人端粒酶逆转录酶与c-myc和刺激蛋白1在成釉细胞瘤中的表达

目的 研究原癌基因转录因子c_myc和刺激蛋白 1(SP1)在人成釉细胞瘤 (AB)中的表达及与端粒酶逆转录酶 (hTERT)的关系。方法 选取 5 4例AB(原发 31例 ,复发 19例 ,恶变 4例 )存档蜡块 ,采用原位杂交检测AB中c_mycmRNA、hTERTmRNA的表达 ,采用免疫组化SP法 ,检测AB中SP1蛋白的表达。结果 c_mycmRNA在AB中阳性率为 81 5 % (44 5 4 ) ,hTERTmRNA为 94 4 % (5 1 5 4 ) ,SP1为 83 3% (45 5 4 ) ;伴随AB的复发与恶变 ,3者表达强度上升 ;相关性分析得出hTERT与c_myc之间存在相关性 (rs =0 85 3,P <0 0 0 1) ,hTERT与SP1之间存在相关性 (rs=0 90 0 ,P <0 0 0 1)。结论 hTERT在AB中明显增加的活性可能与转录因子c_myc和SP1有关 ,3者在AB中的表达趋势与AB的临床生物学特性相关。

P53凋亡刺激蛋白1在完全性葡萄胎中的表达及意义

目的探讨P53凋亡刺激蛋白1(ASPP1)在正常绒毛组织及葡萄胎中的表达,分析其与葡萄胎恶变的相关性。方法选择50例完全性葡萄胎组织作为研究组,正常早孕绒毛组50例作为对照组,采用免疫组化Envision二步法检测ASPP1蛋白的表达,回顾性分析病例组临床病理资料,判断ASPP1与葡萄胎恶变及高危因素的相关性。结果ASPP1主要表达于细胞滋养细胞及中间型滋养细胞的细胞质及细胞膜。完全性葡萄胎组中ASPP1强表达率明显低于正常早孕绒毛组(χ2=11.63,P<0.05),恶变葡萄胎ASPP1强表达率与非恶变葡萄胎比较,差异具有统计学意义(χ2=5.25,P<0.05)。ASPP1蛋白表达与子宫体积大小、血HCG值均呈负相关(r分别=-0.36、-0.31,P均<0.05),而ASPP1蛋白表达与葡萄胎患者的年龄及有无合并卵巢黄素化囊肿无明显相关性(r分别=-0.10、-0.05,P均>0.05)。轻度增生葡萄胎ASPP1强表达率均分别明显高于中度增生和重度增生(χ2分别=4.82、6.44,P均<0.05),中度增生与重度增生之间ASPP1强表达率比较,差异无统计学意义(χ2=0.04,P>0.05)。结论 ASPP1可能通过诱导凋亡在葡萄胎的发病机制及葡萄胎恶变中发挥作用,有可能作为判断预后的参考指标之一。

