绒毛细胞直接制备染色体方法用于产前诊断的研究

我院遗传室自1984年开始对妊娠6～8周人工流产前,采集孕妇绒毛进行直接制备染色体标本的实验性研究,由于技术和设备条件原因制备后的标本分裂相少,染色体形态不好,不能做诊断性分析,经反复实验不断改进制备方法,已摸索出了一种分裂相多,形态好的绒毛直接制备染色体方法。 本实验室在制备方法成功和稳定后,共做绒毛标本98例,其中93例取材于人工流产前,4例为不全流产,死胎流产术前取材。

早孕绒毛简速制备染色体的技术研究

经对37例早孕绒毛进行简速法与直接法的配对研究,结果显示:简速法制备染色体在分裂相数、可计数数、可供分析数均优于直接法,且染色体扭曲少,形态变直,G显带清晰度及分散程度等质量均有提高。

革胡子鲶全血培养制备染色体条件探索

[目的]探究革胡子鲶全血培养及染色体制备的条件方法。[方法]革胡子鲶消毒后用含有肝素的一次性注射器采血,采用RP-MI1640全培养基进行体外全血细胞培养。通过对革胡子鲶血液的细胞培养温度、秋水仙素浓度及加入时间、低渗时间及温度等各种条件的筛选,建立起较成熟的革胡子鲶全血细胞的培养和染色体制备的试验方法。[结果]5 ml培养基中加入0.2 ml全血,26℃下培养72h,在结束培养前6 h加入终浓度0.1μg/ml秋水仙素,低渗35 min,可获得较好的染色体分裂相。[结论]结果为进一步研究染色体的结构、遗传变异、基因定位、荧光原位杂交等奠定了基础。

羊水细胞培养与染色体制备的方法探讨

目的:探讨产前诊断中羊水细胞的培养与染色体的制备方法。方法:选取2021年1—12月桂林市妇幼保健院产科门诊进行产前诊断的孕妇羊水标本928例,进行羊水细胞培养及染色体制备。结果:928例标本全部培养并且染色体制备成功,羊水培养成功率为100.00%。共发现异常核型(不包括染色体多态性改变)38例(4.09%),其中常染色体数目异常15例(1.62%),性染色体数目异常8例(0.86%)、染色体结构异常8例(0.86%)、嵌合体7例(0.75%)。结论:羊水细胞的培养与染色体制备与实验人员操作经验和实验条件密切相关,应制定适合的操作规则,以提高产前诊断结果的准确性和工作效率.

响应面法遴选外周血淋巴细胞染色体G显带制备条件与效果

目的寻找人外周血淋巴细胞染色体G显带的最佳制备条件。方法通过文献检索和实验室既往经验找出5个影响染色体G显带的关键因素,即秋水仙素浓度、低渗时间、滴片湿度、烤片时间及胰酶浓度,采用响应面法遴选5个关键因素的最优配伍条件。以各组测量条件下获得的相同标本的制备成功率、独立核型染色体的分散面积、染色体条带分辨率及交叉个数对比分析方法评价染色体G显带效果。结果以响应面法设计的41组试验条件培养成功率均为100%。综合分析独立核型染色体的分散面积、染色体条带分辨率及交叉个数3个指标,最优制备条件为秋水仙终浓度0.15μg/mL、低渗时间40min、滴片湿度55%、80℃烤片3h及胰酶浓度0.05%。该条件下获得的染色体分散面积为289236±78448(像素);染色体>550带占比为15%,400~550带占比为75%,320~400带占比为10%;交叉个数0占比为61%,交叉个数1~3占比为36%,交叉个数>3占比为3%。结论采用响应面法遴选人外周血淋巴细胞染色体G显带制备方法测量条件可保证染色体G显带制备成功率100%,染色体分散面积为289236±78448(像素),获得550条带以上染色体占比达15%、400条带以上染色体占比达90%,1~3以下交叉个数占比达97%。满足人外周血淋巴细胞染色体G显带制备的临床需求。

全自动滴片在羊水细胞染色体制备中的应用价值

目的 比较羊水细胞染色体全自动滴片与人工滴片的效果差异,探讨全自动滴片在染色体制备中的临床应用价值。方法 常规全自动收获羊水细胞,在相同环境条件下采用全自动染色体滴片仪和人工法分别对羊水细胞进行滴片,分析对比两种滴片方法获得的分裂相数量、染色体分散面积比、有效核型率及染色体条带水平。结果 共纳入47份羊水标本,滴片376张,有效分析分裂相1 066个,其中全自动滴片获得650个,人工滴片获得416个。全自动滴片获得的分裂相数量多于人工滴片,核型质量更高,差异有统计学意义(P <0.000 1);两种方法获得染色体分散程度相当,差异无统计学意义(P> 0.05);人工滴片用时更少,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 全自动染色体滴片仪制备染色体的质量及稳定性优于传统人工法,值得临床推广采用。

