前列腺六段跨膜上皮抗原4对炎症环境下前列腺癌细胞增殖的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下前列腺六段跨膜上皮抗原4(STEAP4)在前列腺癌发展中的作用。方法采用LPS诱导前列腺癌细胞PC3和VCa P的炎症环境;将PC3和VCa P细胞分为对照组、LPS处理组(将PC3和VCa P细胞暴露于1μg/ml的LPS)、转染对照组(LPS+转染si-con)和转染沉默组(LPS+转染si-STEAP4)。转染24 h后采用蛋白免疫印迹检测STEAP4水平。采用酶联免疫吸附试验检测细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。采用CCK-8和Ed U染色检测细胞增殖能力。采用蛋白免疫印迹检测环鸟苷酸(c GMP)-c GMP依赖性蛋白激酶(PKG)信号通路相关蛋白表达水平。结果LPS处理组PC3和VCa P细胞的STEAP4蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组PC3和VCa P细胞的STEAP4蛋白表达水平与转染对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞的STEAP4蛋白表达水平显著低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞的IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组和转染对照组PC3和VCa P细胞的IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞的IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平显著低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞24、48、72 h的增殖活力均显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组和转染对照组PC3和VCa P细胞24、48、72 h的增殖活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞24、48、72 h的增殖活力均低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞的增殖活力显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组和转染对照组PC3和VCa P细胞的增殖活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞的增殖活力显著低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞中c GMP、PKG1、PKG2和磷酸化血管扩张剂刺激磷酸蛋白(pVASP)/VASP的相对表达量显著低于对照组(P<0.05);转染对照组和LPS处理组PC3和VCa P细胞中c GMP、PKG1、PKG2和pVASP/VASP的相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组的PC3和VCa P细胞中c GMP、PKG1、PKG2和pVASP/VASP的相对表达量显著高于转染对照组(P<0.05)。结论STEAP4沉默能够抑制LPS诱导的前列腺癌细胞的增殖和炎症反应。STEAP4下调可能通过减少细胞增殖和炎症反应来抑制LPS诱导的肿瘤发生。

前列腺癌组织中前列腺跨膜上皮抗原表达的临床意义

目的 :探讨前列腺跨膜上皮抗原 (STEAP)在前列腺癌 (PCa)组织中的表达及与肿瘤病理分级之间的关系。方法 :采用免疫组化SP法 ,用STEAP单克隆抗体对前列腺不同病变组织及非前列腺肿瘤组织石蜡包埋切片进行免疫组化染色 ,其中PCa组织 131例 ,良性前列腺增生 (BPH)组织 16 4例 ,非前列腺肿瘤组织标本 5 6例。引入阳性面积单位概念判定STEAP染色强度。 结果 :2 95例前列腺病变组织中 ,仅 3例PCa和 5例BPH组织STEAP呈阴性表达 ,STEAP在PCa组织中明显高表达 ,非前列腺肿瘤组织染色均呈阴性。STEAP表达与PCa的Gleason分级之间存在显著负相关性。 结论 :STEAP能够用来判断PCa的预后 ,在PCa的免疫治疗方面具有良好的应用前景。

