刺五加鲨烯环氧酶基因的表达及其与刺五加皂苷含量的相关性分析

目的:应用实时定量PCR技术对刺五加鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因进行表达分析,探讨其与刺五加皂苷含量的关系。方法:以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因为内参照基因,通过实时定量PCR检测SE基因的相对表达量,分光光度法测定刺五加皂苷含量。结果:不同产地、器官中的SE表达量存在显著差异(P<0.05),其中,雾灵山产地的表达量最大,达最小值(伊通产地)的4.81倍,各器官中,叶的表达量最大,为根的1.92倍。从叶片萌芽期到衰老期,SE的表达呈先升后降趋势,各发育期之间差异显著(P<0.05),其中盛花期的表达量最高,达萌芽期的3.71倍;茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)可提高SE的表达量,但未达显著水平。刺五加叶的皂苷含量与SE的表达量之间存在显著的正相关关系(P<0.05)。结论:不同产地、器官及生长发育时期刺五加SE的表达量间差异显著,且SE的表达与刺五加的皂苷含量显著相关。

刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的研究刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响。方法以人肝癌细胞株(HepG2)为研究对象,分别用ELISA及RT-PCR检测ASS对HepG2细胞VEGF蛋白及mRNA水平表达的影响。结果ASS250,500μg/mL作用于HepG2细胞株,VEGF蛋白及mRNA表达量下降(P<0.05或P<0.01)。结论一定剂量的ASS能抑制HepG2细胞株的VEGF mRNA表达及蛋白的表达,提示ASS可能是通过抑制VEGF介导的肿瘤血管新生,进而抑制肿瘤的生长与转移。

刺五加皂苷对血管性痴呆大鼠脑组织微血管密度及VEGF表达的影响

目的:探讨刺五加皂苷对血管性痴呆大鼠脑组织微血管密度(MVD)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白及VEGFmRNA表达的影响。方法:选用40只SD雄性健康大鼠,随机分为4组,采用颈内动脉注射微小栓子方法制作多发梗死性痴呆大鼠动物模型,进行Morris水迷宫行为学测试和脑组织形态学筛选评估模型,将造模成功大鼠予以刺五加皂苷干预,免疫组化检测大鼠脑切片CD34阳性MVD和VEGF的表达;实时荧光定量PCR法检测VEGF mRNA的动态变化。结果:免疫组化结果显示模型组和刺五加皂苷组CD34、VEGF表达均较假手术组、对照组增多(P<0.01);刺五加皂苷组与模型组相比较CD34表达增多(P<0.01),VEGF表达增多(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示模型组与刺五加皂苷组的VEGF mRNA表达均有显著差异,且刺五加皂苷组比模型组表达明显增多(P<0.05)。结论:刺五加皂苷可促进毛细血管新生,改善血管性痴呆大鼠的记忆能力,机制可能是刺激VEGF表达。

刺五加皂苷对缺血性脑损伤的保护作用

目的 观察刺五加皂苷 (ASS)对缺血性脑损伤的作用。方法 采用神经元缺血性损伤模型。用流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO的含量 ,用MTT、LDH测定神经细胞活性 ,并在电镜下观察细胞形态学变化。结果 ①缺血性神经元发生凋亡 ,细胞超微结构呈现凋亡样改变 ,其凋亡率与正常对照组比较有显著性差异(P <0 0 1)。ASS能减少缺血性神经元凋亡。②缺血性神经元存活率下降、LDH释放量和NO含量升高 ,与正常对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。ASS能提高神经元存活率、降低LDH释放量及NO含量。结论 一定浓度的ASS对缺血性神经元凋亡有保护作用 。

