甜菜叶片组织快速制备DNA的方法

通过试验 ,获得用叶片组织制备甜菜DNA的方法。利用液氮或冷冻研磨直接捣碎叶片组织 ,提取DNA ,该方法简单 ,易操作 ,所获DNA纯度较高 ,可直接用于PCR扩增分析 ,实验效果较好。

SELEX技术中制备单链DNA的方法

制备单链DNA(ssDNA)是许多常用实验中的重要内容,是通过指数富集的配体系统(SELEX)进行体外筛选核酸适配体的关键步骤之一。目前已报道多种方式可通过双链DNA(dsDNA)制备ssDNA,包括链霉亲和素包被磁珠分离、不对称PCR、不等大小引物PCR、酶消化、不对称PCR结合酶消化和不对称乳液PCR等,而如何快速高效地制备ssDNA是研究重点。本文综述了常用的几种通过聚合酶链式反应(PCR)制备ssDNA的方法,对其进行综合分析。根据产物的纯度、操作难易、实验成本等方面综合考虑,选择产物高纯度、操作简便且实验成本较低的ssDNA制备方法,为具有不同需求的应用场景提供参考依据。

甲藻单个细胞DNA的制备及在赤潮藻类分子鉴定中的应用

报导一种赤潮甲藻单个细胞ＤＮＡ的制备方法．该法仅需１或数个甲藻细胞，在常规实验条件下，２０～３０ｍｉｎ即可完成整个过程．此方法的建立，可直接对自然种群进行分子分析，避免了实验室培养种与自然种群的差异，同时，使材料的来源并不依赖于甲藻培养技术的完善．最后。

高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法

制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2～5mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒直径4mm或3mm的合金珠和150μL制备缓冲液,盖上硅橡胶盖,在涡旋器或震动研磨器震动2～4min破碎组织。此方法获得的粗制gDNA样品浓度约2～4ngμL?1。用96针复制器或多通道移液器转移约0.5～1.0μL的gDNA溶液到96孔PCR板的反应液中,利用各种类型的PCR标记(简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测。此方法制备的gDNA模板也适合于较大DNA片段(>1kb)的扩增。本方法的关键是控制好在一定溶液量中破碎合适量的叶片,以及不要加入过量的gDNA溶液,以免带入过多的杂质抑制PCR效果。这种从材料种植、制备gDNA、转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的快速、高通量、低成本的方法特别适合大量植物样品的规模化基因型检测。

一种用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法

本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量（4～6mg）植物叶片、适量（200μL）TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入1个2mL离心管，在多功能组织细胞研磨器中振动5min破碎组织后，直接取1μL DNA溶液作为PCR的模板。本方法具有简单快速、操作效率高、成本低、扩增效果好等优点，特别适合于大量样品的基因型检测。

扁桃基因组DNA的制备和AFLP技术体系的建立

AFLP技术对DNA模板的质量要求较高。桃属果树扁桃的叶片含有较高的糖分、多酚类等物质,基因组DNA的纯化比较繁琐。笔者采用3×CTAB缓冲液提取基因组DNA,并加以纯化,使DNA质量达到AFLP技术的要求。在AFLP分析中,筛选出合适的引物组合:采用E+3/M+3选择性引物组合时,扩增条带少;改用E+2/M+3引物组合后,扩增产物主要分布在600～100bp内,且扩增条带数目适中,多态性适宜,电泳图谱清晰。

一种快速的植物DNA制备方法

介绍一种DNA提取方法 ,该方法具有快速、简便、高效的优点 ,可在 6 0min内提取出纯净无RNA的DNA ,获得的DNA纯度高 ,DNA质量可满足酶切及PCR等分子生物学实验要求。

