微孔板化学发光酶免疫分析法分析人血清中游离前列腺特异性抗原

建立了一种定量分析人血清中游离前列腺特异性抗原（f-PSA）的高灵敏度微孑L板化学发光酶免疫分析方法，以碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）为标记酶，4-甲氧基-4-（3″-磷酰氧基苯）-螺旋-（1，2-二氧杂环丁烷-3，2′-金刚烷）（4-methoxy-4-（3″-phosphate-phenyl）-spiro-（1，2-dioxetane-3，2′-adamantane），AMPPD）-ALP高灵敏的化学发光反应为检测体系，通过检测发光强度对人血清中f-PSA进行定量。对几种物理化学参数如温育时间、免疫反应步骤以及检测时间等进行了优化，采用了一步双抗体夹心法，37％恒温静置温育2h，洗涤后加入50μL AMPPD，30～80min内检测。该方法线性范围为0．15～20μg/L，相关系数大于0．998；检出限可达0．01μd/L，批内和批间相对标准偏差（C．V．）均小于7％；回收率在88％～108％之间。对人体血清中共存的6种常见肿瘤标志物CA50、CA125、CA15-3、CA242、CEA和AFP的偶联反应进行考察，特异性良好。为了验证该方法用于商业试剂盒的可行性，在4℃和37％条件下分别进行了3d，5d，7d的稳定性考察，其线性相关系数仍均大于0．998，相对标准偏差小于6％。对98例实际血样进行测定，并与进口试剂盒（Monobind．USA）作临床比对，相关性良好。这些结果均表明，该分析体系稳定，可靠，可以用于商业化试剂盒的开发，在临床分析人血清中f-PsA的辅助诊断前列腺癌方面具有很高的应用价值。

化学发光免疫分析法检测血清中前列腺特异抗原复合物

采用杂交瘤技术构建抗前列腺特异抗原-α1-抗胰凝乳蛋白酶(Prostate specific antigen-α1-antichymotrypsin complex,PSA-ACT)单克隆抗体(单抗)细胞株,共获得8株稳定分泌PSA-ACT单抗的细胞株,纯化后进行免疫特性鉴定并做单抗配对。选择其中一对单抗,采用辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺(lumino)-H_2O_2化学发光体系,建立了测定人血清中PSA-ACT浓度的化学发光酶免疫分析方法(CLEIA)。对包被缓冲液、包被抗体浓度、酶标抗体稀释度、温育时间、发光反应时间和免疫反应步骤等实验参数进行了优化。在最佳实验条件下,PSA-ACT浓度在5~40 ng/m L范围内线性关系良好(R^2=0.9943),检出限为0.53 ng/m L,批内相对标准偏差(RSD)为4.6%~6.6%,批间RSD为5.7%~8.0%,回收率为95.4%~104.2%,与游离前列腺特异性抗原F-PSA的交叉反应率为0.6%。本方法简单、稳定、灵敏、快速,为开发检测PSA-ACT的CLEIA试剂盒奠定了基础。

化学发光免疫分析技术测定游离及总前列腺特异抗原比值的临床应用

采用美国DPC公司的f -PSA、t -PSA试剂和IMMULITE全自动化学发光免疫分析仪检测 6 5例健康人、77例前列腺增生和 42例前列腺癌患者的f -PSA和t -PSA ,并求得f -PSA/t -PSA比值。结果显示 :单独以t -PSA >2 .85 μg/L或f -PSA >0 .6 3μg/L作为对PCa的诊断指标 ,其特异性和阳性预测值分别为 5 3 .5 %、5 0 .9%和 5 5 .8%、5 1.0 % ,而以DPC公司推荐的f -PSA/t -PSA比值 <0 .11作为对PCa的诊断指标 ,其特异性和阳性预测值分别达 88.7%、81.3 % ,显著高于t -PSA和f -PSA(P <0 .0 1)。说明f-PSA/t -PSA比值结合临床情况和影像学检查 ,可大大提高PSA对PCa诊断的特异性 。

