前列腺干细胞抗原在人前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)在人前列腺癌(PCa)和正常前列腺(NP)、良性前列腺增生(BPH)组织中的表达及其与临床分期、病理分级的关系。方法采用免疫组织化学(IHC)链霉菌过氧化物酶法(SP法)检测26例人PCa石蜡包埋标本、10例BPH患者的前列腺切除标本及3例NP标本中PSCA的表达。结果PSCA在PCa组织中表达阳性率为96.2%,其中强阳性率为88.5%。NP组织阳性率为66.7%(均为弱阳性)。BPH组织阳性率为70.0%(均为弱阳性)。PCa与NP、BPH组织表达水平差异有显著性意义(P<0.01),BPH与NP组织表达水平无统计学意义(P>0.05)。PSCA在PCa组织主要表达于癌细胞,细胞间质和肌肉组织均无表达;NP及BPH组织表达则定位于前列腺上皮的基底细胞层。PSCA表达水平与PCa临床分期、病理分级均无相关性(P>0.05)。结论PSCA是一个新的细胞表面抗原,可能在PCa的诊断、免疫治疗等方面具有广阔的应用前景。

前列腺干细胞抗原(PSCA)的表达及其特异结合肽的筛选

通过反转录 PCR从人前列腺癌细胞中克隆了前列腺干细胞抗原 (PSCA)基因 ,在大肠杆菌中利用pQE30载体对截断型PSCA基因进行了可溶性表达。蛋白纯化后 ,利用噬菌体随机展示 12肽库筛选了PSCA蛋白的特异结合肽 ,通过与EGFP蛋白的耦联表达验证了结合肽的特异性。此特异结合肽的获得 。

小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测

目的 RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原(mPSCA)基因,构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA,诱导mPSCA蛋白表达并纯化,并检测mPSCA蛋白的抗原活性。方法利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因,测序正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,Western blot检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因;酶切和测序结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应;ELISA检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性。结论成功扩增出小鼠全长PSCA基因,成功构建了mPSCA基因的原核表达载体,获得了纯化的mPSCA蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。

前列腺干细胞抗原基因和磷脂酶CE1基因多态性与老年幽门螺旋杆菌感染胃溃疡的易感性及对临床预后的影响

目的探讨前列腺干细胞抗原基因(PSCA)和磷脂酶(PL)CE1基因多态性与老年幽门螺旋杆菌(Hp)感染胃溃疡的易感性及对临床预后的影响。方法采用病例-对照研究设计,选取130例胃溃疡并且Hp检查为阳性的老年患者作为病例组,另外按性别和年龄匹配的胃溃疡并且Hp检查为阴性的老年患者作为对照组。所有患者治疗前抽取外周静脉血并提取DNA,设计PSCA(rs2294008)和PLCE1(rs11599672)聚合酶链反应(PCR)引物进行PCR扩增,扩增产物采用DNA测序分析PSCA和PLCE1基因类型,采用Logistic回归计算校正相对危险度(OR)和95%置信区间(95%CI)评价PSCA和PLCE1基因多态性与老年Hp感染胃溃疡的易感性。结果 1两组年龄、性别、病程、病变部位差异均无统计学意义(P>0.05);2与rs2294008基因型CC比较,基因型为CT、TT和CT/TT的患者Hp感染危险性降低(P<0.01);3与PLCE1 rs11599672基因型AA比较,基因型为AC、CC和AC/CC的患者Hp感染危险性降低(P<0.05);4不同PSCA多态位点rs2294008和LCEl多态位点rs11599672患者的Hp根除率和溃疡愈合率差异具有统计意义(P<0.01)。结论 PSCA rs2294008基因型CC和PLCE1 rs11599672基因型AA可增加Hp感染胃溃疡易感性,并且显著降低临床预后。

前列腺癌患者癌组织前列腺干细胞抗原、血清前列腺特异抗原检测

目的:探讨前列腺癌(PCa)组织中前列腺干细胞抗原(PSCA)的表达及与血清前列腺特异抗原(PSA)的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测36例PCa组织、20例前列腺高分级上皮样内瘤样病变(HG-PIN)及20例良性前列腺增生(BPH)组织中PSCA的表达,术前ELISA法检测血清PSA水平。结果:BPH组织中无PSCA表达,HG-PIN、PCa组织中PSCA阳性率分别为70.0%(14/20)、80.6%(29/36),高于BPH组织(P<0.05)。高分化、中分化、低分化PCa组织中PSCA的阳性率分别为6/11、14/16、9/9,依次增高(P<0.05)。PSCA阳性率与PCa患者血清PSA水平无相关性(r=0.215,P>0.05)。结论:PSCA有可能是一种新的PCa肿瘤标志物。

