原生质体制备条件的优化

为优化巨大侧耳原生质体的制备条件,该研究以两株不同温型的巨大侧耳菌株PG46和PG79为材料,采用单因素和正交试验方法对原生质体制备的菌丝体菌龄、稳渗剂种类、溶壁酶浓度、酶解温度和酶解时间进行研究。结果表明:(1)在单因素实验中,巨大侧耳原生质体制备的适宜条件为菌龄5 d,溶壁酶浓度2.5%,0.6 mol·L^(-1)甘露醇,32℃(PG46)或27~35℃(PG79)酶解4 h。(2)正交试验验证并优化了单因素实验结果,组合2(菌龄5 d,溶壁酶浓度2.5%,0.6 mol·L^(-1)的甘露醇,32℃酶解4 h)可同时作为PG46和PG79原生质体制备的最适条件,原生质体产量分别为11.22×10^(6)CFU·mL^(-1)和7.28×10^(6)CFU·mL^(-1)。(3)F-test检验中,各因素对原生质体制备的影响程度依次为菌龄>溶壁酶浓度>酶解温度>酶解时间(PG46),菌龄>酶解时间>酶解温度>溶壁酶浓度(PG79)。综上所述,两株不同温型巨大侧耳菌株的原生质体制备条件基本一致,菌龄对两菌株原生质体得率的影响程度最显著。该研究结果可为后续巨大侧耳的杂交育种、遗传转化、全基因组测序等工作奠定基础,进一步推动巨大侧耳分子遗传学的发展。

响应面法优化六妹羊肚菌原生质体的制备条件

为获得高产、优质的六妹羊肚菌原生质体,以其菌丝为试验材料,运用单因素试验和响应面优化试验,探究原生质体的最佳制备条件。以原生质体产量为考察指标,根据酶解时间、酶质量分数、酶解温度和稳渗剂种类4个单因素的试验结果,运用Box-Behnken设计响应面优化试验,结果表明,在酶解时间3.23 h、酶质量分数2.28%、酶解温度30.26℃条件下,以甘露醇为稳渗剂,六妹羊肚菌原生质体产量可达5.07×10^(5)个/mL,验证试验(实际试验选取酶解时间、酶质量分数、酶解温度分别为3.2 h、2.3%、30℃)所得原生质体产量为(5.13±0.13)×10^(5)个/mL,两者差异不显著。对于六妹羊肚菌原生质体的制备,各因素的影响程度:酶解时间>酶质量分数>酶解温度,酶质量分数与酶解温度的交互作用有极显著影响(P<0.01),酶解时间与酶解温度的交互作用有显著影响(P<0.05)。

南阳酵母原生质体制备与再生条件研究

研究南阳酵母原生质体形成与再生的最佳条件。获取原生质体采用酶法,再生采用双层高渗平板法,因素重要性分析采用正交试验。结果表明:菌龄10h,以2.0%蜗牛酶加0.5%纤维素酶的混合酶液进行酶解破壁,酶解温度30℃,酶解时间2.5h,以0.6mol.L-1蔗糖做再生培养基的渗透压稳定剂,原生质体形成率91.40%,再生率10.56%。不进行预处理,在试验条件下,对南阳酵母原生质体形成与再生影响因素依次为:菌龄>酶解时间>酶浓度>渗稳剂。

桑树内生真菌Macrophomina phaseolina MOD-1原生质体制备条件的优化试验

为了应用原生质体技术改良桑树内生产油真菌Macrophomina phaseolina MOD-1的产油性能,对影响MOD-1原生质体制备的酶液组分、菌龄、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂种类等因素进行优化。通过正交试验得到最佳酶液组合为:20mg/mL纤维素酶+20 mg/mL溶菌酶+5 mg/mL蜗牛酶。在此基础上应用响应面分析法获得影响MOD-1原生质体产量的显著因素有菌龄和渗透压稳定剂浓度,且均产生负效应。以此作为中心点进一步优化原生质体制备条件为:培养44.58 h的MOD-1菌丝,用0.66 mol/L KCl作渗透压稳定剂,30℃条件下酶解4 h。在此优化条件下,获得的MOD-1菌株原生质体产量可达7.06×106个/mL,优化条件具有实用价值。

葡萄溃疡病菌原生质体的制备与再生条件的优化

对葡萄溃疡病菌菌丝摇培时间、酶解时间、渗透压稳定剂种类及再生培养基类型进行了探索和优化,建立了葡萄溃疡病菌稳定、高效的原生质体制备体系。以SR培养基作为再生培养基时,原生质体再生率达到最高,为32.2%。该研究为建立葡萄溃疡病菌高效、稳定的遗传转化体系,开展其致病机理的研究奠定了基础。

猴头菌原生质体制备条件的研究

比较了不同酶液、酸碱度、渗透压稳定剂，菌龄和菌丝培养基成分等因素对猴头菌菌丝释放原生质体作用的影响。结果表明：在土豆培养基（ＰＤＰ）上静止浅层培养９６小时的菌丝，用２％的溶壁酶液，以０．６ｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ＿４为渗透压稳定剂，在ｐＨ５．５的条件下酶解，获得的原生质体数最大。