糖尿病伴乳腺癌患者硫氧还蛋白结合蛋白、前列腺跨膜上皮抗原2、转录因子家族中成员GATA3的表达及血清氧化应激指标的变化

目的研究硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、前列腺跨膜上皮抗原2(STEAP2)、转录因子(GATA)家族中成员GATA3与糖尿病伴乳腺癌的关系,并分析患者术前及术后的血清氧化应激指标变化。方法检测45例糖尿病伴乳腺癌患者癌组织及对应癌旁组织中TXNIP、STAMP2、GAT.A3 mRNA表达量、蛋白水平及蛋白阳性表达情况,分析其临床病理特征,以及血清氧化应激指标的变化。结果乳腺癌组织中TXNIP mRNA、STAMP2 mRNA、GATA3 mRNA的相对表达量均下降(P<0.05)。TXNIP、STAMP2、GATA3蛋白在乳腺癌组织中的表达低于癌旁正常组织(P<0.05),且3个指标的表达阳性率为60%、66.7%、73.3%,均高于对应癌旁正常组织中的TXNIP蛋白表达阳性率(2.2%)(P<0.05)。乳腺癌组织中TXNIP、STAMP2、GATA3蛋白表达阳性率均与分化程度、淋巴结转移与临床分级相关(P<0.05)。患者术后血清MDA、髓过氧化物酶(MPO)均呈现先上升后下降变化趋势,SOD及总抗氧化力(TAC)呈现先下降后上升的变化趋势,术后6 d为转折点。结论 TXNIP、STAMP2、GATA3及血清氧化应激指标可能成为糖尿病伴乳腺癌患者诊断及治疗的参考指标。

前列腺组织STEAP表达与H2O2水平的关系

目的:探讨STEAP基因的功能。方法:应用RT-PCR、免疫印迹的方法,检测STEAP mRNA和蛋白在国人正常前列腺、前列腺癌组织中的表达水平。应用钼酸还原法检测正常前列腺内腺、外腺及前列腺癌组织H2O2水平,同时应用黄嘌呤氧化法测定3种组织中SOD水平,分析其与STEAP表达的相关性。结果:国人前列腺癌STEAP mRNA和蛋白高表达;前列腺癌组织中H2O2水平及总SOD水平明显高于正常前列腺。结论:STEAP的功能之一可能是诱导内源性H2O2水平增高,促进细胞快速生长。

前列腺跨膜上皮抗原在前列腺癌组织中的表达及与PSA的关系

目的探讨前列腺癌组织中前列腺跨膜上皮抗原（STEAP）表达及与前列腺特异性抗原（PSA）的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测65例前列腺癌（其中T19例、T214例、T317例、T425例，高分化癌37例、中分化癌12例、低分化癌16例）组织标本中STEAP的表达，引入阳性灰度值概念判定染色强度；分析STEAP表达水平与肿瘤分期、分级、血清PSA及游离PSA／总PSA（f／tPSA）比值的关系。结果65例患者血清PSA值为（27．65±8．34）ng／ml，f／tPSA为0．15±0．04。STEAP阳性表达63例，其中T17例、T214例、T317例、T425例，高分化癌37例、中分化癌11例、低分化癌15例。T1、T2、T3、T4前列腺癌组织中STEAP表达平均阳性灰度值（Gs）分别为26．8％、45．6％、62．3％、76．5％，高、中、低分化癌组织中STEAP表达平均Gs分别为71．2％、52．8％、34．4％。STEAP表达与肿瘤分期呈正相关（r=0．67，P〈O．01）；随着Gleason评分的增高，STEAP表达逐渐降低（P〈O．01）；STEAP表达与患者血清PSA无明显相关性（r=0．21，P〉0．05），而与f／tPSA比值呈负相关（r=-0．83，P〈0．01）。结论STEAP可作为判断前列腺癌浸润深度、分化程度的指标之一。

STEAP3在脑缺血再灌注损伤沙鼠中的表达及意义

目的探讨前列腺六跨膜上皮抗原3(STEAP3)在脑缺血再灌注(I/R)损伤沙鼠中的表达及意义。方法将48只沙鼠随机分为假手术组(Sham组)、I/R模型组(I/R组)、I/R模型+STEAP3 siRNA组(siRNA组)和I/R模型+scramble siRNA组(Control组),每组12只。进行沙鼠神经功能评分。Nissl染色观察海马CA1区神经元。Fe^(2+)试剂盒检测海马组织Fe^(2+)水平。Western blotting检测海马组织中STEAP3、H2AX、4-HNE、GPX4蛋白的表达。应用丙二醛(MDA)试剂盒检测海马组织中MDA含量。结果I/R组沙鼠神经功能学评分、STEAP3、H2AX、4-HNE蛋白及MDA和Fe^(2+)水平明显高于Sham组(P<0.05),而神经元数量和GPX4蛋白表达明显低于Sham组(P<0.01);与I/R组比较,siRNA组沙鼠神经功能学评分、STEAP3、H2AX、4-HNE蛋白及MDA和Fe^(2+)水平明显降低(P<0.05),神经元数量和GPX4蛋白表达明显增多(P<0.05)。结论STEAP3在沙鼠脑I/R损伤中高表达,通过介导铁死亡影响脑I/R损伤的发生和发展,抑制其表达对脑I/R损伤具有保护作用。