人胰腺癌中前列腺干细胞抗原及紧密连接蛋白-4的表达

目的检测前列腺干细胞抗原(PSCA)和紧密连接蛋白-4(Claudin-4)在胰腺癌中的表达情况,探讨PSCA和Claudin-4在胰腺癌发病中的作用。方法构建包含78例胰腺癌、12例慢性胰腺炎、10例正常胰腺组织的100点阵的组织芯片,免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测该芯片中PSCA和Claudin-4的表达,分析其与胰腺癌临床病理因素的关系。结果78例胰腺癌患者中,PSCA和Claudin-4阳性表达率分别为79.5%和88.5%,与正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织比较差异具有显著性(均P<0.01);PSCA和Claudin-4表达与患者年龄、性别及肿瘤分化程度、TNM分期无相关性。结论PSCA和Claudin-4阳性表达与胰腺癌相关,可能与胰腺癌的发生发展有着密切关系,但与胰腺癌的临床病理特型无关。

前列腺干细胞抗原和PTEN蛋白在前列腺癌组织中的表达及其相关性

前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen，PSCA）是一种前列腺特异性的细胞表面抗原，而第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）是一种具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因。为了探讨PSCA和PTEN在BPH和PCa组织中的表达相关性以及与PCa临床分期及病理分级的关系，

抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体治疗鼠前列腺癌移植瘤

目的 探索鼠源性抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体 (Anti PSCAmAb)对裸鼠实体性前列腺癌移植瘤的治疗效果。方法 (1 )BALB/c裸小鼠皮下注射激素非依赖性前列腺癌细胞株PC 3细胞 ,细胞数为 2× 1 0 6/只 ,建立前列腺癌实体性移植瘤的动物模型。 (2 )选择肿瘤体积大小相近的1 0只荷瘤鼠 ,随机分成治疗组 (N1 =5 )和对照组 (N2 =5 )。治疗组荷瘤鼠腹腔注射Anti PSCAmAb2 0 0 μg ,3天一次 ,连续三次 ;对照组使用等量PBS。 (3)观察 5周 ,记录实验鼠存活情况 ,检测血清前列腺特异抗原 (PSA) ,处死存活的裸鼠 ,测量残存肿瘤的重量、体积并计算肿瘤体积抑制率。取肿瘤组织进行光镜及透射电镜检查。结果 治疗组和对照组的裸鼠均存活 ,血清PSA平均值分别为 :(3 2 8± 0 5 5 )ng/ml和 (7 2 6± 0 4 3)ng/ml;平均瘤重分别为 (0 95± 0 1 7) g和 (3 0 8± 0 1 8)g ;肿瘤体积分别为 (1 6 4 5 9± 1 4 0 8)mm3 和 (5 4 8 4 9± 1 9 79)mm3 ,P <0 0 5 ,治疗组与对照组间均有显著性差异。治疗组肿瘤体积抑制率为 6 9 98%。光镜显示治疗组肿瘤组织内出现大片组织坏死性改变 ,并可见大量炎症细胞浸润 ,透射电镜显示肿瘤细胞的凋亡现象。结论 Anti

前列腺干细胞抗原在前列腺组织的表达及意义

目的演探讨前列腺干细胞抗原(prostatestemcellantigen,PSCA)在前列腺组织中的表达及其意义。眼方法演应用核酸分子原位杂交穴ISH雪技术,对PSCAmRNA在26例前列腺癌、20例良性前列腺增生(BPH)和9例正常前列腺(NP)标本中的表达水平进行检测及定位。眼结果演PSCAmRNA在NP、BPH及前列腺癌组织表达阳性率分别为66.7%、70.0%及84.6%,强阳性率分别为0、10.0%及57.7%。NP与BPH组织表达水平无显著差异(P>0.05),其表达定位于前列腺上皮的基底细胞层;PSCAmRNA在前列腺癌组织主要表达于癌细胞,细胞间质和肌肉组织均无表达。前列腺癌与NP、BPH组织表达水平均有显著差异(P<0.01)。PSCAmRNA表达水平与前列腺癌临床分期、病理分级均无相关性(P>0.05)。眼结论演PSCA高表达是前列腺癌的共同特征;PSCA在前列腺癌早期诊断与免疫靶向治疗方面有良好的开发应用前景。

抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的:制备抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体(mAb)。方法:采用杂交瘤技术,获得了10余株针对前列腺干细胞抗原(PSCA)的鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的6株进行了相关鉴定。结果:6株mAb的腹水效价均达到1:512000,将其中的两株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)mAb1、mAb26为IgG2b/k型,mAb6、mAb11、mAb37为IgG1/k型,mAb46为IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的mAb与PSCA可发生特异反应。结论:制备了抗前列腺干细胞抗原鼠mAb,为PSCA生物学功能的研究打下基础。

前列腺干细胞抗原在前列腺癌中的表达及其与雄激素受体、雌激素受体联合检测的意义

目的探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)在前列腺癌(PCa)和良性前列腺增生(BPH)中的表达,及其与雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)联合检测的临床意义。方法应用免疫组化方法检测PSCA、AR和ER在50例PCa和30例BPH标本中的表达。结果 PSCA在PCa中高表达,在BPH中少量表达或不表达,PSCA表达的变化与PCa的Gleason评分具有明显相关性。AR在PCa中的表达与其分化程度无明显相关性,与PSCA无明显相关性。ER在BPH中表达阳性率为100%,且普遍强阳性,在PCa中表达的阳性率为12%,均与PSCA的表达呈负相关。结论 PSCA在前列腺细胞增殖、肿瘤形成的演进过程中发挥重要作用,联合检测PSCA和ER有助于PCa和BPH的诊断和治疗。

前列腺干细胞抗原特异性分子探针的构建及其在体MR成像的实验研究

目的应用纳米金磁微粒标记抗人前列腺干细胞抗原(PSCA)单抗7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag,检测其与前列腺癌细胞结合的特异性,并探讨其用于前列腺癌体外及体内MR成像的可行性。方法应用非共价键耦联方法将纳米金磁微粒标记7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag,检测其与前列腺癌细胞结合的特异性;应用3.0T磁共振扫描仪,观察不同浓度金磁微粒MR成像情况,探讨MRI可分辨的最低浓度;培养人前列腺癌细胞PC-3和肝癌细胞SMMC-7721,将这两种细胞分别与7F5@Gold Mag、无关抗体@Gold Mag交叉配对,对各组细胞行T2 WI并分别测量其信号强度。建立PC-3和SMMC-7721荷瘤裸鼠模型,对两组荷瘤裸鼠经尾静脉注射7F5@Gold Mag和无关抗体@Gold Mag,分别在注射前、注射后6、12和24 h行MR扫描,观察其对肿瘤T2 WI信号的影响,分别测量其信号强度,探讨其用于MR体内成像的可行性,分析比较其信号强度的差异。结果成功构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag;流式细胞术检测其与PC-3细胞结合率为92.11%;激光共聚焦显微镜及透射电镜观察见PC-3细胞与7F5@Gold Mag有特异性结合。纳米金磁微粒稀释至1∶640,与1%琼脂糖凝胶相比,T2 WI信号强度差异有统计学意义;7F5@Gold Mag可显著特异性降低PC-3细胞T2 WI信号。PC-3荷瘤裸鼠注射7F5@Gold Mag 6、12和24 h后肿瘤组织T2 WI信号强度较平扫显著降低(F=43.675,P<0.05)。而SMMC-7721荷瘤裸鼠在平扫和注射对比剂后6、12和24 h肿瘤信号强度差异无统计学意义。结论 PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag具有良好的理化性质和免疫活性,可特异性降低PC-3细胞的T2 WI信号,对活体前列腺癌组织具有靶向性的增强效果。