思茅松毛虫染色体制备方法

染色体是生物体遗传物质的主要载体,是思茅松毛虫从分子水平开发新型防治措施的重要前提。以卵、5龄幼虫性腺、初羽化成虫性腺、老熟幼虫脑神经节为研究材料,采用传统压片法和空气干燥法两种鳞翅目常见方法,对处理溶液进行时间梯度设置,对思茅松毛虫染色体制备方法、染色体数目和形态进行了研究。研究表明:空气干燥法优于传统压片法;在空气干燥法下,以5龄幼虫精巢制备的染色体效果最好;秋水仙素以作用时间为5 h为宜;低渗溶液选用0.075 mol/L KCI溶液低渗20 min时观察到的中期分裂相最多;思茅松毛虫染色体数目为2n=58,呈颗粒状,为弥散性着丝粒。本研究结果为其他松毛虫属染色体研究提供借鉴和研究思路,为其分子防治提供理论基础。

适合花鲈的几种染色体制备方法的比较

比较了6种适于制备花鲈(Lateolabraxjaponicus)染色体的制片方法。结果表明,细胞系(LJES)培养法和头肾 PHA活体注射 淋巴分离液富集法可制备高质量的染色体标本;外周血短期培养法和头肾 PHA活体注射法得到的结果重复性好,但制片时有红细胞的干扰;小鱼游泳法和组织浸泡法操作简单,适于野外条件下的染色体制备,但得到的染色体图象有背景杂质,分裂指数较低,仅适用于染色体组型的研究。

刺参染色体制备的初步研究

为探索取材容易、结果稳定可靠的刺参染色体制备方法,分别以刺参(Apostichopus japonicus)胚胎和成体为材料对刺参染色体制片方法进行了研究。结果表明,以原肠后期胚胎为材料采用常规的热滴片法,细胞有丝分裂指数最高,获得分裂相效果最好;以成体呼吸树、成体肠组织为材料时,也能获得中期分裂相染色体,但存在着细胞有丝分裂指数低、染色体易丢失等问题;向刺参体内注射植物血球凝集素(PHA),能有效促进刺参的有丝分裂;缩短低渗处理的时间,同时用甲醇进行第一次固定后再用卡诺氏固定液固定可有效避免刺参染色体的丢失;实验得出刺参的染色体数目为2n=46条。为刺参进一步的遗传学研究如基因定位、染色体原位杂交等提供了基础.

棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂)F_1染色体制备方法及核型分析

探索了在鱼类大小规格不同情况下制备鱼类染色体的最佳策略和方法,并对棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂)杂交子代(俗称珍珠龙胆)的染色体核型进行研究。本研究根据预实验的结果,对所选取的珍珠龙胆幼鱼,采用小鱼游泳法进行前处理,取其鳍条并以冷、热两种不同的滴片方法制备染色体,观察染色体形态并对其染色体核型进行分析。结果显示,选用的染色体制备方法能获得图像清晰、形态良好的细胞分裂相;不同的滴片处理方法细胞分裂指数存在一定差异,即热滴片法的有丝分裂指数为2.58%,明显高于冷滴片法的有丝分裂指数(0.83%),此外,热滴片法所获得的染色体的质量也明显优于冷滴片法。珍珠龙胆石斑鱼二倍体染色体数为48,22对染色体为端部着丝粒染色体,2对染色体为亚端部着丝粒染色体,其染色体臂数(NF)为52,核型公式为2n=48,4st+44t。珍珠龙胆与父本鞍带石斑鱼的染色体数目、核型基本一致,而与母本棕点石斑鱼的核型存在很大差异。研究表明,珍珠龙胆的2n数与其亲本相同,其核型特点符合典型的高位类群鱼类核型特征。在对珍珠龙胆与其亲本的核型进行比较的同时,对已报道的25种石斑鱼进行了核型的比较和综合分析,为石斑鱼的种质鉴定、遗传资源保护利用、育种提供基础资料和理论依据。

孕早期绒毛膜细胞原位培养和染色体制备方法的初步研究

目的:摸索建立一种快速简便的孕早期绒毛膜细胞原位培养和染色体制备方法。方法:对55例孕早期绒毛膜细胞酶消化解离后,进行原位培养和原位染色体制备。结果:建立了一种快速简便的孕早期绒毛膜原位培养和染色体制备方法,在55例孕早期绒毛膜细胞中,除3例因污染培养失败外,其余均获得成功,成功率达94.54%。结论:该方法成功率高、操作简便、培养时间短、细胞损耗小、染色体形态质量好,可供分析的染色体核型多,对异常胎儿能及早终止妊娠。

