基于mTOR/Beclin1/LC3信号轴探讨制萎扶胃丸对胃癌前病变大鼠胃窦组织自噬的影响

目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWFW低、中、高剂量组,除正常组常规饲养外,模型组、叶酸组、ZWFW低、中、高剂量组,采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用以及雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型后,分别用生理盐水、叶酸片水溶液(0.002 g/kg)、ZWFW低、中、高剂量水溶液(0.42,0.84,1.67 g/kg)予以治疗4周后剖腹取胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃窦组织病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测大鼠胃窦组织mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;HE染色示:与正常组比较,模型组胃黏膜腺体排列拥挤、紊乱,细胞形态不一,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,ZWFW显著改善了胃黏膜腺体结构排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织m TOR mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),Beclin1和LC3B mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,ZWFW中、高剂量组胃窦组织mTOR mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),ZWFW低剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B蛋白表达升高(P<0.05),中、高剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论:ZWFW可显著改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常组织病理学表现,其机制可能与下调mTOR表达,上调Beclin1、LC3B表达进而促进自噬相关。

基于脑肠肽胃促生长素水平探讨制萎扶胃丸对萎缩性胃炎大鼠作用的实验研究

目的通过制备萎缩性胃炎大鼠模型,观察制萎扶胃丸(ZWFW)对模型大鼠胃促生长素(ghrelin)表达水平的调控,探讨其防治慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的可能作用机理。方法采用随机数字表法将70只Wistar大鼠分为正常对照组(空白组)15只,造模组55只,以2%水杨酸钠乙醇液(醇浓度为30%)与10 mmol/L脱氧胆酸钠交替灌胃,0.05%氨水自由饮用,结合饥饱失常建立CAG大鼠模型。于造模结束从两组随机抽取大鼠各5只,HE染色观察大鼠胃窦组织病理改变,以验证造模。于造模结束后,将造模组大鼠随机分为模型组、ZWFW低、中、高剂量组及摩罗丹组,每组10只。药物干预组分别用配置液以1 mL/100 g灌胃,空白组及模型组用生理盐水以1 mL/100 g灌胃,6组均每日2次,给药4周。药物干预结束后观察各组大鼠的宏观表征及病理组织学变化;记录各组大鼠的进食量与体质量,ELISA法检测各组大鼠血清ghrelin含量变化。结果较之模型组,ZWFW各剂量组及摩罗丹组大鼠进食量、体质量及血清ghrelin含量增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);而ZWFW中、高剂量组大鼠血清ghrelin含量变化与摩罗丹组比较,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与摩罗丹组比较,血清ghrelin变化无统计学意义(P>0.05)。结论ZWFW可增加CAG大鼠进食量及体质量,改善胃黏膜病理状态,可能与ZWFW上调血清ghrelin水平有关,也是ZWFW防治CAG胃黏膜萎缩的作用机理之一。

正交试验法优选制萎扶胃丸溶散时限及水份的最佳工艺条件

采用正交设计方法探讨炼蜜程度，用蜜量和坨时蜜温三因素对丸剂质量指标的相互影响，结果得知制萎扶胃丸溶散度及水份的最佳工艺条件为：中蜜，６０℃和蛇，每１００ｇ药粉用炼蜜１００ｇ。

制萎扶胃丸治疗慢性萎缩性胃炎疗效观察

2004年以来，笔者应用本院院内制剂制萎扶胃丸（浓缩丸）治疗慢性萎缩性胃炎取得较好疗效，现总结报道如下。

RP-HPLC测定制萎扶胃丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量

目的采用反相高效液相色谱法测定制萎扶胃丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量。方法采用十八烷基键合硅胶柱分离隐丹参酮和丹参酮ⅡA,以乙腈-0.2%磷酸(60∶40)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长262 nm。结果隐丹参酮和丹参酮ⅡA分别在0.081 4～0.407 2μg(r=0.9997)、0.163 6～0.818μg(r=0.999 5)范围内呈线性关系,平均回收率分别为99.70%(RSD=1.37%)、99.22%(RSD=0.94%)。结论本法简便、快速,可用于该产品的质量控制。

制萎扶胃丸的质量标准研究

目的:建立制萎扶胃丸的质量标准。方法:采用薄层色谱法对制剂中的山楂、白芍进行鉴别;采用酸碱滴定法测定制剂中有机酸(枸橼酸)的含量。结果:方中山楂、白芍具有较好的薄层色谱鉴别特征;酸碱滴定法能准确测定出制剂中枸橼酸的含量,不得低于1.1%。结论:所建立的方法简单可行,能快速准确地对制萎扶胃丸进行鉴别和含量测定。

制萎扶胃丸防治慢性萎缩性胃炎作用机制

从中西医角度探讨制萎扶胃浓缩丸(简称ZWFW)的处方组成、方解及其防治慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的作用机制,指出CAG的发病机制在于本虚标实,本虚以脾胃气阴两虚为主,ZWFW促进胃黏膜内源性PGE2合成、对抗自由基清除胃黏膜NO、升高CAG模型大鼠血清及胃黏膜SOD水平、降低MDA含量,可能是其增强胃黏膜局部防御功能的部分机理,也是其健脾和胃的具体体现。标实则有气滞、血瘀、湿阻、热毒蕴胃等;CAG模型大鼠GAS含量下降,相当于祖国医学正气虚;MTL含量增加,相当于祖国医学邪气盛;ZWFW使较低的血清GAS恢复至接近正常水平是其"补其不足"作用的具体体现;ZWFW使过高的血浆MTL恢复至接近正常水平是其"泻其有余"作用的具体体现。