前列腺癌组织中前列腺干细胞抗原的表达及其意义

目的 :探讨前列腺癌 (PCa)组织中前列腺干细胞抗原 (prostatestemcellantigen ,PSCA)的表达及其意义。方法 :应用核酸分子原位杂交 (ISH)技术 ,对 2 6例PCa和 9例正常前列腺 (NP)组织中PSCAmRNA进行检测和定位。结果 :PSCAmRNA在PCa组织表达阳性率为 84 .6 % ,其中强阳性率为 5 7.7% ;NP组织阳性率为6 6 .7% (均为弱阳性 )。PCa与NP组织表达水平差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。PSCAmRNA在PCa组织主要表达于癌细胞 ,细胞间质和肌肉组织均无表达 ;NP组织表达则定位于前列腺上皮的基底细胞层。PSCAmR NA表达水平与PCa临床分期、病理分级均无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :PSCA在探索PCa起源。

负载前列腺干细胞抗原的树突状细胞疫苗制备

目的研究在体外负载前列腺干细胞抗原(PSCA)制备树突状细胞(DC)疫苗的方法。方法应用PSCA融合蛋白冲击致敏由外周血单个核细胞分离培养得到的人DC,采用流式细胞仪检测其活化前、后的表型变化,混合淋巴细胞反应检测其在体外刺激淋巴细胞增殖的能力。结果DC-PSCA组白细胞介素(IL)-12(p40)和IL-1β浓度分别为(183.0±5.0)和(1183.0±30.9)ng/L,显著高于DC-TRX组[(162.0±2.5)和(971.0±10.4)ng/L,P值均<0.01]和DC组[(30.0±2.6)和(204.0±6.1)ng/L,P值均<0.01]。不同抗原冲击活化后,DC-PSCA组人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD80、CD86、CD40的荧光强度(除去同型对照抗体荧光强度后的数值)分别为101.7±9.8、334.2±18.3、371.2±22.5和102.3±8.2,显著高于DC-TRX组(88.4±6.3、304.3±19.4、315.5±24.7和94.6±7.9,P值均<0.05)和DC组(68.8±3.0、283.2±23.1、265.4±18.8和77.2±4.6,P值均<0.05)。经肿瘤坏死因子-α活化后的DC-PSCA组放射性活度值(cpm值)显著高于其他两组(P值均<0.05)。结论PSCA融合蛋白体外冲击DC是一种制备DC疫苗的有效方法。

抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的前列腺癌免疫病理研究

目的观察前列腺干细胞抗原(PSCA)在前列腺癌中的表达情况,探讨其与前列腺癌病理组织学分级及临床分期的关系。方法采用EnVisionTM两步免疫组织化学染色法,以抗人PSCA单克隆抗体检测正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌及膀胱、肾脏等组织中PSCA的表达。结果PSCA在5例正常前列腺组织、10例前列腺增生组织、38例前列腺癌组织中有不同程度的阳性染色;膀胱、肾脏等正常组织的染色为阴性。95%(38/40例)的前列腺癌PSCA染色呈阳性、强阳性染色,50%～100%的肿瘤细胞着色,与前列腺增生及正常前列腺组织相比,其染色强度及范围的差异有显著性(P<0.01),但与前列腺癌的病理分级和临床分期不相关。结论前列腺干细胞抗原具有前列腺组织特异性,可用于前列腺癌免疫病理、放射免疫显像诊断及免疫治疗的研究。

表达人前列腺干细胞抗原小鼠前列腺癌模型的建立

目的探讨并建立可供药物评价或生物学功能研究的表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型。方法克隆人PSCA基因,构建pcDNA-PSCA质粒,稳定转染RM-1细胞,用RT-PCR和流式检测的方法筛选稳定表达人PSCA抗原的RM-PSCA细胞株;再将RM-PSCA细胞接种C57BL/6小鼠,观察其致瘤性,并寻找能够稳定致瘤的细胞数量;进而观测RM-PSCA所致肿瘤的生长情况及小鼠存活状况。结果筛选到了表达人PSCA抗原的RM-PSCA细胞,且1×105个肿瘤细胞能够保证10只实验小鼠全部成瘤;所致肿瘤生长迅速,接种后小鼠的平均存活时间为37 d。结论该研究成功的建立了稳定表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型。