几种鱼类染色体制备方法的比较

[目的]确定在不同情况下制备鱼类染色体的最佳策略和方法。[方法]分别取黄姑鱼幼鱼尾鳍条、波纹唇鱼再生鳍条、暗纹东方鲀前肾组织以不同的处理方法制备染色体,观察染色体形态并统计细胞分裂指数。[结果]所选用的制片方法都能够获得形态好并且图像清晰的细胞分裂相;分裂指数存在一定的差异:前肾组织细胞分裂指数最高,为2.45%,直接选取的鳍条最低,为1.06%;以肾组织为材料冷滴片和热滴片所得到的染色体质量也不同,冷滴片效果优于热滴片。[结论]结果为在不同研究目的下选取鱼类染色体制备策略提供了参考资料。

猪囊尾蚴的细胞培养与染色体制备

本研究采取自然病例的猪囊尾蚴(又称猪囊虫),进行细胞培养,现已传至20代。猪囊尾蚴细胞培养的成功,将对猪囊虫病的免疫防治与低等动物细胞生物学研究,提供了实验材料,并具有一定的理论价值和实践意义。

榕树传粉昆虫榕小蜂染色体制备方法研究

榕树与其传粉昆虫榕小蜂之间具有高度专一的互惠共生关系,榕小蜂为榕树传粉的同时又在榕果内营寄生生活,直至完成其整个生活史,因此一直以来对榕小蜂的染色体研究存在很大困难。本文以对叶榕Ficus hispida传粉榕小蜂Ceratosolen solmsi和鸡嗉子榕F.semicordata传粉榕小蜂C.gravelyi为材料,摸索出一套适合于榕树传粉昆虫榕小蜂染色体研究的详细、有效的技术和方法。应用该法对对叶榕传粉榕小蜂C.solmsi和鸡嗉子榕传粉榕小蜂C.gravelyi的染色体核型进行了研究,结果表明两种榕小蜂的染色体核型特征非常相似,具有相同的染色体数目2n(♀)=10,染色体类型全部为中着丝粒染色体,臂数NF=20。此外,在相对长度方面两者也没有明显的差异。最后与Imai等1988年研究蚂蚁染色体时提出的方法进行了比较。利用本文介绍的方法进行榕小蜂染色体制备,操作过程简单、重复性强,不仅能够得到大量的染色体分裂相,而且染色体细胞界限明确、形态清晰、分散良好。

脐带间充质干细胞染色体核型制备及安全评估

目的探讨脐带间充质干细胞染色体核型制备方法,评估脐带间充质干细胞安全性。方法对培养至第2、5、8、10、11代的共15例脐带间充质干细胞进行染色体制备,检查其有无异常。结果成功制备染色体标本,成功率为100%,正常核型率为100%。结论该脐带间充质干细胞染色体制备方法实验结果稳定、成功率高。脐带间充质干细胞在培养至11代时未见异常染色体核型。

2种制备黄河鲤鱼染色体方法的比较及条件优化

以黄河鲤鱼为材料,采用体外肾细胞培养及空气干燥法制作染色体标本,通过对不同培养时间,不同秋水仙素处理时间获得的染色体分裂指数的比对,以期获得最佳的染色体制备条件.结果表明:在秋水仙素浓度及处理时间一定时,培养时间3d后分裂指数最高,为1.46%,且分裂相在前3d逐渐增多,第4d开始减少;同时发现,在培养时间一定时,秋水仙素处理时间为2h时分裂指数最高,为1.49%.因此认为最佳染色体制备条件为:培养时间3d,秋水仙素处理2h;与传统的体内注射PHA短期培养法制备的染色体标本相比,体外肾细胞培养法制备的标本背景清晰,染色后形态可辨,且染色体分散良好,彼此间没有交联,放大后染色体的测量较易完成,可以进行核型分析.

减数分裂实验材料的优化与染色体制备技术改进

"优化"的实验材料是遗传学实验教学达到预期目标的必备条件之一,蝗虫精子形成中的减数分裂是比较好的观察减数分裂的材料之一。分别从蝗虫品种、捕捉时间、精细管取材位置等方面优化实验材料,同时通过改进染色技术提高染色体制片效果,有利于学生更有效地理解减数分裂的概念以及各个分裂时期染色体特征,牢固掌握遗传学基本定律。