丹参酮ⅡA对前列腺成纤维细胞增殖及胶原表达的影响

目的研究丹参酮ⅡA对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的前列腺成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,初步探讨丹参酮ⅡA是否具有治疗前列腺组织纤维化的潜力。方法通过消化法原代培养和差速贴壁法纯化获得PrF,分别用5 ng/mL的TGF-β1和不同质量浓度的丹参酮ⅡA(25、2.5、0.25mg/L)对其进行处理,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达。结果 5 ng/mL TGF-β1可明显诱导PrF的增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达(P<0.01)。25、2.5、0.25 mg/L质量浓度的丹参酮ⅡA均能显著抑制TGFβ1诱导的细胞异常增殖(P<0.05或P<0.01),且呈良好的量效关系。25 mg/L的丹参酮ⅡA对Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达有抑制作用(P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可抑制TGF-β1诱导的PrF异常增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达,具有抗前列腺纤维化的潜力。

前列消汤干预TGF-β1/Smad4、Smad 7信号通路调控实验性自身免疫性前列腺炎小鼠前列腺成纤维细胞增殖与凋亡的研究

目的:观察中药方前列消汤干预TGF-β1/Smad4、Smad 7信号转导通路对实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)小鼠前列腺成纤维细胞(PrF)增殖与凋亡的调控作用。方法:采用C57BL/6小鼠制备前列消汤含药血清,根据细胞毒性实验结果,以5%、10%、20%的含药血清分别作为低、中、高剂量组进行干预实验。采用"免疫诱导+中医病因造模法"建立湿热证EAP小鼠模型,无菌条件下取出前列腺组织,分离培养PrF,采用差速贴壁法纯化PrF,免疫荧光法检测PrF纯度,纯度达90%以上即以5 ng/ml TGF-β1浓度的培养液刺激进行建模。取建模后对数生长期的PrF随机分为空白组(无血清培养液),模型组,阳性对照组(含TGF-β1浓度5 ng/ml的培养液),前列消汤低、中、高剂量组,每组6个复孔;干预培养24 h后检测各组PrF增殖情况,采用Western印迹检测TGF-β1的表达水平和Smad4、Smad7、p-Smad4、p-Smad7的表达水平,qPCR检测TGF-β1、Smad4、Smad7 mRNA的表达,流式细胞术检测PrF细胞凋亡情况。结果:经TGF-β1诱导后,与模型组比较,阳性对照组PrF细胞增殖明显(P<0.05),前列消汤低、中剂量组PrF细胞增殖受抑制(P<0.05),前列消汤高剂量组PrF细胞增殖受明显抑制(P<0.01);与阳性对照组比较,前列消汤各剂量组PrF细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),且呈明显的量效关系。与模型组比较,阳性对照组Smad4、p-Samd7和TGF-β1蛋白表达显著增加(P<0.05);经前列消汤含药血清干预后,与阳性对照组比较,前列消汤含药血清能显著下调PrF细胞内p-Smad4,TGF-β1蛋白的表达(P<0.01),而增加p-Samd7的表达水平(P<0.01)。qPCR结果显示,与模型组相比,前列消汤高剂量组Smad4基因表达有显著差异(P<0.05),前列消汤低、中、高剂量组Smad7基因表达有显著差异(P<0.05);前列消汤低、中、高剂量组TGF-β1基因表达水平显著上调(P<0.01);与阳性对照组相比,前列消汤高剂量组Smad4基因表达有显著差异(P<0.05),模型组、前列消汤低、中、高剂量组Smad7基因表达有显著差异(P<0.01),前列消汤低、中、高剂量组TGF-β1基因表达水平显著下降(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组PrF细胞凋亡率无明显差异(P>0.05),前列消汤各剂量组凋亡率均显著提高(P<0.05),且呈明显的量效关系。结论:经TGF-β1诱导可刺激PrF细胞增殖,上调TGF-β1、p-Smad4的表达,下调p-Smad7的表达。前列消汤可以抑制PrF增殖,且呈明显的量效关系,其机制可能与其降低TGF-β1和p-Smad4的表达、提高p-Smad7的表达从而阻断TGF-β1通过Smad4途径诱导PrF细胞增殖相关。

前列散瘀胶囊对实验大鼠前列腺增生的影响研究

目的:探讨前列散瘀胶囊对实验大鼠前列腺增生的影响。方法:将48只雄性大鼠随机分为正常对照组、损伤模型组、癃闭舒组和前列散瘀胶囊低、中、高3个剂量组。除正常对照组外,其余各组采用丙酸睾丸酮皮下注射引起大鼠前列腺增生模型。连续给药30天,称取动物体重,采用心脏采血,将动物处死,摘除前列腺各叶,称取前列腺湿重。计算大鼠前列腺指数,每例标本进行常规HE染色,检测大鼠血清bFGF含量。结果:大鼠体重、前列腺重量及前列腺指数比较:损伤模型组大鼠体重较正常对照组明显轻(P<0.05),而前列腺重量明显增加(P<0.01),前列腺指数明显升高(P<0.01);前列散瘀胶囊高剂量组与损伤模型组相比,前列腺重量明显减轻(P<0.01),前列腺指数明显下降(P<0.01)。bFGF浓度比较:损伤模型组大鼠血清bFGF含量与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);与损伤模型组相比,前列散瘀胶囊高、中剂量组和癃闭舒组大鼠血清bFGF浓度降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:前列散瘀胶囊能降低实验大鼠前列腺湿重、前列腺指数及血清bFGF浓度。