前列腺特异抗原化学发光免疫分析方法的建立及初步应用

建立的前列腺特异抗原(PSA)化学发光免疫分析(CLIA)使用2株抗PSAMcAb,一株McAb包被微孔板,另一株McAb与HRP连接。底物是鲁米诺/H2O2/对碘苯酚系统的双抗体夹心一步法,测定范围0.5～64ng/mL,最低检出值为0.13ng/mL,平均回收率为100.6%,批内和批间CV分别小于8.3%和11.5%,正常参考值小于3.5ng/mL。1000份血清临床考核,与参比试剂盒临床符合率一致,具有同等的临床诊断价值。

前列腺特异抗原免疫放射分析反应的动力学研究

本文着重对前列腺特异抗原（ＰＳＡ）的免疫放射分析的反应时间进行研究。实验采用两步，一为固定第一步时间，改变第二步反应时间，另一为固定第二步时间，改变第一步反应时间，观察反应的变化。结果表明，第一步反应０．５小时以后，标准和质控的ｃｐｍ已相对恒定，０．５小时的最大结合率为５８．７％，与６小时的最大结合率５５．８％相比，差异不显著。第二步反应，从１小时到６小时，结合率随时间的增加而升高。１小时的结合率为４６．３％，与６小时的结合率７２．２％相比，差异显著。此结果将有助于对ＰＳＡ的临床检测提供一个最适宜的反应时间。

化学发光免疫法检测前列腺特异性抗原的临床应用

目的探讨化学发光免疫法检测前列腺特异抗原在医学中的应用情况。方法把需检测对象分为3个组,分别为良性前列腺增生组、前列腺癌患组和正常对照组;采用化学发光免疫法分别检测三组的t-PSA的含量。结果良性前列腺增生组与前列腺癌组中的t-PSA含量要明显高于对照组。三个组之间比较存在着显著的差异。而前列腺癌患者的t-PSA值显著大于良性前列腺增生组(P<0.01)。结论采用化学发光法检测t-PSA达到了理性的效果,为前列腺癌患者的临床诊断提供了一定的依据。

化学发光免疫法检测前列腺特异性抗原的临床应用

目的探讨前列腺特异抗原(t-PSA)在前列腺癌诊断中的临床价值。方法采用化学发光免疫法(以下简称化学发光法)检测良性前列腺增生(BPH)患者1 220例(BPH组)、前列腺癌患者80例(前列腺癌组),健康男性300例(对照组)血t-PSA含量。结果 BPH组和前列腺癌组t-PSA含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);前列腺癌组明显高于BPH组(P<0.01)。结论化学发光法检测t-PSA效果较理想,能够为临床医生提供准确的临床数据,值得临床进一步推广应用。

化学发光免疫法在前列腺特异性抗原检测中应用分析

目的探讨化学发光免疫法检测前列腺特异性抗原(PSA)的临床应用效果。方法选取我院于2014年6月—2015年6月期间收治的120例良性前列腺增生患者为研究A组,60例前列腺癌患者为研究B组,120例健康男性体检者为对照组。采用化学发光免疫法检测3组患者的游离前列腺特异性抗原(fPSA)及总前列腺特异性抗原(t-PSA)含量,并进行比较分析。结果研究A组fPSA、t-PSA含量低于研究B组,而高于对照组,f/t比值高于研究B组,低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001);研究B组fPSA、t-PSA含量高于研究A组和对照组,f/t比值低于研究A组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.001);f/t比值对前列腺癌阳性诊断率明显高于fPSA、t-PSA,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论应用化学发光免疫法检测PSA效果较好,可为临床诊断前列腺癌提供依据。

雅培i2000全自动免疫发光仪与艾克美免疫荧光分析仪检测总前列腺特异性抗原的比对研究

目的探讨雅培i2000全自动免疫发光仪用化学发光免疫分析法,与杭州中翰盛泰科技有限公司艾克美免疫荧光分析仪用免疫荧光干化学层析法检测总前列腺特异性抗原(TPSA)的可比对性。方法对免疫荧光干化学层析法定量检测TPSA进行了性能评价,内容包括批内重复性、线性、准确度。结果该法重复测定高、低值样本,CV<10%;线性回归方程Y=0.9748X+0.048;与化学发光免疫法的相关性分析,r=0.984。结论免疫荧光干化学层析法定量检测系统与雅培i2000全自动大型化学发光仪具有良好的重复性、线性和方法学的相关性,非常适合临床实验室门诊急诊及小批量样本时使用。