刺五加皂苷对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、EMT及VEGF、bFGF表达的影响

目的:探讨刺五加皂苷对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、上皮间充质转化(EMT)及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的影响。方法:采用MTT法、流式细胞术、实时定量PCR法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同浓度(0、50、100、200、400μg/m L)刺五加皂苷对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、EMT相关标记分子及VEGF、b FGF表达的影响。结果:刺五加皂苷对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用;与0μg/m L组比较,50、100、200、400μg/m L组早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均显著升高(P<0.05);与0μg/m L组比较,除50μg/m L组外,其余各组钙黏蛋白(E-cadherin)表达均显著升高(P<0.05),而各组神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达均显著降低(P<0.05);50、100、200、400μg/m L组中VEGF与b FGF表达均显著降低(P<0.05)。结论:刺五加皂苷能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并调节EMT标记分子mRNA的表达,并能诱导其凋亡作用,该作用可能与其抑制VEGF和b FGF的表达有关。

刺五加皂苷对Aβ2535诱发PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用

目的研究刺五加皂苷对Aβ25~35处理PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用。方法将神经细胞生长因子(NGF)诱导的PC12细胞用10 mol/L Aβ25~35处理,建立体外老年性痴呆模型。采用线粒体琥珀酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶(LDH)测定法、丙二醛(MDA)含量检测法、流式细胞仪检测法、Western印迹方法检测活化的Caspase-3蛋白水平。结果 Aβ25~35损伤组与对照组比较噻唑蓝(MTT)代谢率下降,LDH释放量增多(P【0.05或P【0.01),MDA含量增高,细胞凋亡率明显增高,活化的Caspase-3蛋白水平明显增高;刺五加皂苷组可不同程度地保护Aβ25~35的细胞毒性及细胞凋亡。结论刺五加皂苷对Aβ25~35处理PC12细胞毒性及细胞凋亡有较好的保护作用。

刺五加皂苷对化学诱导缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子-1α表达的影响及机制

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α在刺五加皂苷(ASS)对神经元缺氧保护中的作用及可能的调控机制。方法建立神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化和氯化钴诱导化学缺氧的神经元缺氧模型。采用Western blot和RT-PCR方法分别检测ASS对缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的基因转录、蛋白表达及ERK1/2磷酸化的影响。结果正常培养的PC12细胞几乎没有HIF-1α mRNA的转录和表达,氯化钴的处理可显著增加HIF-1α mRNA的转录和表达,ASS可进一步增加缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的转录和表达;ASS和NGF的预处理还可以增加磷酸化ERK1/2的表达。以上变化均有统计学意义(均P<0.05)。ASS的上述作用与NGF作用的差异无统计学意义(P>0.05)。结论ASS对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用可能与促进HIF-1α mRNA的转录和通过激活ERK1/2途径进而抑制HIF-1α降解从而增加其含量有关。

刺五加皂苷对血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的:检测刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:以人肝癌细胞株(HepG2)为研究对象,采用RT-PCR法测定刺五加皂苷(ASS)对VEGFmRNA表达的影响。结果:刺五加皂苷(ASS)250、500μg/mL作用于HepG2细胞株,VEGFmRNA表达量下降(P<0.01)。结论:一定剂量刺五加皂苷(ASS)抑制HepG2细胞株的VEGFmRNA表达量,提示刺五加皂苷(ASS)可以抑制VEGF介导的肿瘤血管新生途径,进而抑制肿瘤的生长与转移。

刺五加皂苷对糖基化终产物损伤内皮细胞的保护作用

目的:研究刺五加叶皂苷(ASS)对糖基化终产物(AGE)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法:体外培养HUVECs,糖孵育法制备糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(AGE-BSA)。将细胞分为6组,即正常对照组、实验对照组(BSA组)、损伤组(AGE组)、损伤加入ASS低、中、高浓度组。将200mg·L-1AGE作用于不同浓度(10、50和100mg·L-1)ASS培养4h的HUVECs,继续培养24h,测定各组细胞增殖活力及培养液中血管性假血友病因子(vWF)、一氧化氮(NO)及乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与BSA组比较,AGE组HUVECs增殖活力明显降低(P<0.01),AGE组HUVECs培养液vWF和LDH含量明显增加(P<0.01),NO水平明显降低(P<0.01)。与AGE组比较,10、50和100mg·L-1ASS组HUVEC增殖活力明显增高(P<0.05),vWF水平显著减少(P<0.05),LDH含量明显减少(P<0.05),NO生成量明显增多(P<0.05)。结论:ASS可抑制AGE对内皮细胞的损伤作用,且可抑制AGE减少NO生成的作用,ASS保护内皮细胞免受AGE损伤的机制可能与增加内皮细胞NO生成量有关。