番茄叶片基因组DNA快速制备技术及其在基于实时荧光定量PCR的转基因检测中的应用

以番茄（Solanum lycopersicum L.cv.Micro-Tom）叶片为试材,建立了一种简便快速制备叶片基因组DNA的方法。2~20 mm2的叶片即可满足制备要求,制备过程只需一种提取试剂、只涉及1次移液和1次离心操作,不涉及沉淀。确定了所制备的DNA用于实时荧光定量PCR的合适用量为0.1~0.2μL（反应总体积为12.5μL）,发现过量模板的使用可降低PCR效率且可导致扩增失败。该项DNA快速制备及相适应的实时荧光定量PCR技术已成功应用于番茄转基因植株检测。

从多糖丰富的样品中制备食用真菌DNA

本文报道了一种从多糖丰富的食用真菌样品中快速、简便制备高分子量总DNA的改进方法。通过CTAB在不同的氯化钠浓度下选择沉淀DNA,除去多糖污染,苯酚、氯仿抽提,异丙醇沉淀,就可获得适宜多种分子生物学研究的食用菌基因纽DNA。本方法也适合小规模同时制备多个样品。另外,采用本方法制备的真菌DNA,经限制酶HaeⅢ酶切后在琼脂糖凝胶上能显示出菌株特异性的DNA带谱,可用于食用菌的遗传育种、菌株鉴定等研究。

大熊猫气味标记DNA的制备和序列分析

大熊猫气味标记在其个体间的通讯中具有重要意义。用不同方法收集了７只大熊猫个体的９个气味标记样品，运用ＩｎｓｔａｇｅｎｅＫｉｔ制备出了ＤＮＡ。采用ＰＣＲ扩增线粒体Ｄ－环区和细胞色素ｂ基因、ＴｈｒｔＲＮＡ基因片段并作序列分析。结果提示，不同收集方式所得气味标记样品均有ＤＮＡ，但用干棉花棒收集样品的方法最佳。该方法为大熊猫的遗传多样性研究提供了新的简捷有效的ＤＮＡ来源。

玉米免DNA制备单株SSR和SCAR基因分型方法研究

探讨采用免DNA制备法分析玉米单株SSR与SCAR分子标记的基因型。分别刮取各单株少许叶肉细胞到1×PCR缓冲液中,置于PCR仪上95℃10 min,冷却,添加PCR其它组份,完成SSR与SCAR的PCR扩增与显色成像。免除模板DNA制备过程,对掖478与丹340两个亲本及57个(共58个)F2分离群体单株分别实现SSR标记-phi402893基因型快速鉴定,对掖478与丹340两个亲本及5个F2分离群体单株分别实现SCAR标记-MITE185基因型快速鉴定。

单个细胞DNA样本的制备及其在灵敏度分析中的应用研究

目的建立一种用于高精确灵敏度分析的微量DNA样本制备方法。方法用显微捕获技术制备以细胞为单位的DNA样本,并用于ProfilerPlus试剂盒及ABI310遗传分析仪的灵敏度测试。结果建立了单细胞捕获操作方案,成功制备了依次含1～11个细胞的一组DNA分析样本,并可准确用于ProfilerPlus誖试剂盒及ABI310遗传分析仪的灵敏度研究。

FTA卡在模板DNA制备中的应用研究

目的:本文详细介绍了一种简便、快速、安全的用于DNA制备的方法。方法:查阅了大量国内外关于FTA卡及其应用方面的文章。结果:详细介绍了FTA卡在模板DNA制备以及在基因的储藏、医学检测以及食源性致病菌的检测方面的具体应用。结论:FTA卡可作为一种通用、快速、简便的DNA模板制备方法可用于生物学各方面的研究。

