山柰酚调控白细胞介素-1β诱导的软骨细胞的药理学研究

目的研究山柰酚对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡的影响以及对前交叉韧带横断术(ACLT)介导的膝骨关节炎(KOA)模型小鼠病理进程的调控作用。方法将软骨细胞分为空白组、模型组和低、中、高剂量实验组。空白组用完全培养基正常培养,模型组用含10 ng·mL^(-1)IL-1β的完全培养基处理,山柰酚低、中、高实验组在模型组的基础上分别予以10、20、50μmol·L-1山柰酚处理。以甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)免疫荧光染色对原代细胞进行鉴定;以细胞计数法-8(CCK-8)法检测山柰酚对软骨细胞增殖的影响;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、剪切的胱天蛋白酶-9(cleaved caspase-9)的表达情况。将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组、山柰酚组,模型组用ACLT法构建小鼠膝骨关节炎模型,4周后阳性药组予美洛昔康,山柰酚组予山柰酚进行灌胃治疗,假手术组及模型组予等体积0.9%NaCl灌胃,共4周。以苏木精-伊红(HE)及番红-O染色法观察各组小鼠膝关节软骨组织形态学变化;以原位末端标记(TUNEL)法检测膝关节软骨细胞凋亡率。结果甲苯胺蓝及CollagenⅡ免疫荧光鉴定结果表明所提取的细胞符合软骨细胞特征。空白组、模型组和低、中、高剂量实验组Bax蛋白表达水平分别为0.54±0.01、1.31±0.05、1.25±0.06、1.01±0.46、0.66±0.02;cleaved caspase-3蛋白表达水平分别为0.36±0.01、1.25±0.05、1.04±0.01、0.54±0.02、0.47±0.01;cleaved caspase-9蛋白表达水平分别为0.23±0.01、1.06±0.02、0.95±0.05、0.60±0.02、0.49±0.03;Bcl-2蛋白表达水平分别为0.34±0.02、0.20±0.01、0.29±0.02、0.37±0.00、0.35±0.02,山柰酚对Bax、caspase-3、caspase-9蛋白表达有明显的抑制作用,且可增加Bcl-2的表达(P<0.05)。病理检测结果显示,ACLT可成功构建KOA模型,山柰酚可显著改善其病理进程。结论山柰酚可显著抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,并可调控KOA小鼠软骨细胞凋亡,延缓其病理进程。

大鼠骨关节炎三种动物模型的建立及比较

为探讨三种骨关节炎动物模型的建立方法、效果及其适用条件,采用Hulth手术、碘乙酸关节腔注射、前交叉韧带切除处理,对SD大鼠造骨关节炎模型,并在适当时间,取两侧膝关节进行切片,比较各组骨关节大体形态及病理变化。实验结果表明,Hulth模型组及碘乙酸模型组6周即可造模成功,损伤程度较严重,类似骨关节炎中晚期;前交叉韧带切除模型组造模需8周以上,病情类似骨关节炎早期或中期,更适合用作发病机制、药物治疗方面的研究。