刺五加皂苷对癫痫大鼠水迷宫成绩和海马PS幅度的影响

目的观察刺五加皂苷对青霉素诱导的癫痫大鼠学习记忆的影响。方法青霉素诱导大鼠癫痫模型后,腹腔注射刺五加皂苷,通过水迷宫实验和在体细胞外记录海马CA3区群峰电位长时程增强(LTP)的变化,观测刺五加皂苷对癫痫大鼠学习记忆的影响。结果①癫痫发作延长大鼠水迷宫游泳时间;②癫痫发作降低大鼠海马CA3区PS幅度;③刺五加皂苷能缩短癫痫大鼠水迷宫游泳时间;④刺五加皂苷能升高癫痫大鼠海马CA3区PS幅度。结论刺五加皂苷可能对青霉素致痫大鼠学习记忆的损伤有显著改善作用。

刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制研究

目的:探讨刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制。方法:CCK-8检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响;Transwell实验检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响;试剂盒检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDAMB-231细胞乳酸分泌的影响;PCR检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞HK、PFK和Glut4基因表达的影响;Western Blot法检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞HK、PFK和Glut4蛋白表达的影响。结果:刺五加皂苷B/E 25、50、100、200μmol·L^-1剂量不抑制MDA-MB-231细胞增殖;刺五加皂苷B/E 100、200μmol·L^-1能够抑制MDA-MB-231细胞迁移;刺五加皂苷B/E 50、100、200μmol·L^-1能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭和乳酸分泌,也能够降低MDA-MB-231细胞有氧糖酵解中相关蛋白HK、PFK、Glut4的表达。结论:刺五加皂苷B/E能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭,其机制可能与抑制肿瘤细胞糖酵解有关。

刺五加皂苷对衰老大鼠学习记忆功能和海马CA1区长时程增强的影响

目的:观察刺五加皂苷对D-半乳糖所致衰老大鼠学习记忆功能和海马CA1区LTP的影响,探讨其可能的机制。方法:将27只大鼠随机分为对照组、D-半乳糖组和ASS组。D-半乳糖注射建立衰老大鼠模型,ASS组腹腔注射ASS干预。水迷宫检测大鼠的学习记忆能力。电生理实验比较强直刺激前后海马CA1区PS幅度变化。结果:在水迷宫实验中,ASS能明显改善衰老大鼠的学习记忆功能。电生理实验中,模型组强直刺激后平均PS增幅明显低于对照组,ASS组中衰老大鼠的PS增幅提高。结论:ASS能提高衰老大鼠的学习记忆能力,并改善D-半乳糖对大鼠海马CA1区LTP的抑制。

刺五加皂苷脂质体的制备及对肝癌移植瘤的抑制作用

目的:制备刺五加皂苷脂质体并研究其对肝癌移植瘤的抑制作用。方法:采用薄膜分散-超声法制备刺五加皂苷脂质体并检测其理化性质,用流式细胞仪检测此载药脂质体对HepG2肝癌细胞周期和凋亡的影响,并观察刺五加皂苷脂质体荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果:所制备的脂质体封率为63.43%,刺五加皂苷脂质体组与游离刺五加皂苷组均使肝癌细胞G0/G1期和S期比例明显下降,并观察到细胞凋亡,高剂量刺五加皂苷脂质体组荷瘤小鼠的抑瘤率(62.21%)显著高于低剂量组(45.23%)和游离刺五加皂苷组(46.16%,P均<0.05),而低剂量刺五加皂苷脂质体组与游离刺五加皂苷组无明显差异(P>0.05)。结论:刺五加皂苷脂质体能抑制肝癌细胞Hep G2增殖和诱导细胞凋亡,对小鼠肝癌移植瘤的生长有明显抑制作用。

