过表达前列腺凋亡反应因子-4对NIT-1细胞的影响

目的:构建携带前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,PAR-4)基因PRKC apoptosis WT1 regulator(pawr)表达的重组腺病毒载体,研究PAR-4对胰岛β细胞株NIT-1的影响。方法:利用Oligo Designer3.0设计Pawr模版引物,通过RT-PCR扩增出pawr基因片段,使用双酶切克隆至腺病毒载体ADV1,构建重组载体质粒p Ad Track-pawr-CMV。线性化p Ad Track-pawr-CMV和p Ad-Easy-1共同转化到感受态大肠杆菌构建重组腺病毒载体质粒p Ad Track-pawr。将NIT-1细胞分为4组:低糖组、高糖对照组、低糖+PAR-4过表达组以及高糖+PAR-4过表达组,Western blot检测各组PAR-4蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测经葡萄糖刺激后的各组细胞胰岛素分泌功能。结果:克隆的pawr基因片段测序正确。高纯度质粒中量抽提试剂盒抽提重组腺病毒载体质粒成功,单酶切鉴定,质粒转染HEK293细胞后有GFP表达,扩增48 h后出现细胞病变效应,病毒滴度测定为1×109 pfu/ml,低糖和高糖过表达PAR-4后均较相应对照组PAR-4表达明显升高,高糖培养+过表达PAR-4组细胞增殖能力均较低糖(P=0.000)和高糖对照组细胞(P=0.000)明显下降,较低糖(P=0.003)和高糖对照组细胞(P=0.001)胰岛素分泌明显下降。结论:成功构建高滴度pawr基因表达的重组腺病毒载体并转染NIT-1细胞,转染PAR-4后高糖培养的NIT-1细胞增殖能力和胰岛素分泌功能明显下降。

鼻咽癌放疗过程中前列腺凋亡反应因子的表达及意义

目的探讨前列腺凋亡反应因子(Par-4)对鼻咽癌放疗敏感性的意义。方法对40例初治、无远处转移的鼻咽癌患者分别于放疗前、放疗中(40Gy)、放疗后(70Gy)取活检标本,并将10例慢性鼻咽炎患者作为对照,用SP法检测各组前列腺凋亡反应因子蛋白的表达水平,并用SPSS13.0分析数据。结果鼻咽癌组织中前列腺凋亡反应因子蛋白的表达与放疗时间剂量成正相关(r=0.46,P<0.05),与患者年龄、性别无关。结论前列腺凋亡反应因子可作为预测鼻咽癌临床放射敏感性的指标。

前列腺凋亡反应因子4及WT1基因在急性白血病中的表达

目的观察前列腺凋亡反应因子4（Par-4）、WTl基因在急性白血病（AL）及非白血病患者骨髓细胞中的表达情况，探讨Par-4、WTl基因表达水平与完全缓解（CR）率的关系。方法采用荧光定量RT—PCR方法检测78例AL患者及23例非白血病患者骨髓细胞中Par-4、WTlmRNA的表达。结果Par-4基因在78例AL患者与23例非白血病患者骨髓细胞中均有表达，在AL患者表达量明显下降（9．35×10^-4±8．4×10^-5）（P〈0．05）。在缓解组表达增强（1．26×10^-3±1．1×10^-4），与初治组和复发组问差异有统计学意义，但仍低于对照组（3．25×10^-3±2．9×10^-4）。初治组和复发组间表达差异无统计学意义。Par-4基因表达水平与CR率无明显关系（P〉0．05）。WTl基因在AL患者骨髓细胞中高表达（2．98×10^-3±2．1×10^-4），对照组WT1基因低表达（7．25×10^-5±6．7×10^-6）（P〈0．05）。在缓解组WT1基因表达下降（6．86×10^-4±5．2×10^-5），与初治组和复发组间差异有统计学意义，但仍高于对照组。初治组和复发组问表达差异无统计学意义。不同WT1基因表达水平与CR率问差异有统计学意义（P〈0．05）。结论采用荧光定量RT—PCR的方法证实Par-4基因在AL低表达，而WTl基因高表达，二者呈相反的表达模式。Par-4基因表达水平与CR率无明显关系。

Par-4基因过表达调节肾母细胞瘤顺铂敏感性的实验研究

目的:研究Par-4基因过表达对肾母细胞瘤顺铂敏感性的调节作用。方法:培养肾母细胞瘤SKNEP-1细胞并分为四组,对照组用不含血清及药物的RMPI-1640处理,顺铂组用含有5μg/mL顺铂的无血清RMPI-1640处理,Par-4组用无血清RMPI-1640转染Par-4过表达质粒,顺铂+Par-4组用含有5μg/mL顺铂的无血清RMPI-1640转染Par-4过表达质粒。处理后测定细胞的增殖活力及促凋亡基因、迁移及侵袭基因的表达量。结果:不同条件处理后8h、16h、24h,顺铂组、Par-4组、顺铂+Par-4组的细胞增殖活力值均显著低于对照组,顺铂+Par-4组的细胞增殖活力值显著低于顺铂组、Par-4组;不同条件处理后24h,顺铂组、Par-4组、顺铂+Par-4组细胞中Bim、PDCD4、WT1、RGS4、Axin、KAI1、E-cadherin、PPARγ、PTEN的mRNA表达量均显著高于对照组,GDNF、GFRα1、TUBB3、NME1、FGF1的mRNA表达量均显著低于对照组;顺铂+Par-4组细胞中Bim、PDCD4、WT1、RGS4、Axin、KAI1、E-cadherin、PPARγ、PTEN的mRNA表达量显著高于顺铂组、Par-4组,GDNF、GFRα1、TUBB3、NME1、FGF1的mRNA表达量显著低于顺铂组、Par-4组。结论:Par-4基因过表达能够增加肾母细胞瘤对顺铂的敏感性,降低细胞增殖活力并促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和侵袭。