异钩藤碱对急性脑梗死大鼠认知障碍的影响及机制研究

目的探讨异钩藤碱对急性脑梗死大鼠认知障碍的影响及相应机制。方法将144只SD大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组、急性脑梗死组、异钩藤碱低剂量组、异钩藤碱高剂量组、尼莫地平组、异钩藤碱高剂量+干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂(ADU-S100)组,每组24只。除假手术组外,其他各组大鼠均采用线栓闭塞大脑中动脉法构建急性脑梗死大鼠模型,假手术组仅游离右侧颈外动脉、颈总动脉和颈内动脉,不做插入线栓处理。建模成功后立即给药,异钩藤碱低剂量组和异钩藤碱高剂量组大鼠分别灌胃5 mg/kg、20 mg/kg异钩藤碱,且均需腹腔注射等量的等渗盐水;尼莫地平组大鼠需灌胃30 mg/kg尼莫地平,且还需腹腔注射等量的等渗盐水;异钩藤碱高剂量+ADU-S100组大鼠需灌胃20 mg/kg异钩藤碱且腹腔注射20 mg/kg ADU-S100;假手术组、急性脑梗死组大鼠均需灌胃10 ml/kg与腹腔注射10 ml/kg的等渗盐水。给药1次/d,持续2周。末次给药处理24 h后,采用Zela-Longa法对所有大鼠进行神经功能评分,并进行Morris水迷宫实验,记录大鼠的逃避潜伏期及原平台象限停留次数。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;检测各组大鼠脑组织含水量;采用2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定各组大鼠脑梗死体积;采用伊文思蓝检测各组大鼠血-脑屏障通透性;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠脑组织中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)信使核糖核酸(mRNA)表达;采用免疫印迹检测大鼠脑组织中STING、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)蛋白表达,并进行组间比较。结果(1)与假手术组相比,急性脑梗死组末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.96±0.32)分比0分]、脑组织含水量[(86.9±3.2)%比(71.8±3.1)%]、血清TNF-α[(86.7±3.5)ng/L比(35.6±1.7)ng/L]、IL-6[(167.8±6.1)ng/L比(50.2±2.2)ng/L]、脑梗死体积[(28.6±1.3)mm 3比0 mm 3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.57±0.13)g/L比(0.96±0.08)g/L]及STING[(1.83±0.16)比(0.86±0.08)]、p-TBK1[(0.89±0.07)比(0.41±0.03)]、p-IRF3[(0.67±0.05)比(0.13±0.01)]蛋白表达均升高,脑组织中ZO-1 mRNA[(0.45±0.04)比(1.00±0.00)]、occludin mRNA[(0.23±0.02)比(1.00±0.00)]表达均降低,逃避潜伏期延长[(33.6±1.6)s比(12.3±0.5)s],原平台象限停留次数减少[(5.9±0.2)次比(15.7±0.4)次],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)与急性脑梗死组比较,异钩藤碱低剂量组、异钩藤碱高剂量组、尼莫地平组大鼠末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.37±0.21)、(1.14±0.17)、(1.18±0.13)分比(2.96±0.32)分]、脑组织含水量[(81.8±3.0)%、(74.9±3.0)%、(74.3±2.9)%比(86.9±3.2)%]、血清TNF-α[(71.1±1.4)、(43.4±2.0)、(41.5±1.9)ng/L比(86.7±3.5)ng/L]、IL-6[(129.8±5.4)、(81.2±3.8)、(80.0±3.6)ng/L比(167.8±6.1)ng/L]、脑梗死体积[(21.7±1.0)、(10.5±0.5)、(10.7±0.5)mm 3比(28.6±1.3)mm 3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.39±0.12)、(1.16±0.10)、(1.18±0.19)g/L比(1.57±0.13)g/L]及STING[(1.50±0.14)、(1.02±0.11)、(1.01±0.09)比(1.83±0.16)]、p-TBK1[(0.75±0.05)、(0.54±0.04)、(0.52±0.05)比(0.89±0.07)]、p-IRF3[(0.51±0.05)、(0.25±0.02)、(0.27±0.02)比(0.67±0.05)]蛋白表达均降低,脑组织中ZO-1 mRNA[(0.58±0.05)、(0.87±0.07)、(0.89±0.09)比(0.45±0.04)]、occludin mRNA[(0.36±0.03)、(0.71±0.06)、(0.69±0.05)比(0.23±0.02)]表达均升高,逃避潜伏期缩短[(28.6±1.0)、(16.5±0.7)、(16.4±0.7)s比(33.6±1.6)s],原平台象限停留次数增加[(8.2±0.3)、(12.8±0.5)、(12.9±0.5)次比(5.9±0.2)次],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(3)与异钩藤碱高剂量组比较,异钩藤碱高剂量+ADU-S100组末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.12±0.14)分比(1.14±0.17)分]、脑组织含水量[(78.7±3.2)%比(74.9±3.0)%]、血清TNF-α[(59.7±2.1)ng/L比(43.4±2.0)ng/L]、IL-6[(118.9±4.6)ng/L比(81.2±3.8)ng/L]、脑梗死体积[(16.6±0.4)mm 3比(10.5±0.5)mm 3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.36±0.10)g/L比(1.16±0.10)g/L]及STING[(1.37±0.12)比(1.02±0.11)]、p-TBK1[(0.67±0.05)比(0.54±0.04)]、p-IRF3[(0.39±0.03)比(0.25±0.02)]蛋白表达均升高,脑组织中ZO-1 mRNA[(0.63±0.05)比(0.87±0.07)]、occludin mRNA[(0.46±0.05)比(0.71±0.06)]表达均降低,逃避潜伏期延长[(23.4±1.0)s比(16.5±0.7)s],原平台象限停留次数减少[(9.6±0.3)次比(12.8±0.5)次],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异钩藤碱可抑制急性脑梗死大鼠炎症、减少血-脑屏障损伤、降低脑水肿程度,改善认知障碍,其机制可能与抑制STING/TBK1/IRF3通路有关。

