刺孢小克银汉霉9980生物酶法制备D苯丙氨酸

筛选到一株产氨基酰化酶的真菌刺孢小克银汉霉9980,直接利用其菌体细胞拆分N乙酰DL苯丙氨酸,最终制得D苯丙氨酸。最适反应条件为:0.2mol/LN乙酰DL苯丙氨酸(含Co2+5×10-4mol/L),0.04g/mL菌体,在pH值为7.0、50℃条件下反应24h,拆分率达90%以上。产物经JK008阳离子交换树脂分离。N乙酰D苯丙氨酸经6mol/LHCl加热回流4h脱乙酰得D苯丙氨酸。DPhe[α]20D=+34.4°(水溶)。

刺孢小克银汉霉氨基酰化酶拆分DL-丙氨酸的研究

选育了刺孢小克银汉霉(Cunninghamellaechinulata)9980菌株,并对其进行液体培养,比较了3种不同培养基中菌体细胞氨基酰化酶活性,考察了几种因素对菌体细胞拆分反应的影响,并对DL-丙氨酸进行了光学拆分。结果表明:蛋白胨培养基菌体细胞酶活最高,达680u/g。菌体细胞拆分反应最适温度55℃,最适pH7.0,最佳底物浓度为0.2mol·L-1,缓冲体系中的无机离子对拆分反应有抑制作用,10-3～10-4mol·L-1的Co2+对拆分反应有激活作用。用菌体细胞对DL-丙氨酸拆分反应中,D-丙氨酸得率平均达87.1%。

刺孢小克银汉霉菌株利用马铃薯淀粉废水生产GLA油脂的研究

以马铃薯淀粉废水为发酵基质,用刺孢小克银汉霉(Cunninghamella echinulata)发酵生产含γ-亚麻酸(GLA)的油脂。研究表明,刺孢小克银汉霉菌株能有效利用马铃薯淀粉废水合成GLA,最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为(NH4)2SO4,最佳C/N为1001∶。在最佳条件下发酵培养7 d,废水的COD去除率达到19.21%,生物量达到20.53g/L,菌丝体中粗油量为3.91g/L,产油率为19.03%,GLA产量为680.10 mg/L。初步说明通过微生物发酵可以达到处理废水和生产生物活性物质的双重目的。

刺孢小克银汉霉菌体氨基酰化酶的性质研究

首次选育出有较高氨基酰化酶活性的菌株刺孢小克银汉霉(Cunninghamella echinulata)9980,并进行液体培养,比较了3种不同培养基中菌体细胞氨基酰化酶活性,考察了几种因素对菌体细胞酶活的影响.结果表明:蛋白胨培养基中菌体细胞酶活最高,达680u/g.菌体细胞酶活最适温度55℃,最适pH7.0,最佳底物浓度为0.2mol/L,缓冲液中的无机离子对酶活有抑制作用,10-3～10-4mol/L的Co2+对酶活有激活作用.

影响刺孢小克银汉霉菌菌体形态和γ-亚麻酸含量的因素

在获得1株高产γ-亚麻酸 (gamma linolenic acid,GLA)的刺孢小克银汉霉菌(Cunninghamella echinulata)的基础上,观察了影响其菌体形态和GLA的各个因素的影响,结果表明:起始pH、装液量、离子的类型和浓度、接种体类型等对刺孢小克银汉霉菌的形态影响很大.起始为pH 5,装液量(500 mL三角瓶)为50～100 mL以及适当的离子浓度有利于刺孢小克银汉霉菌体保持分散的形态,并且可以大幅度提高GLA的含量.利用纯孢子液接种始终造成刺孢小克银汉霉菌体形态成为球形,GLA含量较低,处于10%以下,而菌块接种形态成絮状,GLA含量较高,可达13%左右.

刺孢小克银汉霉产γ-亚麻酸代谢规律的研究

采用液体发酵的方法 ,通过研究发酵过程中生物量、油量和GLA合成之间的关系以及MgSO4 、MnSO4 和 (NH4 ) 2 SO4 对三者的影响 ,明确一株刺孢小克银汉霉 (Cunninghamellaechinulata)产γ -亚麻酸的代谢规律和不同因子对代谢规律的影响和因子添加的可能性。结果显示 ,生物量和油量的积累先于GLA到达高峰 ;在生长中期生物量积累处于稳定 ,GLA的合成速率高于油脂产生的速率 ,使得油脂中整体GLA含量开始上升 ;后期由于营养消耗 ,菌体利用自身合成的油脂作为能量供给减饱和酶系 ,GLA含量呈快速增长过程并且持续 ;Mg2 + 、Mn2 + 和NH+4离子对GLA合成有一定的促进 ,但作用机制各不相同 ,可通过在不同的时期的添加使GLA的积累增加。