刺五加皂苷对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺氧预保护效应的实验研究

目的:观察刺五加皂苷(ASS)对体外培养的缺血运动神经元生长有无保护作用;并初步探讨其保护作用机制。方法:对胚鼠运动神经元进行原代分离培养,建立缺血缺氧诱导的神经元细胞凋亡模型,用MTT法测定神经元细胞活性;检测LDH释放量来观察ASS对神经元细胞膜稳定性的影响。结果:刺五加皂苷能提高缺血缺氧神经元的细胞活性,降低缺血缺氧神经元LDH的释放量,稳定细胞膜,对缺血缺氧神经元有保护作用。结论:ASS对体外培养缺血缺氧损伤的运动神经元有明显的保护作用,可能与增强细胞膜的稳定性有关。

刺五加皂苷对外周刺激诱发的海马长时程增强效应的影响

目的:探讨刺五加皂苷(ASS)对大鼠海马CA1区长时程增强效应(LTP)的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机分为对照组与ASS组,每组10只,两组单刺激(10～20 V,0.5 ms,1次/min,30 min)坐骨神经诱发海马CA1区场电位。强直刺激(35 V,0.5 ms,100 Hz,持续1 s,间隔10 s,4次)坐骨神经,诱发海马CA1区场电位LTP。ASS组在强直刺激前,于侧脑室内微量注入ASS 1.0μg/5μL,强直刺激后观察其对LTP的影响。结果:电刺激坐骨神经可在海马CA1区诱发出潜伏期(172.33±1.65)ms和可重复出现的以负波为主的场电位,平均幅度(32.24±0.72)μV。对照组强直刺激后可出现持续时间2 h以上的LTP现象。ASS增强了强直刺激后海马CA1区LTP的诱导。结论:刺五加皂苷对大鼠海马CA1区LTP有明显促进作用,表明其可提高大脑学习、记忆能力。

刺五加皂苷对高脂高糖饮食大鼠学习记忆能力的影响

目的:研究刺五加皂苷对高脂高糖饮食大鼠学习记忆能力的影响和机制。方法:将24只大鼠随机分为对照组、高脂高糖饮食组和刺五加皂苷干预组,每组各8只。通过高脂高糖饮食建立大鼠模型,刺五加皂苷腹腔注射进行干预,Y迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,电生理实验检测海马CA1区长时程增强,Westernblot方法检测海马GSK-3β和磷酸化GSK-3β的表达。结果:刺五加皂苷组大鼠Y迷宫学习和记忆成绩明显高于高脂高糖饮食组,刺五加皂苷能增强高脂高糖饮食大鼠海马CA1区长时程(long-term potentiation,LTP),并且抑制海马脑组织中GSK-3β磷酸化。结论:刺五加皂苷能改善高脂高糖饮食大鼠学习记忆能力和降低突触的可塑性,其机制与抑制海马GSK-3β磷酸化有关。

刺五加皂苷对急性脊髓损伤后脊髓内BDNF和NGF表达的影响

目的研究刺五加皂苷对脊髓损伤后组织内脑源性神经营养因子(BDNF)和脊髓内神经生长因子(NGF)两种蛋白表达的影响,探讨刺五加皂苷对损伤脊髓的保护作用。方法将45只雄性大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和刺五加皂苷干预组,每组15只。将实验动物用10%水合氯醛麻醉后,用改良Allen’s法进行急性脊髓损伤模型造模。造模后,假手术组予正常饲养,模型组予连续7d生理盐水腹腔注射,刺五加皂苷干预组进行连续7d100mg/kg刺五加皂苷持续腹腔注射。ELISA法检测血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,通过病理切片分析大鼠脊髓组织病理变化,蛋白质印迹法检测大鼠脊髓内BDNF和NGF表达。结果与假手术组比较,模型组和刺五加皂苷干预组脊髓有明显损伤,且大鼠血清中MDA含量增加(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),大鼠脊髓组织中的BDNF和NGF蛋白表达量上升(P<0.05)。与模型组相比,刺五加皂苷组大鼠脊髓损伤明显改善,血清中MDA含量降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),大鼠脊髓组织中的BDNF和NGF蛋白表达量上升(P<0.05)。结论刺五加皂苷促进脊髓组织中神经元细胞内BDNF和NGF表达,利于损伤神经元的修复,对大鼠急性损伤的脊髓具有保护作用。

