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前内皮素原mRNA在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达及作用
被引量:
5
1
作者
陈玉君
刘唐威
+1 位作者
陈克正
庞玉生
《临床儿科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期861-864,共4页
目的探讨前内皮素原mRNA(preproendothelin-1 mRNA,ppET-1mRNA)在新生鼠肺出血发生过程中肺组织中的表达。方法生后7~8d的Wister新生鼠,随机分为空气组(C)、低氧组(H)、低温缺氧组(HH)、低温缺氧后常氧复温组(HHR)、低温缺氧后高氧复温...
目的探讨前内皮素原mRNA(preproendothelin-1 mRNA,ppET-1mRNA)在新生鼠肺出血发生过程中肺组织中的表达。方法生后7~8d的Wister新生鼠,随机分为空气组(C)、低氧组(H)、低温缺氧组(HH)、低温缺氧后常氧复温组(HHR)、低温缺氧后高氧复温组(HHRO2)。C组置常温室内,H组置低氧箱内6h,吸入氧气浓度5%~6%,HH组同H组,并置于(10±1℃)冰箱内6h,HHR组低温缺氧过程同HH组,随后常氧下复温2h,HHRO2组同HHR组但复温时吸入气氧浓度>95%。各组取肺组织,观察肺大体,切片HE染色观察肺组织病理学改变,逆转录——聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中ppET-1mRNA表达。结果H组、HH组、HHR组和HHRO2组肺大体均呈现水肿,HH组、HHR组和HHRO2组可见点状、局灶性至弥漫性出血;光镜下组织学改变包括肺水肿(肺泡及间隔水肿)、肺泡扩大、间隔断裂、肺泡融合及出血,HHRO2组最严重;ppET-1mRNA在H组、HH组、HHRO2组表达量增高(分别为0.706±0.184、0.641±0.172、0.673±0.246),与C组(0.363±0.216)比较P均<0.01。结论在新生鼠肺出血发生过程中,肺组织中ppET-1mRNA呈高表达状态,在肺出血发生过程中起了重要的作用。
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关键词
前内皮素原-1
肺出血
新生鼠
下载PDF
职称材料
内皮细胞特异性表达血管内皮生长因子基因载体的构建及表达特性验证(英文)
被引量:
2
2
作者
郑湘榕
张珊珊
+1 位作者
杨于嘉
谭洁璐
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第21期3205-3209,3213,共6页
目的构建在内皮细胞特异性表达人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的真核表达载体,验证HRE.ppET-1调控元件的内皮细胞表达特异性。方法用聚合酶链反应(PCR)方法直接合成缺氧反应元件(hypoxia-responsive ...
目的构建在内皮细胞特异性表达人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的真核表达载体,验证HRE.ppET-1调控元件的内皮细胞表达特异性。方法用聚合酶链反应(PCR)方法直接合成缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE),人前内皮素原-1基因(human preproendothe-lin-1,ppET-1)启动子、VEGF元件,通过PCR、酶切、连接等一系列核酸分子操作,将各元件亚克隆至pcD-NA3.1载体上,最终组合而成真核表达载体pcDNA3.1-VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-ppET-1+VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-HRE+ppET-1+VEGF+Pa;脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性。结果各载体经酶切鉴定和测序证实。GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱。结论成功构建能在内皮细胞特异性表达人VEGF基因的真核表达载体;HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,为进一步利用VEGF进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定良好基础。
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关键词
缺氧反应元件
人
前内皮素原-1
基因启动子
血管
内皮
生长因子
内皮
细胞
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职称材料
HRE.ppET-1调控血管内皮生长因子基因在内皮细胞的靶向性表达
3
作者
郑湘榕
张珊珊
+3 位作者
杨于嘉
王霞
钟乐
余小河
《中国科学(C辑)》
CSCD
北大核心
2008年第9期794-800,共7页
试图探讨缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)增强人前内皮素原-1基因(human preproendothelin-1,ppET-1)启动子在缺氧条件下靶向调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在内皮细胞中的表达,以...
试图探讨缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)增强人前内皮素原-1基因(human preproendothelin-1,ppET-1)启动子在缺氧条件下靶向调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在内皮细胞中的表达,以提高基因治疗的效果.构建真核表达载体pEGFP-HRE.ppET-1,pcDNA3.1-VEGF+Pa(VA),pcDNA3.1-ppET-1+VEGF+Pa(PVA),pcDNA3.1-HRE.ppET-1+VEGF+Pa(HPVA),脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性.培养基中加入100μmol/L的氯化钴模拟细胞体外缺氧环境.载体转染后,RT-PCR和Western blot半定量分别检测各载体VEGFmRNA和蛋白水平在常氧及缺氧条件下的表达差异.应用Elisa定量检测细胞上清VEGF蛋白的表达量,分析各载体的表达水平.使用MTT实验检测细胞增殖率.GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱.RT-PCR,Western Blot及Elisa的检测结果均表明缺氧条件下HPVA组以及PVA组中,VEGF的表达均较常氧条件下增强(P<0.05).MTT实验检测显示HPVA转染的缺氧条件下的HUVEC增殖率超过其常氧未转染对照组.结果显示,HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,并能在缺氧条件下显著提高VEGF的表达,刺激内皮细胞的增殖,为进一步开展内皮细胞的靶向基因治疗研究奠定良好基础.