刺孢小克银汉霉开放式固态发酵产油脂条件研究

以高产油脂菌株刺孢小克银汉霉B5为试验对象,研究了影响B5开放式固态发酵的多个因素并对其发酵过程做动力学曲线分析,刺孢小克银汉霉B5开放式固态发酵产油脂的最佳条件是:以5 g玉米秸秆为基本固体培养基,添加3.50 g的葡萄糖和0.15 g的硝酸铵,再加入0.025 g柠檬酸、0.02 g硫酸锌和8 mL水,接种量为10 mL。在此基础上,自然pH值,25℃,发酵8 d,固态发酵干基质油脂百分含量可以达到13%左右。

刺孢小克银汉霉发酵产γ-亚麻酸时补料工艺研究

研究刺孢小克银汉霉(Cunninghamellaechinulata)发酵生产γ-亚麻酸(GLA)的补料工艺。结果表明,该菌株在含有0.25%黄豆饼粉的发酵培养基中,以分批补料方式,即培养2.5d后补入20g/L食用糖与10g/L麦芽糖混合液,培养第3d时补入1.0g/L(NH4)2SO4,在培养第4d补入2.0g/LMgSO4,在培养第5d补入2.0g/LMnSO4。培养10d,菌体生物量达17.065g/L,油脂产量达6.530g/L,GLA%达23.5157%,GLA含量达1535.58mg/L,与补料前相比,生物量、油脂量、GLA%、GLA含量分别提高79.67%、217.30%、14.85%和264.43%。

刺孢小克银汉霉产油脂的提取方法研究

以刺孢小克银汉霉为载体,在分离有机溶剂的方法、不同溶媒、溶媒配比、酸热时间和次数方面对提取油脂的传统酸热法进行了改进研究,获得了新的酸热法,并将其与索氏提取法进行了含油率和气相色谱后成分的比较分析.新的酸热法,采用抽滤分液和正己烷、乙醇按2∶1混合萃取,两次热冷破壁.与传统的酸热法相比较,更为安全,简便,省去了离心的过程,油脂得率提高了20.71%;与索氏提取法进行比较:新酸热法单位时间处理能力是索氏提取法的96倍,设备要求低.它的油脂得率能达到索氏提取法的95%以上,GLA的含量较索氏提取法高出了17.45%,是一种真正高效、快速的能运用于工业化的提取方法.

酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化

将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用本实验室筛选的有较高氨基酰化酶活性的真菌刺孢小克银汉霉9980(Cunnighamella echinulata 9980)对DL-茶氨酸进行拆分并对拆分条件进行摸索。结果表明:反应最适温度50℃,最适pH7.0,底物浓度0.5mol/L,湿菌体量4g/100ml,拆分时间30h,拆分率可达92%。产物经JK008阳离子交换树脂氨性柱分离,L-茶氨酸收率84.3%,[α]2D5=8.1(c=2,H2O),符合JP2000药典。

真菌-细菌修复石油污染土壤的协同作用机制研究

提出并研究了真菌和细菌协同强化原位修复石油污染土壤.从中原油田石油污染土壤中筛选出刺孢小克银汉霉菌(Cunninghamella echinulata)和阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),在泥浆体系中考察了Cun.echinulata和E.cloacae的生长及其对石油烃的降解过程.结果表明,混合培养体系中细菌和真菌的数量最高分别为其纯培养体系的3倍和20倍,细胞衰亡则被明显推迟;混合培养体系中石油烃的去除率高于真菌和细菌纯培养体系石油烃去除率的总和;采用多次接种新鲜菌种的培养方式能够强化混合培养体系对石油烃的降解.在石油烃污染土壤中接入由Cun.echinulata和E.Cloacae所组成的真菌-细菌微生物制剂实施原位修复,结果表明,Cun.echinulata和E.Cloacae的生长及其对石油烃的降解不受土著微生物的抑制,最适工艺条件为:水和木屑含量分别为25%和6%(质量分数),Cun.echinulata和E.cloacae接种量分别为2.5×104和2.5×107CFU/g.接种上述真菌-细菌40 d后石油烃去除率可达约65%,而土著微生物对石油烃去除率为16.0%.