一种单个胚胎的DNA模板制备方法

建立了一种简单处理单个卵子和早期胚胎制备DNA模板的方法———KOH/DTT-Triton X裂解法,并与TE-蛋白酶K法比较了PCR扩增效率。结果表明:采用KOH/DTT-Triton X裂解法处理单个卵子或2-细胞胚、8-细胞胚、桑椹胚、囊胚后,作为DNA模板直接进行PCR扩增线粒体DNA片段,3对引物的PCR扩增总成功率为100%(70/70),而TE-蛋白酶K法处理的单个卵子的PCR扩增总成功率为92.9%(65/70),二者差异显著(P<0.05)。但两种方法所制备模板的PCR假阳性率均为0。实验设计的KOH/DTT-Triton X裂解法是一种有效的单个早期胚胎的DNA模板制备方法,经一次PCR扩增即能获得清晰的目的DNA条带,能够满足早期胚胎遗传物质检测的需要。

一种适用于PCR的水稻基因组DNA的简易制备方法

介绍了一种适合PCR的水稻基因组DNA的简易制备方法。将少量(1~20 mg)水稻叶片置于1.5 mL离心管中,用转速为3 500~4 000 r/min的电钻快速(约10 s)研磨后,加提取液50~100μL,经100℃水浴10~15 min,短暂离心后即可直接取上清液作DNA模板进行PCR分析。该方法具有水浴时间短、可不加液氮研磨、对植株生育期要求不严、成本低、操作简便等优点,每人每天可完成400份以上DNA样品的简易制备,适合幼苗期大规模DNA分子标记辅助选择的PCR检测。

家蚕单粒卵DNA的快速制备方法研究

研究了含量甚微的家蚕单粒卵DNA的抽提方法。将蚕卵催青至转青,以增加蚕卵的DNA含量。在Eppendorf管内用牙签刺破 蚕卵,再用酚、氯仿速提法抽提,能够在1h左右制备出符合RAPD需要的DNA模板,每粒卵能够提取到100ng左右的DNA,制备量接近常规方 法。

用于蔬菜残留耐药基因检测的DNA制备技术

目的建立用于蔬菜残留耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)检测的DNA制备技术。方法以樱桃萝卜、香菜为研究对象,对商业试剂盒Power Water?DNA Isolation kit和Power Plant?Pro DNA Isolation kit中的具体步骤进行改良,不经细菌分离培养等过程,提取其可食用部分残留微生物基因组DNA。利用Nano Drop?微量紫外-可见光分光光度计,检测DNA的纯度和产量,并以DNA为模板,对16S rRNA、ARGs(sulⅠ、tet M、mef)进行PCR扩增,以验证本研究建立的DNA制备方法对于后续ARGs检测抑制物的去除情况。结果本研究所制备的DNA(n=5),OD260/OD280值均在1.7~1.9之间,浓度均为10ng/μL以上。经电泳检测后,目的基因的PCR扩增条带清晰,且经过序列分析比对证实,目的基因与以往文献报道的同源性均达到97%以上。结论本研究建立的DNA制备方法,无需细菌分离培养,简单、省时,所获得的DNA纯净,为后续蔬菜残留ARGs检测等研究提供技术支持。

多表位HBV DNA疫苗的中试制备及质量研究

目的建立多表位HBVDNA疫苗(PVAX-HS)的中试制备及质量控制方法。方法采用分批补料发酵方式,碱裂解结合超滤浓缩,三步柱层析制备DNA疫苗,并对终产品进行全面质量控制。结果分批补料发酵获得生物量50～60g/L,质粒最终产量约为1.0mg/g菌体,符合药用DNA疫苗质量标准。结论建立了质量稳定的PVAX-HS中试制备工艺,符合规模化生产要求。

转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证。普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间。灵敏度测试结果表明,含量低至0.1%的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好。本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定。

一种适用于昆虫微量DNA模板制备的方法

随着分子生物学在昆虫领域中运用 ,昆虫 DNA的提取是有技术运用的前提 ,具有其重要的地位。但是由于一些昆虫体形较小 ,采用传统的酚 :氯仿抽提法不适用于微量 DNA模板的制备 ,而某些生物公司的试剂合相对而言价格较高。本文介绍一种适用于普通昆虫实验室贮藏及运用的微量 DNA模板制备方法。