鼠源性HSP70、GM-CSF双修饰前列腺癌全细胞疫苗的建立与鉴定

目的建立鼠源性HSP70、GM-CSF双修饰前列腺癌全细胞疫苗。方法通过化学合成和PCR方法分别构建小鼠Hspa1a、Csf2基因片段,TA克隆入p MD-18T载体测序验证。上述合成好的目的序列通过限制性内切酶Bam HI/Asc I酶切、T4DNA连接酶连接,分别装入慢病毒表达载体p Lenti6.3_MCS中,构建慢病毒重组载体p Lenti6.3_MCS_Hspa1a_c Myc和p Lenti6.3_MCS_Csf2_V5。载有重组载体p Lenti6.3_MCS_Hspa1a_c Myc和p Lenti6.3_MCS_Csf2_V5的慢病毒液分别对鼠前列腺癌细胞系RM-1进行稳定转染或共转染,Western blot检测蛋白表达,10 Gy放射线照射使其丧失增殖能力后冻存。结果测序验证重组慢病毒表达载体p Lenti6.3_MCS_Hspa1a_c Myc和p Lenti6.3_MCS_Csf2_V5构建成功。经293T细胞包装后分别或共转染RM-1,Western blot证实GM-CSF、s HSP70表达,GM-CSF和HSP70共表达。结论本实验成功建立了鼠HSP70、GM-CSF双修饰RM-1细胞全细胞疫苗,为以后进一步探讨全细胞抗原作用机制和全细胞免疫增强机理奠定基础。