制萎扶胃浓缩丸对CAG大鼠血清胃泌素、生长抑素、前列腺素E2和血浆胃动素的影响

目的为了探索制萎扶胃浓缩丸(ZFW)对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠胃肠激素的影响。方法以2%水杨酸钠乙醇液(醇浓度为30%)与10 mmol/L脱氧胆酸钠交替灌胃,0.05%氨水自由饮用,结合主动免疫和饥饱失常建立CAG大鼠模型,放射免疫法测定血清GAS、SS、PGE2和血浆MTL含量。结果 ZFW大剂量能明显升高CAG大鼠GAS含量、降低MTL含量(P<0.01)或P<0.05,ZFW大、中、小剂量均能明显降低SS含量(P<0.01或P<0.05),ZFW大、中剂量能明显升高PGE2含量(P<0.01)。结论 ZFW能改善CAG大鼠胃肠激素异常水平,这可能是其防治CAG的机制之一。

正交试验优选制萎扶胃浓缩丸的水提工艺

目的:优选制萎扶胃浓缩丸最佳水提工艺条件。方法:以干浸膏、枸橼酸含量为评价指标,以煎煮次数、加水量、煎煮时间为考察因素,采用正交试验法对制萎扶胃浓缩丸的水提取工艺进行优选。结果:最佳水提取工艺为:煎煮2次,加水量为8倍量,煎煮时间为2.0、1.5 h。结论:该优选工艺合理可行,适用于工业大生产。

制萎扶胃浓缩丸对小鼠胃肠动力的影响及急性毒性研究

目的:研究制萎扶胃浓缩丸对小鼠胃肠动力的影响及急性毒性。方法:通过测定小鼠胃排空率和肠推进率研究制萎扶胃浓缩丸对小鼠胃肠动力的影响,采用测定LD50评价制萎扶胃浓缩丸急性毒性。结果:制萎扶胃浓缩丸对小鼠胃排空有一定的促进作用(P<0.01),对正常小鼠肠推进未见明显影响,制萎扶胃浓缩丸未见明显急性毒性反应。结论:制萎扶胃浓缩丸对小鼠胃肠动力具有促进作用,口服安全性较高。

制萎扶胃浓缩丸质量标准研究

目的建立制萎扶胃浓缩丸的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对方中乌梅、杭药、丹参、陈皮药材进行定性鉴别。用高效液相色谱法对方中乌梅的有效成分枸橼酸进行含量测定,采用Symmetry C18色谱柱,流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢铵溶液(5∶95),检测波长212 nm。结果定性鉴别色谱特征明显。方法学考察表明,枸橼酸在1.0384～5.1920μg(r=0.9995,n=5)浓度范围内呈良好线性关系,平均回收率为99.21%,RSD=0.86%。结论本方法简便、可靠、专属性强、重复性好,可用于制萎扶胃浓缩丸的质量控制。

制萎扶胃浓缩丸对慢性萎缩性胃炎模型大鼠SOD活性、MDA和NO含量的影响

目的:观察制萎扶胃浓缩丸对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响,探讨其防治慢性萎缩性胃炎的作用机制。方法:采用综合因素(30%乙醇与2%水杨酸钠混合液与10 mmol·L-1去氧胆酸钠交替ig,0.05%氨水日常饮用,结合主动免疫法,并令其饥饱失常)诱发大鼠建立实验性慢性萎缩性胃炎模型,ig制萎扶胃浓缩丸(FW)高、中、低剂量(分别为1.67,0.84,0.42 g·kg-1)75 d后测定血清和胃黏膜SOD活性和MDA,NO含量。结果:制萎扶胃浓缩丸高、低剂量明显增高CAG模型大鼠血清SOD活性(P<0.01),高剂量明显增高CAG模型大鼠胃黏膜SOD活性;各剂量均能降低CAG模型大鼠血清和胃黏膜MDA含量(P<0.01,或P<0.05);高、中剂量能升高CAG模型大鼠胃黏膜NO含量(P<0.05),各剂量对血清NO含量有降低的趋势。结论:制萎扶胃浓缩丸能改变CAG模型大鼠胃黏膜组织和血液的SOD活性和MDA,NO含量,使其趋于正常水平,通过抗氧化、清除自由基作用有效防治慢性萎缩性胃炎。

制萎扶胃浓缩丸对CAG模型大鼠胃分泌功能和胃黏膜组织形态的影响

目的:观察制萎扶胃浓缩丸(FW)对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠胃分泌功能和胃黏膜组织形态的影响,探讨FW防治CAG的作用机制。方法:采用综合因素(30%乙醇与2%水杨酸钠混合液与10 mmol.L-1去氧胆酸钠交替ig,0.05%氨水日常饮用,结合主动免疫法,并令其饥饱失常。)诱发建立大鼠CAG模型,设FW 1.67,0.84.0.42 g·kg-1组,阳性药麻罗丹1.26 g·kg-1组,ig,75 d后比色法测定胃蛋白酶活性,测定胃液分泌量、胃酸pH、胃液总酸度并进行胃黏膜组织形态学观察。结果:FW明显改善CAG模型大鼠一般状态,高剂量促进胃液分泌、提高胃液总酸度(P<0.05);各剂量均能增加胃蛋白酶活性(P<0.01),效应与剂量呈正相关;对CAG模型大鼠胃黏膜病理形态具有较好的改善作用。结论:FW能改善CAG模型大鼠胃分泌功能,改善慢性萎缩性胃炎胃黏膜组织形态。