刺五加皂苷对淀粉样前体蛋白APP酶解通路的影响

目的研究刺五加皂苷对APP(Amyloid Precursor Protein,APP)酶解通路的影响。方法 (2015.9-2016.5)用12.5mg/L、25mg/L、50mg/L刺五加皂苷处理胚鼠皮层神经元细胞,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测γ-分泌酶活性;另用脂质体2000转染构建APP695高表达CHO细胞系,用G418(500mg/L)进行筛选获得APP695-CHO稳转染细胞,用12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L刺五加皂苷处理稳转染细胞,48h后,ELISA法检测细胞培养上清中Aβ1-40含量,用Western-blot法检测细胞裂解液中APP-N端片段蛋白的表达。结果在胚鼠皮层神经元细胞与对照组相比,25 mg/L、50 mg/L的刺五加皂苷能够抑制内源性γ-内切酶的活性,而且随着浓度的升高,抑制作用增强;在APP695-CHO稳转染细胞中,Aβ1-40的分泌量增高,APP-N端片段的蛋白表达水平减少,不同剂量刺五加皂苷能缓解这些变化。结论刺五加皂苷能抑制内源性γ-内切酶减少Aβ1-40的生成,对APP酶解起到一定的影响,对阿尔茨海默病的发病及进展有一定的保护作用。

银杏内酯、刺五加皂苷和人参皂苷诱导PC12细胞缺氧诱导因子-1α表达

目的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在介导心肌和脑低氧/缺血的适应性反应中起重要作用,本文研究银杏内酯、刺五加皂苷和人参皂苷的药理作用机制是否与HIF-1α表达及其相关信号通路有关。方法MTT比色法观察PC12细胞活性,蛋白质免疫印迹法分析PC12细胞HIF-1α及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达,RT-PCR观察HIF-1αmRNA表达。结果一定浓度范围的银杏内酯、刺五加皂苷或人参皂苷均可促进PC12细胞的活性,在浓度分别为37.5,50和60mg·L-1时达最好效果;银杏内酯(37.5mg·L-1)、刺五加皂苷(50mg·L-1)或人参皂苷(60mg·L-1)处理PC12细胞24h均可诱导p-ERK1/2和HIF-1α表达增高,且引起HIF-1αmRNA表达水平的上调,提示HIF-1α蛋白水平的增高与其合成增加有关。结论银杏内酯、刺五加皂苷和人参皂苷均可诱导PC12细胞表达HIF-1α,该作用可能与激活MAPK信号通路有关。

刺五加叶皂苷联合冬凌草甲素对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用

目的研究刺五加皂苷联合冬凌草甲素对体外培养的Eca-109细胞的增殖、细胞生长周期和诱导凋亡的影响。方法以浓度0.75 g/L的刺五加皂苷与不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Eca-109细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,观察细胞生长状态的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率。结果两药联用时可明显的抑制Eca-109细胞的生长,流式细胞仪结果显示,各实验组S期细胞百分率明显升高,G0~G1期细胞百分比明显下降,细胞被阻滞于S期,细胞凋亡率升高。结论刺五加皂苷与冬凌草甲素联合应用对Eca-109细胞的增殖具有明显抑制作用,对其细胞周期的影响及诱导细胞凋亡可能是其重要机制之一。