鲨肝刺激物质类似物cDNA片段的克隆及序列分析

目的 :从鲨鱼肝脏中分离纯化肝刺激物质 ,测定N 端氨基酸残基序列 ,根据序列分析结果 ,合成简并引物 ,获得鲨鱼肝刺激物质的cDNA序列 ,并对其进行序列分析 ,比较其与已报道序列的同源性。方法与结果 :通过离子交换和凝胶过滤层析方法 ,从鲨鱼再生肝组织中分离到一种可刺激肝癌细胞株SMMC 772 1增殖活性的多肽 ,命名为鲨鱼肝刺激物质 (sHSS)。进一步通过FPLCMonoQ柱纯化后 ,纯度可达 95 %以上 ,其得率为 4 0mg/kg肝脏 ,SDS PAGE分析表明 :sHSS的分子量约为 1 6 0 0 0Da。对sHSS的氨基酸组分及N 端氨基酸序列进行了分析 ,并根据其N 端氨基酸残基序列设计了一套简并引物 ,利用RT PCR方法从再生肝组织的总RNA中扩增到一大小为 5 0 4bp的cDNA片段 ,序列分析表明其与我们分离到的天然鲨肝刺激物质有一定的差异 ,而与已报道的肝再生增强因子 (ALR)差异较大 ,而与人、鼠以及果蝇中的一种未知功能的蛋白质在氨基酸水平上的同源性较高 ,分别为 84 % ,83%和 5 7% ,这类物质可能在生物机体中发挥重要的生理功能。结论 :通过RT PCR扩增 。

鲨肝刺激物质类似物对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探讨重组鲨肝刺激物质类似物(r-sHSA)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制.方法:利用腹腔注射CCl4制备小鼠急性肝损伤动物模型,以血清转氨酶活性以及组织病理变化为指标判断r-sHSA对化学性肝损伤的保护作用,并通过定量RT-PCR方法测定肝组织中相关细胞因子表达量的变化.结果:8～200μg/kg r-sHSA均可显著降低损伤小鼠血清转氨酶的活性,明显减轻肝细胞肿胀,减少中性粒细胞浸润,具有显著的肝保护作用,其机制可能与r-sHSA诱导TNF-a和肝细胞生长因子(HGF)表达,并下调TGF-β1的表达有关.结论:r-sHSA对CCl4致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与细胞因子的表达调控有关.

鲨肝刺激物质类似物基因在大肠杆菌中的表达与产物活性分析

构建了鲨肝刺激物质类似物基因片段的原核表达载体质粒 (pET-sHSS) ,转化大肠杆菌后通过IPTG诱导获得原核表达产物 ,并利用凝胶层析方法对表达产物进行了分离纯化 ;进一步利用MTT比色法研究了该重组产物对肝癌细胞株SMMC -7721的增殖影响。结果表明 ,在1mmol/L的IPTG的诱导下 ,鲨肝刺激物质类似物基因片段在大肠杆菌BL21菌株中获得表达 ,表达产物的相对分子质量大小约为17500u,占菌体可溶性蛋白总量的38%左右 ;纯化后的产物在低浓度下 (<50ng/L)具有明显刺激SMMC7721细胞株增殖的活性 ,高浓度下 (>100ng/L)则明显抑制该肿瘤细胞株的生长 。

人胎肝细胞生长刺激物质的分离纯化及活性测定

从人胎肝组织纯化肝细胞生长刺激物质（ｈＨＳＳ），经过匀浆、热处理、乙醇沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤，聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳及ＩＳＣＯＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ转移浓缩电泳等步骤，分离出具有ＨＳＳ活性的蛋白质。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示５３ＫＤ与１８ＫＤ两条带。

新生牛和大白鼠肝脏中肝刺激物质的研究

从新生牛和新生大白鼠的肝脏中提取出了肝刺激物质(HSS)。新生牛肝HSS促进豚鼠肝细胞DNA合成作用较强(p/o:5.72),75℃,20min和100℃,1.5min处理后活性无明显改变。新生大白鼠肝HSS原液在0.05mg/ml时呈最佳使用浓度,增加和减少其浓度,生物活性都逐渐下降。活性组份以分子量约为14,000和23,000Dalton为主。对照大白鼠肝制备液无HSS活性,并且分子量约为23,000Dalton的蛋白质组份很少或没有。结果表明:新生动物如牛和大白鼠的肝脏都含有HSS,且活性较强,来源丰富,可作为HSS较理想的来源。

用ELISA定量测定血清中肝细胞刺激物质

用ＥＬＩＳＡ定量测定血清中肝细胞刺激物质张晓颖，李晓军，栾建风，武建国（南京军区南京总医院临床免疫科，２１０００２）肝细胞刺激物质（ＨｅｐａｔｏｃｙｔｅＳｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＳｕｂｓｔａｎｃｅ，ＨＳＳ）由ＬａＢｒｅｃｑｕｅ等于１９７５年自大鼠再生肝组...