甲状腺癌EB病毒感染与XRCC1、STING1、IL-10基因多态性及病理类型的关联

目的 研究甲状腺癌EB病毒感染与X射线交错互补修复基因1(XRCC1)、干扰素基因刺激蛋白1(STING1)、白细胞介素-10(IL-10)基因多态性及病理类型的关联.方法 选取2021年3月-2023年3月青岛大学附属青岛市海慈医院(青岛市中医医院)收治的甲状腺癌患者130例为恶性组,同期收治的138例甲状腺腺瘤患者为良性组,比较两组及不同病理类型甲状腺癌患者EB病毒感染率、XRCC1、STING1、IL-10基因多态性,比较不同EB病毒感染状态甲状腺癌患者XRCC1、STING1、IL-10基因多态性.结果 恶性组EB病毒感染率、XRCC1基因型AA、GA及XRCC1、IL-10等位基因A占比高于良性组,XRCC1基因型GG占比低于良性组(P<0.05);乳头状癌组、滤泡状癌组EB病毒感染率高于髓样癌组、未分化癌组(P<0.05);乳头状癌组、未分化癌组XRCC1等位基因G高于滤泡状癌组、髓样癌组(P<0.05).感染组STING1等位基因C高于非感染组(P<0.05);感染组IL-10基因型CC占比高于非感染组,基因型CA占比低于非感染组(P<0.05).结论 甲状腺癌和甲状腺腺瘤患者EB病毒感染率、XRCC1基因多态性分布具有明显差异,且EB病毒感染可能与甲状腺癌患者病理类型有关,同时IL-10基因多态性可能与甲状腺癌患者EB病毒易感性有关.

ASPP1、VEGF在不同海拔地区大鼠脑组织中的表达及其与脑储备能力的关系

目的研究不同海拔高度和造模后不同时间点脑梗死大鼠脑组织中ASPP1、VEGF免疫组化的表达情况,评估在低压缺氧预处理后脑梗死大鼠的脑储备能力,探讨高原地区缺血性脑血管病脑储备能力的特点。方法采用免疫组化方法检测脑梗死大鼠脑组织中ASPP1、VEGF表达情况,根据染色深浅和阳性细胞比率评分进行统计学分析,比较不同海拔高度和造模后不同时间点的差异。结果 ASPP1在脑梗死后1 d和3、7、14 d,3 d和7、14 d,7 d和14 d比较以及海拔2 200 m和3 500 m,3 500 m和4 500 m比较,差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF在脑梗死后1 d和3、7、14 d 3 d和7 d,7 d和14 d,比较以及海拔2 200 m和3 500、4 500 m,3 500 m和4 500 m比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在中度海拔和高海拔地区适度低氧可以对抗细胞凋亡,在特高海拔和极高海拔地区能诱导细胞凋亡;在不同海拔高度低压缺氧预处理可以提高机体VEGF的表达水平,增强脑结构储备和脑代谢储备能力。

