降钙素作用于刺鼠相关蛋白神经元调控能量平衡的研究

目的探讨降钙素通过刺鼠相关蛋白(AgRP)神经元发挥调控能量平衡的作用。方法将12周龄普通食物喂养雄性C57BL/6小鼠分为自由进食组和禁食24 h组,6周龄雄性C57BL/6小鼠分为普通食物组和高脂食物组(喂养3个月),每组3只,采用免疫荧光染色法检测脑组织切片降钙素受体(Calcr)的表达。12只6周龄雄性C57BL/6小鼠通过高脂食物喂养6个月构建高脂食物喂养小鼠模型,侧脑室置管后将小鼠分为生理盐水侧脑室注射组(侧脑室注射1μl生理盐水)和鲑鱼降钙素(sCT)侧脑室注射组[侧脑室注射1μl sCT(1μg/μl)],每组6只,测定各组小鼠注射后24 h的体重和进食量,并采用Oxymax/CLAMS代谢笼测定小鼠的氧气消耗量、二氧化碳生成量和能量消耗。将12周龄普通食物喂养雄性C57BL/6小鼠分为生理盐水腹腔注射组(腹腔注射,10 ml/kg)和sCT腹腔注射组(腹腔注射,150μg/kg),每组3只,采用免疫荧光染色法检测脑组织切片AgRP、c-Fos、磷酸化信号转导子和转录激活子3(pStat3)的表达。采用独立样本t检验比较组间差异。结果与自由进食组相比,禁食24 h组弓状核Calcr表达明显下降(P<0.05)。与普通食物组相比,高脂食物组下丘脑弓状核Calcr表达明显下降(P<0.05)。与生理盐水侧脑室注射组相比,sCT侧脑室注射组体重和进食量明显减少(P<0.05),而氧气消耗量、二氧化碳生成量及能量消耗明显升高(P<0.05)。与生理盐水腹腔注射组相比,sCT腹腔注射组弓状核AgRP和c-Fos的共染明显减少,室旁核AgRP表达明显减少而室旁核c-Fos表达明显增多,弓状核pStat3表达明显增多(P<0.05)。结论弓状核Calcr与能量平衡密切相关。降钙素可通过Stat3通路抑制AgRP表达,抑制AgRP神经元活性,进而抑制食欲、促进能量消耗。

Ghrelin和SHU9119通过促进CART神经元调节小鼠采食

为研究Ghrelin和SHU9119如何作用于小鼠下丘脑可卡因和苯丙胺转录调节因子（CART）神经元参与小鼠采食调控,本试验以免疫荧光技术为主,利用代谢笼和冰冻切片的方式获取试验材料,综合小鼠采食量测定,CART神经元表达数目的统计学分析,及CART神经元、刺鼠相关蛋白（AgRP）神经元同黑皮质素4型受体（MC4R）神经元间共定位信息,对Ghrelin和SHU9119通过不同方式介导CART神经元以参与小鼠采食调控这一作用机理进行初步阐述。结果显示：健康4周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射Ghrelin（50μg/kg,n=3）后,其下丘脑背内侧核（DMH）区域CART神经元表达数目显著上升（P〈0.05）;而SHU9119（50μg/kg,n=5）则显著促进弓状核（ARC）区域的CART神经元的表达（P〈0.01）,2种药物促进CART神经元表达的部位并不相同。同时,2种药物的单独注射均可对小鼠采食活动产生一定的促进作用（Ghrelin组n=7;SHU9119组n=7）。有趣的是,CART神经元在DMH区域同AgRP神经元之间具有突触联系,而CART神经元与表达MC4R的神经元之间的共表达关系则发生在ARC区域。结合已有的研究证据,我们推测Ghrelin和SHU9119可能通过不同方式参与对CART神经元表达的调节,并最终影响小鼠采食活动。期望通过本研究为今后进一步探明外周信号分子如何参与促厌食神经元对机体能量代谢调控提供新的思路和证据。