鲨肝刺激物质降血糖作用机制的研究

目的 :研究鲨肝刺激物质的降血糖作用机制。方法 :采用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型 ,观察鲨肝刺激物质对糖尿病小鼠空腹血糖、果糖胺、胰岛素、肝糖原、己糖激酶、过氧化脂质等生化指标的影响。采用离体培养原代小鼠肝细胞 ,研究鲨肝刺激物质对四氯化碳、对乙酰氨基酚所致肝细胞损伤的作用。结果 :鲨肝刺激物质显著降低糖尿病小鼠空腹血糖和果糖胺水平 ,增加血清胰岛素、肝糖原含量 ,提高己糖激酶活性 ,减轻四氯化碳、对乙酰氨基酚对原代小鼠肝细胞的损伤。结论 :鲨肝刺激物质降血糖作用机制与保护胰岛和肝细胞功能、提高己糖激酶活性。

新生牛肝脏再生刺激物质的部分纯化及生物学特性

新生牛肝胞浆液中存在刺激肝细胞DNA合成的物质,经过一定的分离提纯,可使其杂蛋白含量降低770倍,特异活性提高26.7倍。在无血清培养条件下,可使成年原代大鼠肝细胞和肝源性肿瘤细胞DNA合成分别增加5倍及7.2倍左右。HSS为耐热的蛋白质,一定的酸碱及变性剂可使活性丧失,主要活性成分的分子量在43—67KD之间,但小于10KD的物质亦具有一定的活性。该实验结果提示:HSS很可能是正常肝细胞分裂与再生时共同的调节因子。

肝细胞刺激物质长期使用与肝脏细胞动力学变化

我们采用从小牛肝中研制的肝细胞刺激物质（ＨＳＳ）对ＣＣＬ４损伤肝硬化大鼠进行长期治疗从细胞到整体水平探讨肝细胞增殖动力学变化情况，了解ＨＳＳ有无致畸、致癌作用。结果表明ＨＳＳ①刺激受损肝细胞ＤＮＡ增生；②增殖的肝细胞循环周期以Ｇ０／１期为主；③细胞倍体变化以４．８倍等整倍体细胞为主，未见异常倍体细胞。我们的实验结果没有发现ＨＳＳ促进受损肝细胞畸变作用。

转人肝刺激物质基因的肝癌细胞增殖状态研究

本文通过研究转染人肝刺激物质 (hepaticstimulatorsubstance ,HSS)的肝癌细胞增殖状态 ,进一步探讨了该基因的生物学功能。将人HSS基因导入BEL 740 2肝癌细胞 ,用Northern和Southern杂交法证实该基因在靶细胞中有稳定表达。并通过测定细胞生长曲线、细胞S期比例和细胞MAPK活性 ,观察到转HSS基因BEL 740 2细胞增殖发生了改变。实验结果提示 ,HSS表达的肝癌细胞DNA合成增加、增殖速度加快 ,可能与MAPK激活有关。HSS基因表达可促进细胞增殖。

抗肝细胞刺激物质自身抗体及特异免疫复合物的测定与意义

抗肝细胞刺激物质自身抗体及特异免疫复合物的测定与意义张晓颖，李晓军，武建国（南京军区南京总医院临床免疫科，南京２１０００２）肝脏受某种形式的损伤后，可出现活跃的肝细胞再生反应。近年来发现一些可能来自肝脏或其他部位的特异性肝细胞再生物质，不仅能刺激损伤...

4种肝细胞再生刺激物质活性比较

<正> 近年来,国内不同种动物的肝再生刺激物质(hepatic regenerative stimulating sub-stance,HSS)的研究及临床应用相当广泛。但其活性程度各报道不一致,对其组成成分及生物学效应也未完全清楚。目前尚无在同一条件下对不同种HSS的生物学活性作出比较。本研究应用无血清培养原代大鼠肝细胞。

肝细胞生长刺激物质的进一步研究

应用传代人肝癌细胞系（OGy—7703），鉴定从人胎肝提取的肝细胞生长刺激物质（HSS）及从乳猪肝脏中提取的低分子多肽对肝源性细胞DNA合成的影响。实验证实我们制备的两种生物制剂确具有促进人肝癌细胞DNA增殖的作用，增殖率明显高于喉癌细胞。并观察到肝细胞生长刺激物质富含于肝细胞中。其它脏器胞质液中无类似物质。不同胎龄及不同贮存时间提取的肝细胞生长刺激物质，其生物活性在本实验中无明显差异。

从山豆根组培根中提取、分离独脚金属杂草发芽刺激物质的研究

试验研究了从山豆根(Menispermum dauricum DC.)组培根中提取、分离独脚金属杂草[Striga hermonthica(Del)Benth]发芽刺激物质,其提纯、分离过程是首先将发芽剌激物质吸附在XAD-4树脂表面后采用甲醇脱洗,通过乙酸乙脂:水分配提取,活性物质在Sephadex LH20开口型人工填充柱上进行柱层析,活性组分合并后进一步采用商业提供的C18 Sep-Pak(10g)柱进行柱层析,之后采用分取和分析高效液相色谱提纯、分离,每一步提纯过程中均采用Striga种子发芽实验鉴定活性物质的存在。高效液相色谱分析表明有3种活性物质,其中主要活性物质与Strigol有十分相似的色谱特性,最后经质谱鉴定为Strigol或Strigol类似物质,并首次报道Strigol是植物的代谢产物。