EBV感染及STING/TBK1信号通路与儿童传染性单核细胞增多症临床表现的关系

目的分析Epstein-Barr病毒(EBV)感染及外周血干扰素基因刺激蛋白/TANK结合激酶1(STING/TBK1)信号通路表达与儿童传染性单核细胞增多症(IM)临床表现的关系。方法选取2019年1月-2021年1月西安市儿童医院收治的EBV感染患儿263例,其中IM患儿143例为研究组,单纯EBV感染患儿120例为对照组。入院检测血浆中EBV DNA载量,分为低载量组、中载量组和高载量组,采用蛋白印迹法检测外周血磷酸化STING(p-STING)和p-TBK1表达,分析EBV DNA载量及STING/TBK1信号通路表达与儿童IM临床表现的关系。结果研究组患儿血浆EBV DNA载量、外周血单个核细胞(PBMCs)中p-STING、p-TBK1的相对表达量均高于对照组(P<0.05);不同EBV DNA载量IM患儿临床表现中肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常情况的比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中高载量组肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常检出率最高,中载量组次之,低载量组最低;存在肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常IM患儿p-STING、p-TBK1相对表达量分别高于无肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常IM患儿(P<0.05)。结论EBV DNA载量及STING/TBK1信号通路表达与IM患儿肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常情况密切相关,监测上述指标有助于IM的临床评估。

从CSF1R/STING/TBK1信号调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表型极化探究加味白头翁汤治疗结直肠癌的效应机制

目的:观察加味白头翁汤对结直肠癌MC38细胞荷瘤小鼠瘤体生长及肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润数量的影响,探析加味白头翁汤是否介导TAMs表型重塑以发挥抗肿瘤免疫调节效应。方法:首先构建鼠源MC38细胞株C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,设立模型组、阳性药奥沙利铂组(3 mg·kg^(-1))及加味白头翁汤高、低剂量组23.43、46.86 g·kg^(-1),每组各10只,另设立10只健康小鼠为空白组,观察各组小鼠体质量、瘤体体积及生存状态变化,摘取肿瘤组织、脾脏及外周血,计算瘤体体积变化、抑瘤率及脾脏质量;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理形态学变化,免疫荧光实验检测荷瘤小鼠肿瘤组织中CD4、CD8、CD206表达水平,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测荷瘤小鼠外周血清中细胞因子转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-6、趋化因子配体2(CCL2)的分泌水平;其次,使用MC38细胞株与鼠源单核巨噬细胞系RAW264.7细胞在体外构建IL-4诱导的共培养模型,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测加味白头翁汤含药血清的细胞增殖抑制作用,Transwell实验检测IL-4诱导的M2型巨噬细胞对MC38细胞侵袭能力的影响,流式细胞术检测加味白头翁汤含药血清对IL-4诱导的M2型巨噬细胞干预后膜上CD86的表达变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测加味白头翁汤含药血清对共培养后M1型巨噬细胞相关极化因子CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-12及M2型巨噬细胞相关极化因子CD206、CD163、IL-10 mRNA表达水平的影响;最后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测荷瘤小鼠肿瘤组织中集落刺激因子1受体(CSF1R)、干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)蛋白表达水平。结果:体内实验结果表明,与模型组比较,加味白头翁汤能明显抑制荷瘤小鼠瘤体的生长。免疫荧光实验结果表明加味白头翁汤能增加荷瘤小鼠肿瘤组织中CD8+T细胞浸润数量,降低CD206+TAMs浸润数量,且能下调荷瘤小鼠外周血清中细胞因子IL-6、TGF-β、CCL2的分泌水平;在体外实验结果中,加味白头翁汤含药血清无明显的细胞增殖抑制作用,但与RAW264.7细胞共孵育后的细胞上清液却能抑制MC38细胞的增殖活性,且IL-4诱导的M2型巨噬细胞能增强MC38细胞的侵袭能力,这一效应却能被加味白头翁汤含药血清呈浓度依赖性抑制。同时,Real-time PCR检测结果发现加味白头翁汤含药血清能上调M1型巨噬细胞相关极化因子CD86、iNOS、IL-12 mRNA表达水平,下调M2型巨噬细胞相关极化因子CD206、CD163、IL-10 mRNA表达水平,流式细胞术结果也证实了加味白头翁汤含药血清能增加CD86+M1型巨噬细胞复极化数量,这表明加味白头翁汤能诱导M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞复极化以发挥抗肿瘤生长作用。最后,Western blot检测结果表明加味白头翁汤能下调荷瘤小鼠肿瘤组织中CSF1R蛋白表达,上调STING、TBK1蛋白表达。结论:加味白头翁汤能下调CD206+TAMs浸润数量,增加CD8+T细胞浸润,从而发挥对结直肠癌生长抑制的抗肿瘤免疫调节效应,这可能与其调节CSF1R信号,进而活化STING/TBK1信号通路,诱导TAMs表型重塑有关。

