β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞前列腺凋亡反应蛋白-4和bcl-2基因表达的影响

目的观察β-淀粉样肽(25—35)(β-amyloidpeptide25—35,Ap25-35)诱导PC12细胞凋亡及对前列腺凋亡反应蛋白-4(prostateapoptosisresponse-4,par-4)和bel-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT—PCR检测par-4和bcl-2基因mRNA表达变化,Westernblot检测Par-4和Bcl-2蛋白表达变化。结果随Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率降低,荧光染色可见细胞核固缩、核碎裂,par-4mRNA及蛋白表达增加,bcl-2mRNA及蛋白表达降低。结论在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中Par-4和Bcl-2蛋白分子可能起重要作用。

凋亡相关因子CCAR1、Par-4在胃腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨胃腺癌组织细胞周期与细胞凋亡调控蛋白1(CCAR1)、前列腺凋亡反应基因-4(Par-4)的表达情况及临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测60例胃腺癌组织和40例癌旁正常胃黏膜中CCAR1蛋白、Par-4蛋白的表达情况,分析二者与胃腺癌临床病理参数的关系及胃腺癌组织二者表达的相关性。结果:CCAR1蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜,Par-4蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率明显低于正常胃黏膜,差异有统计学意义(P<0.05)。胃腺癌组织中CCAR1蛋白的表达与分化程度有关(P<0.05),Par-4蛋白的表达与胃腺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman相关分析显示,胃腺癌组织CCAR1蛋白和Par-4蛋白表达无明显相关性(r=-0.08,P>0.05)。结论:Par-4与CCAR1均参与了胃腺癌的发生和进展过程,但二者在胃腺癌的发生过程中可能受不同机制的调控。

前列腺凋亡反应蛋白-4在神经退行性疾病和精神疾病中的作用

前列腺凋亡反应蛋白-4（Par-4），由Sells等从前列腺癌细胞中分离出来。人类par-4基因位于染色体12q21上，蛋白质分子量约为38KDa，含442个氨基酸残基，有三个重要的功能区：羧基末端的亮氨酸拉链区（LZ），及氨基末端的核定位序列（NLS）NLS1和NLS2。

NT_4-SAC-HA_2-TAT融合基因表达载体的构建及鉴定

目的构建NT4-SAC-HA2-TAT融合肽cDNA克隆,探讨前列腺凋亡反应基因-4(Par-4)核心区凋亡肽(SAC)作为目的基因对前列腺癌的治疗作用。方法应用互为引物模板法合成两端具有NaeI和KpnI酶识别位点的SACcDNA片段。将所得SAC和已有HA2-TAT片段克隆到具有相应酶切位点的pBV220-NT4质粒,得到pBV220-NT4-SAC-HA2-TAT重组质粒。PCR扩增NT4-SAC-HA2-TATcDNA片段,并将其克隆到pGEM-T easy中,转化细菌筛选阳性克隆,酶切鉴定,序列测定分析。结果经DNA测序、限制性内切酶酶切等证实,PCR获得了编码NaeI和KpnI酶切位点的SAC cDNA片段,并将NT4、SAC、HA2-TAT亚克隆于pBV220内。结论成功构建了NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的原核表达载体pBV220-NT4-SAC-HA2-TAT。

SAC重组腺相关病毒载体的构建及其对前列腺癌CAM移植瘤的抑制作用

目的构建携带NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的重组腺相关病毒载体,并感染前列腺癌鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤,观察目的基因前列腺凋亡反应基因-4(par-4)选择性癌细胞凋亡结构域(SAC)的表达及其对CAM移植瘤的生长抑制作用。方法利用磷酸钙共沉淀法将包装质粒pAAV/Ad、腺病毒辅助质粒pFG140及重组穿梭质粒pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT共转染293细胞,制备重组腺相关病毒(rAAV),斑点杂交法检测病毒滴度。取孵育9 d龄健康鸡胚,CAM接种前列腺癌细胞系PC-3细胞,建立前列腺癌的CAM移植瘤模型,接种3 d后挑选成瘤鸡胚随机分为3组:空白对照组(PBS),空病毒组(AAV)和重组病毒组(rAAV),观察瘤体生长情况,上述处理4 d后测量比较不同组移植瘤体积,并切片染色病理检查。免疫荧光法检测移植瘤中SAC融合肽的表达。结果酶切鉴定结果证实成功构建pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT,斑点杂交法检测重组病毒滴度约为3.34×1010～3.34×1011cfu/mL。免疫荧光法证实SAC融合肽表达。移植瘤能在CAM上生长,可见瘤周围丰富毛细血管汇集,rAAV组瘤体显著缩小,病理HE染色可见瘤细胞局限及侵袭抑制。结论成功构建SAC重组腺相关病毒载体并感染前列腺癌CAM移植瘤,重组病毒表达分泌的SAC融合肽对前列腺癌CAM移植瘤具有诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭性增殖等作用。