载STEAP-1抗体前列腺癌靶向超声微泡的制备及体外寻靶实验研究

目的:采用生物素-亲和素法制备载前列腺跨膜上皮抗原-1(STEAP-1)抗体的靶向超声微泡,检测其结合率、稳定性及体外寻靶能力。方法:(1)体外培养人前列腺癌细胞LNCa P和PC3;(2)采用生物素-亲和素法将STEAP-1抗体与普通声诺维微泡结合,显微镜下观察靶向微泡荧光情况,通过流式细胞术检测其结合率与稳定性;(3)检测所制备的靶向微泡体外结合能力。结果:(1)荧光显微镜下两种前列腺癌细胞表面均发出绿色荧光,即呈阳性表达;蛋白免疫印迹实验结果显示,LNCa P细胞中STEAP-1呈相对高水平表达。(2)载STEAP-1抗体靶向微泡涂片后荧光显微镜下观察,微泡表面呈现环状绿色荧光,普通对照组镜下视野丢失;流式细胞术检测显示,所制备的靶向微泡大小均一,结合率明显高于对照组(P<0.05),振荡后结合率略小于振荡前,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)靶向微泡与前列腺癌细胞孵育反应后出现微泡向细胞区域聚集的现象;靶向微泡于细胞周边呈花环状黏附,LNCa P细胞的黏附率高于PC3细胞(P<0.05);两种细胞的前、后黏附率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)STEAP-1蛋白在人前列腺癌细胞LNCa P和PC3中均呈阳性表达,且前列腺癌分化早期代表细胞株LNCa P细胞呈相对高水平表达;(2)载STEAP-1抗体的靶向微泡可经生物素-亲和素法制备,STEAP-1抗体与普通微泡的结合率高且稳定性好;(3)载STEAP-1抗体靶向微泡体外寻靶可与人前列腺癌细胞牢固结合,且LNCa P细胞较PC3细胞结合率高。

STEAP1在膀胱移形细胞癌中的表达及其潜在诊断价值

目的探索前列腺六段扩膜上皮抗原1(STEAP1)在膀胱移行细胞癌中的表达及其潜在诊断价值。方法选取2021年6月至2022年12月于中国人民解放军联勤保障部队第九四O医院行外科手术治疗的52例膀胱移行细胞癌患者作为观察组,另外选取同期年龄、性别、基础疾病患病率等基础临床资料匹配的膀胱良性肿瘤患者52例作为对照组。通过酶联免疫吸附试验法、实时荧光定量聚合酶链反应测定两组患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平,以及对比不同病理参数患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平。通过Spearman相关性分析、二元Logistic回归分析筛选膀胱移行细胞癌发生及临床分期的危险因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)评价各指标对膀胱移行细胞癌的诊断及预测价值。结果观察组膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中晚期膀胱移行细胞癌患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平均显著高于早期膀胱移行细胞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。通过二元Logistic回归分析表明,患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平增高均是膀胱移行细胞癌发生及中晚期膀胱移行细胞癌的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA独立预测膀胱移行细胞癌发生的AUC分别为0.841(95%CI:0.760~0.922,P<0.001)、0.936(95%CI:0.893~0.980,P<0.001),均具有较高的预测效能。结论膀胱移行细胞癌患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平与膀胱移行细胞癌发生及中晚期膀胱移行细胞癌呈正相关,提示STEAP1可作为诊断、预测膀胱移行细胞癌发生、发展的潜在标志物。