低氧诱导因子1α对成肌分化中PGC-1β的影响及机制研究

目的:研究低氧诱导因子HIF-1α在颏舌肌成肌分化和线粒体生物发生中的作用,探索可能的调控机制。方法:构建HIF-1α敲降质粒,慢病毒载体转染小鼠颏舌肌成肌细胞,设阴性对照组,用含2%马血清的分化培养基在低氧(1%O2)环境下诱导成肌细胞分化,western blot检测成肌细胞分化2、4、6 d,PGC-1β、AMPKα1、p AMPKα1的表达水平,免疫细胞化学染色观察低氧分化4 d时AMPK通道激活剂与阻滞剂对PGC-1β的表达影响,western blot定量分析。结果:1 HIF-1α敲降组的PGC-1β表达量高于对照组(P<0.05),且分化4 d时表达最高(P<0.05);2AMPKα1总蛋白表达量无明显差异,p AMPKα1的表达在HIF-1α敲降组远高于对照组(P<0.05)。3AMPK通路促进剂AICAR增加PGC-1β的表达(P<0.05),抑制剂Compound C明显抑制PGC-1β的表达(P<0.05)。结论:HIF-1α下调了低氧环境中PGC-1β的表达,PGC-1β的表达受AMPK通路的正向调节作用。

藁本内酯对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织损伤的影响

目的研究藁本内酯调控干扰素基因刺激蛋白(STING)/TANK结合激酶1(TBK1)/核因子-κB(NF-κB)信号对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠模型肺组织损伤的影响。方法将小鼠分成对照组、模型组(LPS肺损伤小鼠模型)、实验低剂量组(LPS肺损伤小鼠模型,20 mg·kg^(-1)藁本内酯)、实验中剂量组(LPS肺损伤小鼠模型,60 mg·kg^(-1)藁本内酯)、实验高剂量组(LPS肺损伤小鼠模型,100 mg·kg^(-1)的藁本内酯)、DMXAA组(LPS肺损伤小鼠模型,100 mg·kg^(-1)的藁本内酯、STING信号激动药DMXAA)。用蛋白质印迹法检测STING、p-TBK1、TBK1、p-p65、p65蛋白的表达水平,用二喹啉甲酸(BCA)法检测肺泡灌洗液总蛋白,用瑞士吉姆萨染色计数肺泡灌洗液中炎性细胞数目,用酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用硫代巴比妥酸法检测肺组织中丙二醛(MDA)含量。结果对照组、模型组和实验低、中、高剂量组及DMXAA组的STING蛋白相对表达水平分别为0.13±0.03、0.46±0.02、0.36±0.04、0.27±0.02、0.20±0.03和0.38±0.04,p-TBK1/TBK1蛋白比值分别为0.15±0.02、0.56±0.02、0.43±0.01、0.31±0.01、0.20±0.02和0.30±0.02,p-p65/p65蛋白比值分别为0.24±0.01、0.66±0.03、0.41±0.02、0.32±0.04、0.22±0.02和0.42±0.03,肺泡灌洗液中总蛋白含量分别为(173.79±15.44)、(304.21±19.29)、(243.59±17.60)、(212.51±18.24)、(187.11±11.59)和(241.69±30.12)μg·mL^(-1),巨噬细胞数目分别为(0.11±0.02)×10^(8)、(0.94±0.09)×10^(8)、(0.72±0.08)×10^(8)、(0.57±0.04)×10^(8)、(0.41±0.04)×10^(8)和(0.71±0.08)×10^(8)cell·mL^(-1),模型组的上述指标与对照组相比,实验低、中、高剂量组的上述指标与模型组相比,DMXAA组的上述指标与实验高剂量组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论藁本内酯抑制STING/TBK1/NF-κB信号减轻LPS诱导的急性肺损伤小鼠模型肺组织损伤。