不吸水链霉菌公主岭变种769原生质体制备条件初探

为获得较高的不吸水链霉菌公主岭变种769(简称链霉菌769)原生质体产率,采用酶解法制备原生质体,通过单因素试验法探索链霉菌769原生质体制备的最佳条件,包括溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂。试验结果表明,链霉菌769孢子在溶菌酶浓度为3.5mg/mL,酶解温度为36℃,酶解时间3h,以P缓冲液为渗透压稳定剂的条件下原生质体形成效果最好,原生质体再生率达到62.5%。链霉菌769原生质体的获得为以原生质体为基础的基因转移系统的建立奠定了基础。

茶薪菇原生质体制备条件的分析

以茶薪菇为出发菌株,对其原生质体制备条件进行研究,具体分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解时间和温度等因素对茶薪菇原生质体产出量的影响。结果表明:采用液体发酵培养第5 d的菌丝体,以0.4 mol/L KC l作渗透压稳定剂,加入0.20%混合酶(纤维素酶与蜗牛酶按1∶1混合)在25℃下酶解3 h,制备原生质体效果最佳,原生质体产出量可达2.5×107个/mL。

嘧肽霉素生物合成阻断突变株原生质体制备和再生条件的研究

针对嘧肽霉素的生物合成阻断突变株,研究了其最佳的菌体培养、原生质体制备和再生条件。采用改良的含15%蔗糖、0.5%甘氨酸的YEME液体培养基振荡培养36h,获得细腻丰富的菌丝体;对不同的酶浓度、酶解温度和酶解时间进行3因子4水平的正交试验,筛选最佳酶解条件为:溶菌酶浓度2mg·mL-1,28℃,作用90min,可获得最高的制备率为99%;再生培养基以R2YE为最佳,采取直接涂布方式,25.5℃培养可达48%的再生率。

酒酒球菌SD-2a原生质体制备条件研究

通过对预处理剂质量浓度、酶质量浓度、酶解时间、菌龄等影响因素的分析,以及渗透压稳定剂的筛选,对酒酒球菌SD-2a原生质体的制备条件进行了研究。结果表明,酒酒球菌SD-2a原生质体制备的最佳条件为:菌龄20 h,青霉素G钠质量浓度0.5μg/mL,酶质量浓度1mg/mL,酶解时间30 min,渗透压稳定剂采用SMM缓冲液,再生培养基采用添加0.7 mol/LKCl的ATB培养基,再生培养时采用双层培养基厌氧培养,可以保证较好的形成率和再生率。

双歧杆菌原生质体制备条件的探讨

目的 探讨Bifidobacterium(双歧杆菌 )原生质体制备的条件。方法 将培养至对数生长期的双歧杆菌用α 淀粉酶和溶菌酶进行酶解脱壁。结果 在 37℃条件下 ,80 0 μg/ml溶菌酶和 5 0 0 μg/mlα 淀粉酶用于双歧杆菌联合酶解脱壁 6 0min ,双歧杆菌原生质体形成率为 80 %左右。结论 α

产色链霉菌MY02原生质体制备条件的研究

菌株MY02为本实验室自蔬菜保护地土壤中分离获得的一株链霉菌菌株熏该菌株对多种植物病原菌的抑菌活性较好,菌株MY02在菌丝培养液中的对数生长期为50～55h。培养基中加入0.5%～1%的甘氨酸可以提高菌丝体对溶菌酶的敏感度,25%的蔗糖浓度即可保证形成一定量的菌丝,又可使菌丝的分散程度较好,有利于原生质体的释放;对数生长后期的菌丝体形成原生质体的速度与初期、静止期差别不显著。在35℃水浴条件下,菌株MY02最佳溶菌酶浓度为2mg·mL-1,形成每毫升超过107个原生质体的时间30min。

灰树花原生质体制备与再生条件的研究

本文对灰树花 51 #菌株原生质体制备及再生条件进行了研究。结果表明 :液体摇瓶振荡培养 7天的菌丝 ,以 0 .6M的甘露醇作渗透压稳定剂 ,采用浓度为 2 %的真菌溶壁酶 ,在pH5 .5、30℃条件下酶解 5小时 ,原生质体制备率最高 ,可达到6 .6× 1 0 6 个 /ml,所得原生质体在两种不同的培养方式中均实现了再生。

苜蓿原生质体电融合适宜条件的筛选

为改良培育苜蓿(Medicago)新品种,拟建立苜蓿原生质体融合体系。通过电融合方法,使俄罗斯杂花苜蓿(M.varia)原生质体和甘农4号紫花苜蓿(M.sativa‘Gannong No.4’)原生质体进行非对称融合,获得了杂交细胞,研究不同失活处理条件、电场条件、原生质体密度对苜蓿原生质体融合的影响。结果表明:经过紫外灯辐射5min的俄罗斯杂花苜蓿原生质体和6mmol.L-1 IOA处理的甘农4号紫花苜蓿原生质体,密度调至3×105～5×105个.mL-1,以交流电场强度15～20V.cm-1、交流频率2000～2500kHz,直流脉冲场强200～250V.cm-1、脉冲宽幅40μs、脉冲个数为3的条件为最适电融合条件,此时一对一有效融合率最高可达13.8%。