红豆杉愈伤组织中紫杉烷类成分sinenxan A的微生物转化研究

目的 研究紫杉烷类化合物sinenxanA的微生物转化情况。方法 分别利用两株真菌 (刺囊毛霉AS3 345 0、刺孢小克银汉霉AS 3 340 0 )和一株细菌 (普通变形菌AS 1 12 0 8)对sinenxanA进行生物转化。结果 得到 3个转化产物 ,分别为 10 去乙酰 sinenxanA1,6α 羟基 10 去乙酰sinenxanA2 ,9α 羟基 10 去乙酰sinenxanA3。 结论SinenxanA易被微生物转化 ,10位乙酰基化学性质比较活泼。

土豆废水发酵获取γ-亚麻酸的工艺优化

以土豆废水为原料,以刺孢小克银汉霉为菌种进行发酵以获取γ-亚麻酸。结果表明,土豆废水是一种较好的发酵原料,通过优化得出最佳工艺为:土豆废水用自来水稀释6倍后,加入50g/L葡萄糖及0.5 g/L(NH4)2SO4,发酵6 d,此时GLA产量达到750 mg/L。

γ-亚麻酸生产菌株的诱变选育

采用紫外线和硫酸二乙酯对深黄被孢霉As3,3410和雅致小克银汉霉As3,2717进行诱变,筛选出一株高产γ-亚麻酸的突变株H3,3410-5。突变株H3,3410-5每升发酵液中干菌体得率为24.3 g,油脂含量为10.1 g,而出发菌株仅为21.2 g和8.4 g。气相色谱分析突变株H3,3410-5所产γ-亚麻酸的量占总脂的9.43%,出发菌株仅为8.64%。

GLA高产菌株的筛选及菌丝体脂肪酸组成的气相色谱质谱分析

筛选出1株菌丝体脂肪酸中GLA含量在18%以上的高产菌株,经鉴定为刺孢小克银汉霉(Cunninghamellaechinulata).采用气相色谱质谱对菌丝体脂肪酸组成进行分析,共检测出12种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸含量为81.3%,主要为油酸(OA)、亚油酸(LA)、γ亚麻酸(GLA),还含有少量的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等,初步表明筛选获得了1株高产GLA的发酵生产菌株.

解读《乳木果油等10种新食品原料的公告》

根据《食品安全法》规定,审评机构组织专家对乳木果油等10种新食品原料的安全性评估材料审查并通过。2017年5月31日,国家卫生计生委通过2017年第7号公告发布乳木果油等10种新食品原料,并作解读。此次公告批准的10种新食品原料分别为乳木果油、(3R,3'R)-二羟基-β-胡萝卜素、宝乐果粉、N-乙酰神经氨酸、顺-15-二十四碳烯酸、西兰花种子水提物、米糠脂肪烷醇、γ-亚麻酸油脂(来源于刺孢小克银汉霉)、β-羟基-β-甲基丁酸钙、木姜叶柯,国家卫生计生委解读如下:

国家卫生和计划生育委员会公告 2017年 第7号

根据《食品安全法》规定,审评机构组织专家对乳木果油等10种新食品原料的安全性评估材料审查并通过。特此公告。

麦秸强化微生物降解石油烃及场地试验

在油-盐混合污染耕地的耕作层中施加麦秸以强化水浸洗盐和促进微生物对石油烃的降解.通过实验考察了麦秸添加量对降解石油烃所用的阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)和刺孢小克银汉霉菌(Cunninghamella echinulata)的生长及其对于石油烃降解行为的影响.结果发现,在土壤中添加5%(质量分数)麦秸可使土壤中的细菌和真菌生物量提高至对照样品的25和3倍;19 d时总石油烃降解率从29.2%提高到48.0%,其中饱和烃、芳烃的降解率分别从31.5%和39.1%提高到55.7%和55.9%.在中原油田污染耕地现场试验结果表明,石油烃降解菌添加25 d后,添加麦秸的修复土壤中的细菌和真菌生物量为对照土壤的158和9倍;45 d后试验地块中的总石油烃质量分数降至0.3%以下,石油烃降解率最高达到75%.上述结果显示出添加麦秸与真菌-细菌协同修复方法相结合在治理油-盐混合污染耕地中具有很好的应用前景.

Specific oxidation of honokiol by Cunninghamella echinulata

Among 37 species of microbial strains, Cunninghamella echinulata AS 3.3400 were found to possess the ability to transform honokiol to （R）-magnolignan C （1） and （S）-magnolignan C （2） by regio-specific oxidation. Among them, 1 was a new compound. The structures of two compounds were determined by the analyses of CD, MS and NMR spectroscopic data.