新生牛小分子肝再生刺激物质的部分生物学特性

从新生牛肝中提取小分子组分，经高效液相色谱分析证明与从乳猪肝中提取的肝细胞生长素相似。说明不同种动物肝细胞中存在基本相同的物质。紫外分光扫描发现有两个主要吸收峰，分别位于２０４ｎｍ和２８８ｎｍ，主要为多肽及蛋白质成分。柱层析分离出６个峰，平均分子量＜５０００，排除该成分中有胰岛素、胰高糖素存在的可能性。在无血清培养条件下，该组分具有明显刺激原代大鼠肝细胞ＤＮＡ合成作用，为对照组的４．８８倍；其活性可被蛋白酶灭活，而不为核酸酶所影响。热处理对其活性有一定的影响。

大白兔胎肾细胞内肾生长刺激物质的提取部分纯化及生物学效应测定

目的:从大白兔胎肾细胞内提取、部分纯化治疗急性肾功能衰竭(ARF)的有效物质。方法:制备胎肾内生长刺激物质,经过盐析、透析、液相色谱分离提取、部分纯化,进行动物实验,3H—Tdr参入测定其CPM值。结果:胎肾细胞移植治疗ARF的有效成分是分子量为28 000的耐热蛋白质。70％以上的硫酸胺能沉淀其活性成分,离子交换色谱Ⅳ、Ⅴ峰为活性峰,凝胶过滤色谱Ⅰ、Ⅱ峰为活性峰。结论:胎肾细胞移植治疗ARF的有效成分是一种分子量为28 000,耐热的具有活性的细胞因子,这种因子可能仅存在胎肾内或只有胎肾内含量最高。

人胎肝刺激物质的纯化与活性测定

目的本研究对人胎肝刺激物质的纯化进行了研究，并对其活性测定方法进行了探讨．方法ｈＨＳＳ经离子交换层析，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＩＳＣＯＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ进行了纯化，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了分子量测定，ｈＨＳＳ的活性由３ＨＴｄＲ掺入法（改进）和ＥＬＩＳＡ法进行了测定．结果ｈＨＳＳ的纯化程度随着纯化步骤的进行而逐渐增加．经过许多步骤后，非变性ＰＡＧＥ的主带显示了较高的活性和纯化程度，并且非变性ＰＡＧＥ的一条主带在ＳＤＳＰＡＧＥ中显示两条带．结论ｈＨＳＳ的分子量约为７０ＫＤ左右，它由１８ＫＤ和５３ＫＤ两种亚基组成．ｈＨＳＳ的活性由３ＨＴｄＲ掺入和ＥＬＩＳＡ两种方法测定，并且两种方法具有较好的一致性．

猪肝刺激物质pHSS对离体肝细胞DNA合成的影响

应用[~3H]TdR掺入离体培养大鼠肝细胞DNA的方法,测定由本室提取的pHSS的生物活性。结果表明,pHSS可显著促进原代培养大鼠肝细胞的DNA合成,其促进率约为对照组的10倍左右。培养液中血清浓度对pHSS的生物活性表达有显著影响,不同浓度血清可以使pHSS表现出不同的量效关系,这些结果在Buffello大鼠肝细胞系的实验中得到进一步证实。在低剂量pHSS的刺激下,不同年龄大鼠肝细胞的[~3H]TdR掺入率无显著差异。但高剂量时,pHSS对幼鼠作用不明显。

兔肾生长刺激物质治疗急性肾功能衰竭

目的 从大白兔胎肾细胞内提取、部分纯化治疗急性肾功能衰竭 (ARF)的有效物质 ,为胎肾细胞移植提供实验依据 .方法 制备胎肾内生长刺激物质 ,经过盐析、透析、液相色谱分离提取、部分纯化 ,进行动物实验 ,3H- Td R参入测定其 Bq.结果 胎肾细胞移植治疗 ARF的有效成分是 Mr2 80 0 0耐热的蛋白质 . 70 0 g· L- 1 以上的硫酸胺能沉淀其活性成分 ,离子交换色谱 , 峰为活性峰 ,凝胶过滤色谱 , 峰为活性峰 .结论 胎肾细胞移植治疗 ARF的有效成分是 Mr2 80 0 0耐热的具有活性的细胞因子 。

牛肝细胞刺激物质的成分及对小鼠急性肝衰竭的保护作用

应用液相色谱及等离子体发射光谱法分析新生牛肝匀浆提取液中的游离氨基酸及微量元素成分;观察该提取液腹腔注射后对CCl_4中毒小鼠急性肝衰竭的保护作用。结果表明提取液中含有13种以上的游离氨基酸,其中6种为必需氨基酸,牛磺酸含量为正常成人血浆的8倍,支/芳氨基酸比值为3.2。微量元素以Mn、Zn、Mg、Se及Fe的含量较高。该提取液能明显提高实验动物的成活率(60％,对照组为10％,P<O.01)。