人前列腺特异抗原（hPSA）的纯化及放射免疫分析的建立

本文介绍前列腺特异抗原的纯化，免疫动物得到特异性抗ＰＳＡ抗体，并建成放射免疫分析。方法简便快速，灵敏度较高，准确性及重复性良好。与国外相应试剂盒比较有良好的相关性。

放射免疫法检测前列腺特异性抗原及其临床意义

采用放射免疫法检测１００ 例健康男性、４１ 例前列腺癌和５２ 例前列腺良性疾病患者的血清前列腺特异抗原（ＰＳＡ）。结果： 健康男性血清ＰＳＡ 为２－０５±０－６ ｎｇ／ｍｌ， 与国外报道的正常值相近。前列腺癌组与前列腺良性疾病组测值有显著性差别（ Ｐ＜０－０１）。此法操作简便、灵敏度高、特异性强， 具有临床应用价值。

前列腺特异抗原和高分子量角蛋白单克隆抗体免疫染色法的改进及其应用价值

对前列腺特异抗原和高分子量角蛋白单克隆抗体染色法进行改进 :1在同一切片的一侧贴附可靠的阳性对照组织 ;2应用微波处理 ,尽可能保存和修复抗原 ;3在显微镜下严格控制显色 ,务必达到背景清晰。此法用于前列腺的癌前病变和前列腺癌疑难病例的诊断和鉴别诊断 ,取得了理想的结果 。

微粒子酶免疫法检测前列腺特异抗原的评价

目的:对微粒子酶免疫法 (MEIA )检测血清总前列腺特异抗原 (T- PSA )、游离前列腺特异抗原 (F-PSA)进行方法学评价。 方法:MEIA测定血清总 PSA(T- PSA)、游离 PSA (F- PSA )的精密度、灵敏度、回收率、校正曲线的稳定性及干扰因素进行分析。 结果 :MEIA法检测 T- PSA、F- PSA均具有较高的精密度 (总 CV分别为4 .4 6 %～ 4 .83%和 3.96 %～ 4 .70 % ) ,灵敏度分别为 T- PSA0 .0 5μg/ L ,F- PSA0 .0 3μg/ L ,回收率分别为 91.7%～10 2 .8% ,92 .6 %～ 10 2 .1% ,校正曲线至少可稳定 4周 ,黄疸、脂血、溶血现象对测定结果基本无影响。结论:MEIA法操作简单 ,自动化程度高 ,检测速度快 ,有较高的精密度、灵敏度和特异性 ,结果准确可靠 ,适合各实验室的应用 。

游离前列腺特异抗原免疫放射分析方法的建立

采用双抗体夹心法,利用两株前列腺特异抗原(Prostate Specific Antigen,PSA)的单克隆抗体(抗游离前列腺特异抗原F-PSA和抗血清中总前列腺特异抗原T-PSA),建立了定量测定血清中F-PSA含量的免疫放射分析方法。该方法的最小检测限为0.04μg/L,批内变异系数≤4.0%,批间变异系数≤10.5%,平均回收率为102.7%。该法与CIS公司生产的放免试剂盒比对的相关方程为y=0.965 1x-0.001 1,相关系数r=0.996 4。本研究建立的F-PSA免疫放射分析方法灵敏度高,定量分析效果较好,适用于临床诊断。

前列腺特异抗原游离与总量比值测定对前列腺癌诊断的评价

目的 探讨前列腺特异抗原游离与总量比值 (FPSA/TPSA)的测定对前列腺癌诊断的价值 ,分析年龄、TPSA浓度和前列腺慢性炎症等因素对FPSA/TPSA的影响。方法 将 1 75例前列腺疾病患者根据术后病理结果分为 3组 ,即前列腺癌组 (A组 ,1 6例 ) ,前列腺增生症 (BPH)组 (B组 ,1 4 6例 )和BPH伴慢性炎症组 (C组 ,1 3例 )。术前用时间分辨荧光免疫分析方法测定血清FPSA及TPSA ,计算出FPSA/TPSA ,比较各组间的FPSA ,TPSA和FP SA/TPSA ,分析FPSA/TPSA与年龄及TPSA浓度的相关性。结果 ①A ,B ,C 3组的TPSA分别为 (1 0 32± 5 6 1 )ng/ml,(7 86± 4 32 )ng/ml和 (8 87± 5 0 2 )ng/ml,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,FPSA/TPSA分别为 (1 4 9± 6 8) % ,(2 2 5± 7 9) %和 (1 7 2± 5 8) % ,其中A ,B组比较差异有显著性 (P <0 0 1 ) ,与C组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;②以FPSA/TPSA =0 1 9(1 9% )为诊断阈值时 ,对前列腺癌诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比分别是 81 3% ,6 8 5 % ,2 2 1 % ,2 2和 0 2 7;③TPSA在 2 0ng/ml≤TPSA <7 0ng/ml范围内FPSA/TPSA与年龄呈一定程度的正相关 (r=0 332 1 ,P <0 0 1 ) ,在 1 5 0ng/ml≤TPSA≤ 2 0 0ng/ml范围内FPSA/TPSA与TPSA呈?