前列腺干细胞抗原在胰腺癌神经浸润转移中作用的研究

目的探讨前列腺干细胞抗原（PSCA）在人胰腺癌神经浸润中的作用。方法80例胰腺癌手术标本切片HE染色，观察记数小血管、小淋巴管、神经纤维浸润数。用鼠抗人PSCA单抗行免疫组化二步法染色，观察肿瘤细胞的阳性情况。结果肿瘤细胞神经浸润阳性与小血管、小淋巴管的浸润呈正相关（r=0．978，r=0．548，P〈0．01或P〈0．05）；肿瘤细胞PSCA表达阳性（53例）与神经浸润阳性（66例）呈正相关（r=0．746，P〈0．01）；肿瘤的恶性程度与PSCA表达呈正相关；PSCA表达与小血管、小淋巴管浸润无关。结论PSCA可能是胰腺癌的特征性分子之一。它可引导胰腺癌细胞向神经纤维趋化和黏附，即起“导航”和“停泊”作用。

多拷贝异种化前列腺干细胞抗原融合基因片段的构建及真核表达

目的:构建一系列含有人前列腺干细胞抗原(PSCA)主要T细胞表位的多拷贝异种化融合基因片段,并分别在人胚肾293T细胞中表达。方法:通过重叠延伸PCR法合成单拷贝异种化PSCA基因片段PSCA1,随即应用同尾酶法将该片段串联形成2、3、4拷贝异种化PSCA基因片段PSCA2、PSCA3和PSCA4,并将上述4种基因片段分别插入真核表达载体pCI-Fc-GPI中,构建最终目的片段1～4拷贝异种化PSCA-Fc-GPI(即PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI),随即分别将重组质粒pCI-PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI体外转染293T细胞,利用间接免疫荧光和流式细胞仪检测其表达情况。结果:测序证实PSCA1片段与设计一致,酶切鉴定证明目的基因片段PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI构建成功;间接免疫荧光和流式细胞仪的检测结果显示,在293T细胞中1～4拷贝异种化PSCA融合基因片段均获得较好表达。结论:构建了目的基因片段PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI,为以PSCA为靶抗原的抗前列腺癌DNA疫苗的构建及功能研究奠定了重要基础。

全雄激素阻断治疗抑制人前列腺癌前列腺干细胞抗原mRNA的表达

目的观察全雄激素阻断（CAA）治疗前后前列腺干细胞抗原（PSCA）mRNA 表达水平的变化,并进一步评估 PSCA 在人前列腺癌的临床预后价值。方法对42例男性患者的前列腺活检组织或经尿道前列腺切除组织（包括去势前局限性前列腺癌组织和前列腺癌根治术前接受比卡鲁胺和醋酸戈舍瑞林去势治疗3个月后的癌组织）进行原位杂交。PSCA mRNA 的肿瘤细胞质染色结果由两位病理学专家独立评估,t 检验分析 CAA 前后 PSCA mRNA 表达水平的差异。前列腺癌根治术后进行36~40个月的随访,旨在评估 PSCA mRNA 表达水平与癌症局部复发或转移的相关性。结果原位杂交标记 PSCA mRNA 阳性的细胞由 CAA 前的67.3%（0~89%）±9.4%下降到 CAA 后33.8%（0~92%）±7.7%（P 〈0.001）。CAA 前95.2%（40/42）的患者 PSCA mRNA 表达阳性,而去势后阳性率降到67.5%（27/40）,且随访未发现有局部复发或远处转移。PSCA mRNA 阳性表达的减少取决于原始肿瘤的 Gleason 评分,Gleason≤6：19.3%±4.7%；Gleason=7：38.8%±7.2%；Gleason≥8：73.4%±13.8%（P 〈0.05）。其余13例,CAA 后 PSCA mRNA 阳性表达水平增加,且随访发现3例有局限复发,4例有远处转移。结论前列腺癌 CAA 可抑制 PSCA mRNA 的表达；去势治疗后 PSCA mRNA 表达的增加可成为肿瘤复发或远处转移的一个不利预测指标。

以前列腺干细胞抗原为靶点的前列腺癌免疫治疗研究进展

前列腺干细胞抗原(PSCA)为细胞膜表面抗原,在正常前列腺组织中低表达,在雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌组织中高表达,有较高的组织特异性,是前列腺癌治疗的理想靶标,近年来以PSCA为靶点的前列腺癌治疗性疫苗的研究已成为热点。我们简要综述以PSCA为靶点治疗前列腺癌的研究进展。