链格孢菌原生质体的制备与限制性内切酶介导整合(REMI)转化的致病性诱变

以链格孢菌Alternariaalternata菌株NEW为供试菌株,研究了菌龄、酶系统、酶解时间、酶解温度及稳渗剂对链格孢菌原生质体制备的影响。结果表明,制备链格孢菌原生质体比较适宜的条件为PD液体培养基培养20h,以0.7mol/LNaCl为稳渗剂、1%LysingEnzyme、1%Drislase和1%Snailase3种酶溶液混合使用,30℃酶解3h。对原生质体进行了限制性内切酶介导整合(REMI)转化,筛选到了链格孢菌弱致病突变株NEW001,为致病相关基因的标记和克隆打下了基础。

冬虫夏草无性型菌丝体的原生质体制备条件研究

以冬虫夏草无性型中国被毛孢为原材料,通过液体培养获得菌丝体,经酶解处理后在不同条件下获得原生质体,以研究酶的种类及浓度、渗透压稳定剂及浓度、酶液pH值以及酶解时间等不同因素对中国被毛孢原生质体制备的影响。结果显示,中国被毛孢菌株原生质体的最佳制备条件为:使用浓度配比分别为4和3 mg·mL-1的Yatalase和Glucanex酶,在1.0 mol·L-1KCl作为渗透压稳定剂,酶液pH值为6,酶解3 h,所得原生质体量最多。

响应面法优化玉木耳原生质体制备条件

【目的】优化玉木耳原生质体制备条件,获得高质量、高产量的原生质体,为后续玉木耳遗传育种、优良性状筛选和品种改良提供良好的试验材料。【方法】以玉木耳原生质体产量为考察指标,结合单因素试验和响应面优化法,建立原生质体制备回归方程,探究玉木耳原生质体的最佳制备条件。【结果】单因素试验结果表明,玉木耳原生质体制备的适宜条件为:酶解时间3 h、酶解液浓度2.0%、酶解温度35℃。响应面试验结果表明,各因素对原生质体制备影响程度的排序为:酶解温度>酶解时间>酶解液浓度,酶解温度与酶解时间的交互作用对原生质体产量有极显著影响(P<0.01),酶解时间与酶解液浓度的交互作用影响显著(P<0.05)。响应面试验优化后,获得玉木耳原生质体的制备条件为:酶解液浓度2.0%、酶解时间3.4 h、酶解温度35℃,此条件下玉木耳原生质体的平均产量为17.5×10^6CFU/mL,与理论产量(17.77×10^6CFU/mL)偏差小。【结论】利用响应面法可确立玉木耳原生质体制备的最佳条件,获得较理想的原生质体产量。

杏鲍菇原生质体制备条件的研究

通过对酶系、酶解浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH值、稳压剂浓度和杏鲍菇出发菌龄的探索,得出杏鲍菇原生质体制备的条件。其制备条件为:培养5d的菌丝,在0.6mol/L甘露醇配制的2%溶壁酶里,pH5.5,30℃,50r/min,酶解2.5h,可以获得较高的原生质体产量,产量为6.10×106个/mL。

地衣芽孢杆菌B-1和鞘氨醇单胞菌SC-1原生质体制备与再生条件的研究

以地衣芽孢杆菌B-1和鞘氨醇单胞菌SC-1为出发菌株,研究了其原生质体制备和再生的影响因素,为利用原生质体融合技术选育β-氯氰菊酯高效降解菌奠定了基础。结果表明,菌株B-1原生质体制备的适宜条件为:菌龄13 h,溶菌酶浓度0.1 mg/m L,溶菌酶作用时间15 min,原生质体形成率为93.11%,再生率为7.22%;菌株SC-1原生质体制备的适宜条件为:菌龄12 h,EDTA浓度5 mmol/L,溶菌酶浓度3.33 mg/m L,溶菌酶作用时间15 min,原生质体形成率为95.37%,再生率为27.04%。

花生芽白藜芦醇含量分析与原生质体制备条件的优化

以花生芽下胚轴为实验材料,筛选出适合花生芽原生质体制备的最优条件.25℃避光酶解3 cm的花生芽下胚轴,研究酶的种类、浓度及组合;酶解时间、酶作用的pH值、洗涤液甘露醇浓度及酶解液的离心速度,对花生芽下胚轴原生质体制备的影响.结果最佳适宜条件为:1%纤维素酶与0.5%果胶酶1∶1混合,原生质体产量最多,达6.4×10~4,活力高达91%;酶解时间60 min细胞数量最多,60-80 min之内酶解,细胞都有很高活力;酶解pH在5.5-6最好;洗涤液添加甘露醇0.6 mol/L,细胞原生质体数量与活力最好;离心速度控制在700-900 r/min之间可获得数量足活力高的原生质体.获得了花生芽下胚轴原生质体分离的单因素最佳条件,为进一步多因素正交实验及原生质体培养提供了有效的数据和技术支撑.