融合蛋白G3G6和HST1致敏DC疫苗抗黑色素瘤的药效学研究

探究促性腺激素释放激素(GnRH)与胃泌素释放肽(GRP)偶联的融合蛋白(G3G6)和热休克蛋白65(HSP65)与六跨膜前列腺上皮抗原(STEAP1)偶联的融合蛋白(HST1)致敏树突状细胞(DC)的效果和致敏后DC对B16F10黑色素瘤的抑制杀伤作用。利用实验室现存工程菌表达融合蛋白G3G6和HST1,按未致敏DC(US-DC)组,G3G6融合蛋白致敏DC(G3G6-DC)组,HST1融合蛋白致敏DC(HST1-DC)组和G3G6及HST1联合致敏DC(GH-DC)组致敏小鼠骨髓来源的DC分化成熟,获得融合蛋白致敏的相应DC疫苗。将B16F10黑色素瘤细胞以1×10~6个/只移植于C57BL/6J雄性小鼠构建黑色素瘤模型,DC疫苗免疫治疗,体内外实验探究DC疫苗的抗肿瘤药效。流式细胞术分析证明,融合蛋白有效刺激DC分化成熟;动物实验显示,与US-DC组相比,G3G6-DC黑色素瘤抑制率为35.75%,HST1-DC组为34.03%,GH-DC组为55.74%。研究结果初步证明,G3G6-DC和HST1-DC均可有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长(P<0.05),且联合用药优于单独用药(P<0.01)。

拟穴青蟹STEAP4-like基因的克隆与表达分析

为了解拟穴青蟹(Scylla paramamosain)前列腺6跨膜上皮抗原4基因(six-transmembrane protein of prostate 4,STEAP4)在拟穴青蟹抗白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)免疫应答中的作用,表达与纯化GST-STEAP4重组蛋白,(1)通过聚合酶链式反应(PCR)克隆了STEAP4基因,利用生物信息学分析软件分析其序列特征;(2)通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测其组织分布及WSSV感染后的表达情况;(3)构建原核表达载体pGEX-6p-1-STEAP4-like,诱导表达与纯化重组蛋白GST-STEAP4-like。结果表明:(1)拟穴青蟹STEAP4-like基因ORF长1443 bp,编码480个氨基酸,N端含有NAD结合位点和一个NADP氧化还原酶辅酶结构域,C端含有一个铁还原酶跨膜结构域;(2)氨基酸序列与三疣梭子蟹STEAP4-like相似性最高,与三疣梭子蟹和突眼蟹亲缘关系最接近;(3)STEAP4-like基因在被检测组织中均有表达;(4)WSSV刺激后STEAP4-like基因显著性下调表达。综上,STEAP4-like可能在拟穴青蟹抗病毒侵染免疫反应中具有重要作用。

STEAP1基因的体外转录

目的:建立STEAP1基因的体外转录模型,为进一步研究其功能奠定基础。方法:应用RT-PCR的方法从前列腺癌组织中钓取STEAP1全长cDNA,TA克隆后测序,亚克隆入pSP64载体,构建体外转录用载体STEAP1-pSP64。同时,通过PCR构建具有SP6RNA聚合酶结合位点的STEAP1体外转录盒。应用体外转录试剂盒,对比STEAP1-pSP64与STEAP1体外转录盒转录效率。结果:(1)成功从人前列腺癌组织中钓取了STEAP1全长cDNA,测序发现无一碱基错配。(2)成功构建了STEAP1-pSP64载体和STEAP1体外转录盒,两者转录效率的比较表明STEAP1-pSP64载体转录RNA的量明显高于STEAP1体外转录盒。结论:成功构建了两种STEAP1体外转录模型,并证明STEAP1-pSP64载体的转录效率高于STEAP1体外转录盒。本研究为进一步研究STEAP1的功能奠定了基础。