利湿祛瘀法治疗Ⅲ型前列腺炎疗效及对相关免疫学因素的影响

目的:分析利湿祛瘀法治疗Ⅲ型前列腺炎疗效及对相关免疫学因素的影响。方法:选取2013年12月—2014年12月收治的Ⅲ型前列腺炎患者150例,按照随机数字表法分为研究组和对照组,每组75例,研究组给予利湿祛瘀法治疗,对照组给予抗生素治疗,两组均治疗2个月,测定两组治疗前后的相关免疫学指标和总前列腺特异抗原(TPSA)、游离前列腺特异抗原(FPSA),应用慢性前列腺炎症状评分(NIH-CPSI)表评定临床症状评分和整体评分。结果:治疗后两组NIH-CPSI临床症状评分和整体评分显著优于治疗前,与治疗前比较差异具有统计学意义(P<0.05),且研究组优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后两组TPSA和FPSA/TPSA均优于治疗前,与治疗前比较差异具有统计学意义(P<0.05),且研究组优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗前、治疗后两组CD4+、CD8+比较均无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组CD4+/CD8+明显高于对照组(P<0.05)。结论:利湿祛瘀法治疗Ⅲ型前列腺炎能显著改善NIH-CPSI评分,降低TPSA,且对免疫功能具有稳定作用。

快速检测游离前列腺特异抗原ELISA方法的建立

目的 建立快速检测人血清中游离前列腺特异抗原(f-PSA)的ELISA方法.方法 利用抗f-PSA的单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,一株单抗2D1用于固相包被,另一株单抗2E4进行辣根过氧化物酶标记,采用二步法,建立定量测定人血清f-PSA的双抗体夹心ELISA法.对该法的敏感度、精密度、准确性、特异性进行了分析.应用该法与瑞典CanAg公司的f-PSA ELISA试剂盒同时检测了18例前列腺癌和25例前列腺增生患者血清标本的f-PSA含量,进行了两种方法检测结果的相关性分析.结果 以双抗体夹心ELISA法检测f-PSA,在f-PSA 0～20μg/L范围内线性良好;敏感度为0.025 μg/L;批内变异系数为4.5%～6.2%,批间变异系数为3.9%～7.2%;回收率为94.3%～111.1%;与α1抗糜蛋白酶结合的结合型PSA交叉率为0.7%;检测43份临床标本f-PSA含量的结果与瑞典CanAg公司f-PSA试剂盒检测结果的相关系数为0.995.结论 所建立的双抗体夹心ELISA方法是一种特异、敏感、简便实用的f-PSA快速检测方法,有助于在PSA低水平升高的重叠范围内(4～10μg/L)鉴别前列腺增生与前列腺癌.

放射免疫法检测前列腺特异抗原的初评

采用ＲＩＡ法检测１１０例健康男性，１３４例患者，其中５０例非前列腺疾病（对照组）与８４例前列腺疾病及其它癌症的血清前列腺特异抗原ＰＳＡ进行比较分析。健康男性ＰＳＡ为１．５１±０．５８ｎｇ／ｍｌ，批内变异系数ＣＶ３．４％～７．６％，批间变异系数ＣＶ８．２％～９．３％。前列腺癌组与前列腺增生（炎）组比较，差异有非常显著性（Ｐ＜０．０１），其它癌症组与对照组比较差异不显著（Ｐ＞０．０５），提示ＰＳＡ具有高度的特异性。脂血、溶血对试验的干扰作了实验观察。提示此法操作简易，特异性强，结果可靠，具有一定的临床实用价值。