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关键词
缺氧反应元件
人
前内皮素原-1
基因启动子
血管
内皮
生长因子
内皮
细胞
原文传递
题名
前内皮素原mRNA在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达及作用
被引量:
5
1
作者
陈玉君
刘唐威
陈克正
庞玉生
机构
广西医科大学第一附属医院PICU
广西医科大学第一附属医院心血管科
广东省广州市儿童医院NICU
出处
《临床儿科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期861-864,共4页
基金
2007年广西省自然科学基金资助项目(No.桂科自0728157)
文摘
目的探讨前内皮素原mRNA(preproendothelin-1 mRNA,ppET-1mRNA)在新生鼠肺出血发生过程中肺组织中的表达。方法生后7~8d的Wister新生鼠,随机分为空气组(C)、低氧组(H)、低温缺氧组(HH)、低温缺氧后常氧复温组(HHR)、低温缺氧后高氧复温组(HHRO2)。C组置常温室内,H组置低氧箱内6h,吸入氧气浓度5%~6%,HH组同H组,并置于(10±1℃)冰箱内6h,HHR组低温缺氧过程同HH组,随后常氧下复温2h,HHRO2组同HHR组但复温时吸入气氧浓度>95%。各组取肺组织,观察肺大体,切片HE染色观察肺组织病理学改变,逆转录——聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中ppET-1mRNA表达。结果H组、HH组、HHR组和HHRO2组肺大体均呈现水肿,HH组、HHR组和HHRO2组可见点状、局灶性至弥漫性出血;光镜下组织学改变包括肺水肿(肺泡及间隔水肿)、肺泡扩大、间隔断裂、肺泡融合及出血,HHRO2组最严重;ppET-1mRNA在H组、HH组、HHRO2组表达量增高(分别为0.706±0.184、0.641±0.172、0.673±0.246),与C组(0.363±0.216)比较P均<0.01。结论在新生鼠肺出血发生过程中,肺组织中ppET-1mRNA呈高表达状态,在肺出血发生过程中起了重要的作用。
关键词
前内皮素原-1
肺出血
新生鼠
Keywords
ppET
-
1
mRNA
pulmonary hemorrhage
newborn rats
分类号
R722.1 [医药卫生—儿科]
下载PDF
职称材料
题名
内皮细胞特异性表达血管内皮生长因子基因载体的构建及表达特性验证(英文)
被引量:
2
2
作者
郑湘榕
张珊珊
杨于嘉
谭洁璐
机构
中南大学湘雅医院儿科
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第21期3205-3209,3213,共6页
基金
supported by a grant from the National Science Foundation of China(No:30772341)
文摘
目的构建在内皮细胞特异性表达人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的真核表达载体,验证HRE.ppET-1调控元件的内皮细胞表达特异性。方法用聚合酶链反应(PCR)方法直接合成缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE),人前内皮素原-1基因(human preproendothe-lin-1,ppET-1)启动子、VEGF元件,通过PCR、酶切、连接等一系列核酸分子操作,将各元件亚克隆至pcD-NA3.1载体上,最终组合而成真核表达载体pcDNA3.1-VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-ppET-1+VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-HRE+ppET-1+VEGF+Pa;脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性。结果各载体经酶切鉴定和测序证实。GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱。结论成功构建能在内皮细胞特异性表达人VEGF基因的真核表达载体;HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,为进一步利用VEGF进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定良好基础。
关键词
缺氧反应元件
人
前内皮素原-1
基因启动子
血管
内皮
生长因子
内皮
细胞
Keywords
hypoxia
-
responsive element
human preproendothelin
-
1
promoter
vascular endothelial growth factor
endothelial cells
分类号
R331.32 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
HRE.ppET-1调控血管内皮生长因子基因在内皮细胞的靶向性表达
3
作者
郑湘榕
张珊珊
杨于嘉
王霞
钟乐
余小河
机构
中南大学湘雅医院儿科
出处
《中国科学(C辑)》
CSCD
北大核心
2008年第9期794-800,共7页
基金
国家自然科学基金(批准号:30500541)资助项目
文摘
试图探讨缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)增强人前内皮素原-1基因(human preproendothelin-1,ppET-1)启动子在缺氧条件下靶向调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在内皮细胞中的表达,以提高基因治疗的效果.构建真核表达载体pEGFP-HRE.ppET-1,pcDNA3.1-VEGF+Pa(VA),pcDNA3.1-ppET-1+VEGF+Pa(PVA),pcDNA3.1-HRE.ppET-1+VEGF+Pa(HPVA),脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性.培养基中加入100μmol/L的氯化钴模拟细胞体外缺氧环境.载体转染后,RT-PCR和Western blot半定量分别检测各载体VEGFmRNA和蛋白水平在常氧及缺氧条件下的表达差异.应用Elisa定量检测细胞上清VEGF蛋白的表达量,分析各载体的表达水平.使用MTT实验检测细胞增殖率.GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱.RT-PCR,Western Blot及Elisa的检测结果均表明缺氧条件下HPVA组以及PVA组中,VEGF的表达均较常氧条件下增强(P<0.05).MTT实验检测显示HPVA转染的缺氧条件下的HUVEC增殖率超过其常氧未转染对照组.结果显示,HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,并能在缺氧条件下显著提高VEGF的表达,刺激内皮细胞的增殖,为进一步开展内皮细胞的靶向基因治疗研究奠定良好基础.
关键词
缺氧反应元件
人
前内皮素原-1
基因启动子
血管
内皮
生长因子
内皮
细胞
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q753 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
前内皮素原mRNA在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达及作用
陈玉君
刘唐威
陈克正
庞玉生
《临床儿科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
5
下载PDF
职称材料
2
内皮细胞特异性表达血管内皮生长因子基因载体的构建及表达特性验证(英文)
郑湘榕
张珊珊
杨于嘉
谭洁璐
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
下载PDF
职称材料
3
HRE.ppET-1调控血管内皮生长因子基因在内皮细胞的靶向性表达
郑湘榕
张珊珊
杨于嘉
王霞
钟乐
余小河
《中国科学(C辑)》
CSCD
北大核心
2008
0
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