STEAP1在人乳腺癌中表达及其临床意义

目的:研究前列腺跨膜上皮抗原1(six-transmembrane epithelial antigen of prostate protein 1,STEAP1)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:收集2007年1月至2016年12月山东省千佛山医院40例女性乳腺正常组织及52例乳腺纤维腺瘤、211例乳腺癌患者的组织标本,应用免疫组织化学法检测STEAP1的表达情况。根据STEAP1表达的高低将乳腺癌患者分为高表达组和低表达组,对两组行临床病理特征和Kaplan-Meier生存分析。运用RT-PCR及Western blot法检测STEAP1在人正常乳腺上皮细胞HBL-100及乳腺癌细胞MDA-MB-468、BT549和MCF-7中的表达情况,使用Oncomine和Kaplan-Meier Plotter数据库分析STEAP1的表达及预后。结果:免疫组织化学法检测显示乳腺癌组织中的STEAP1高表达者占11.8%(25/211),低于乳腺正常组织的85.0%(34/40)和乳腺纤维腺瘤的84.6%(44/52),3者之间具有显著性差异(P<0.001),与Oncomine数据库分析获得的乳腺癌组织中表达低于乳腺正常组织的结果一致。RT-PCR和Western blot法检测显示乳腺上皮细胞中的STEAP1 m RNA和蛋白质表达明显高于乳腺癌细胞MDA-MB-468、BT549和MCF-7,4种细胞之间具有显著性差异(均P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析与Kaplan-Meier Plotter数据库分析均表明STEAP1高表达者预后更佳(均P<0.05)。结论:正常乳腺中的STEAP1表达水平高于乳腺癌,STEAP1高表达与良好的预后相关。

STEAP1对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨前列腺跨膜上皮抗原1(STEAP1)对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及Wnt/β-波连蛋白(β-catenin)信号通路的影响及其作用机制。方法:将BT549细胞分为STEAP1过表达组(LV-STEAP1)和沉默STEAP1组(siR-STEAP1),并设空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)。Western blot检测BT549细胞STEAP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、Wnt/β-catenin、E钙黏蛋白(E-cadherin)水平。RT-PCR测定BT549细胞STEAP1 mRNA水平。CCK8测定BT549细胞增殖情况。Transwell法测定BT549细胞侵袭能力。划痕实验测定BT549细胞迁移能力。结果:与BC组和NC组相比,LV-STEAP1组细胞STEAP1蛋白和mRNA水平提高(P<0.05),细胞增殖率、侵袭细胞数、迁移距离、细胞PCNA、Vimentin、MMP9、Wnt、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05)。siR-STEAP1组细胞STEAP1蛋白和mRNA水平降低(P<0.05),细胞增殖率、侵袭细胞数、迁移距离、细胞PCNA、Vimentin、MMP9、Wnt、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05)。结论:STEAP1可抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

STEAP2在多形性胶质母细胞瘤中的表达及预后分析

多形性胶质母细胞瘤(GBM)是癌症相关死亡率的主要致死因素.STEAP2在多种肿瘤中过表达.本研究的目的是评估STEAP2在GBM患者中的表达和预后价值.使用GEPIA和Kaplan-Meier(KM)分析STEAP2的mRNA表达和蛋白表达及其预后特征.KEGG通路分析用于探索STEAP2的相关信号通路.GEPIA的分析表明,GBM组织中STEAP2的表达上调,STEAP2表达与癌症的临床分期有关.免疫组织化学分析显示,与邻近组织相比,胶质瘤组织中STEAP2蛋白表达显著上调.STEAP2的表达与胶质瘤细胞的增殖能力呈正相关.KM曲线显示,STEAP2表达上调与GBM不良预后有关.STEAP2有望成为胶质瘤的潜在诊断和预后标志物为胶质瘤提供更准确的预后指标.