三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响

目的 了解三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响。方法 以不同浓度的三氧化二砷作用于PC 3细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪、相差显微镜和透射电镜观察细胞增殖状况、细胞周期变化以及细胞形态学的变化。结果 各浓度的三氧化二砷均可抑制PC 3细胞的增殖 ,具有剂量和时间累积效应 (P <0 0 1 )。三氧化二砷可使PC 3细胞生长停滞于G1 期。G1 期细胞数目随三氧化二砷的作用浓度增高而增多。其中3μmol/L、6 μmol/L、1 0 μmol/L的三氧化二砷作用 4 8小时后 ,可见PC 3细胞凋亡 ,分别为 1 1 8%,1 2 7%,2 9 6 %。透射电镜检查 3μmol/L三氧化二砷作用 4 8小时后的PC 3细胞 ,可见明显的凋亡小体。结论 三氧化二砷可抑制PC 3细胞的增殖 ,并具有剂量和时间依赖性 ;抑制细胞增殖与细胞周期阻滞于G1 期有关 ;三氧化二砷并可诱导PC 3细胞凋亡。

米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌LNCaPC_(4-2)和PC3细胞的作用机制

为探讨抗孕激素药米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 、PC3的促凋亡及生长抑制作用 ,将不同浓度的米非司酮加入到体外培养的 2株前列腺癌细胞中 ,分别在培养后 3d、5d、7d用SRB染色法检测细胞生长抑制率 ;用流式细胞仪检测加药后 2 4h、48hLNCaPC4 2 和PC3细胞凋亡情况。发现 :高浓度米非司酮 ( 2 0μmol/L)对雄激素非依赖性细胞株LNCaPC4 2 、PC3于 3d、5d、7d的细胞生长抑制率分别为 5 5 .79%、66.3 7%、71 .5 4%和 87.42 %、98.1 5 %、1 0 0 %。不同浓度米非司酮即 2 .5、5、1 0、1 5、2 0 μmol/L对LNCaPC4 2 、PC3细胞株 7d时的细胞生长抑制率分别为 1 7.0 7%、3 5 .77%、5 3 .66%、63 .41 %、71 .5 4%和 48.2 5 %、63 .42 %、82 .3 7%、95 .3 1 %、1 0 0 %。前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 受 1 5 μmol/L米非司酮作用 2 4h和 48h细胞凋亡率分别为 1 9.3 0 %、3 0 .0 4% ;PC3受米非司酮 1 5 μmol/L作用 2 4h细胞凋亡率为 44.5 2 %。提示 :米非司酮对LNCaPC4 2 、PC3细胞株有时间和剂量依赖的生长抑制作用 ,其生长抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的。

敲低前列腺癌相关基因PC-1的表达抑制前列腺癌细胞C4-2雄激素非依赖性生长

目的:研究敲低癌基因D52家族成员PC-1的表达对前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的影响。方法:利用RNA干扰技术构建PC-1稳定低表达的C4-2细胞株;利用四唑盐(MTT)比色实验检测敲低PC-1基因表达对C4-2细胞雄激素非依赖生长的影响。结果:敲低PC-1表达抑制前列腺癌C4-2细胞的生长,并降低了C4-2细胞雄激素非依赖性生长的能力。结论:PC-1基因参与了前列腺癌向雄激素非依赖阶段发展和维持的过程,为进一步研究PC-1在促进前列腺癌细胞发生发展过程中的作用奠定了基础。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂对前列腺癌激素非依赖型细胞株化疗敏感性的影响

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂CCI-779对激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞株化疗敏感性的影响。方法:前列腺癌PC-3细胞培养至对数生长期,CCI-779、紫杉醇单独及联合给药,对照组中加入等体积的培养液;MTT法检测3组药物对PC-3的生长抑制作用,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变和凋亡率。结果:MTT法显示,与对照组相比,各组药物均可显著抑制PC-3细胞增殖,联合用药能显著增强这种抑制效果;FCM检测发现CCI-779和紫杉醇使PC-3细胞主要阻滞在G1-S期,而联合用药使PC-3细胞主要阻滞在G0/G1期;与对照组相比,药物组PC-3细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:mTOR抑制剂CCI-779能抑制PC-3细胞增殖,增加对前列腺癌的化疗敏感性。

非依赖雄激素的前列腺癌细胞株中雄激素受体的表达

几乎所有建立的前列腺癌细胞株均为雄激素非依赖性的,包括常用的表达雄激素受体(AR)阳性的LNCaP株和雄激素受体阴性的Du145和PC-3细胞株。作者试图找出这些细胞株不依赖雄激素的机制。作者应用基因分析方法检查LNCaP,CWR22R,PC-3,DU145和CA7T2CL细胞株中的AR启动子功能,并用Southern印记杂交。

雄激素非依赖性前列腺癌发生机制相关的信号传导通路研究进展

几乎所有经过内分泌治疗的前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者都会发展为雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-inde-pendent prostate cancer,AIPC),而目前对AIPC尚无有效的治疗手段,因此,探索AIPC可能的发生机制成为基础与临床研究的重点,本文就与AIPC相关的信号传导通路研究进展做一综述。

前列腺癌与良性前列腺增生细胞株差异核基质蛋白的鉴定

目的:鉴定人前列腺癌雄激素依赖性细胞株LNCaP、前列腺癌雄激素非依赖性细胞株PC-3与良性前列腺增生细胞株BPH-1之间差异表达的核基质蛋白(nuclear matrix proteins,NMPs)。方法:常规制备各细胞株NMPs,应用双向凝胶电泳对其进行分离;对差异表达的蛋白质点行MALDI-TOF-MS/MS质谱分析,数据库搜索并鉴定。结果:成功获得了分辨率高、重复性好的不同细胞株NMPs双向凝胶电泳图谱;初步鉴定出包含酶、调节蛋白、RNA结合蛋白及各种因子在内的12个差异表达的蛋白质,在癌细胞株中3个NMPs表达上调,9个下调。结论:人前列腺癌细胞与良性前列腺增生细胞之间NMPs表达存在明显差异;初步筛选出12个差异NMPs,其表达水平及功能与疾病的联系需进一步研究。

表皮生长因子对前列腺癌PC-3细胞分泌内皮素-1的影响

目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对激素非依赖性前列腺癌(hormone refractory prostate cancer,HRPC)PC-3细胞中内皮素-1(endothelin-1,ET-1)分泌和mRNA表达的影响。方法:EGF干预后,RT-PCR测定PC-3中ET-1mRNA的表达;放免检测ET-1蛋白分泌;不同剂量EGF干预后,放免检测ET-1分泌量的变化。结果:EGF干预后,ET-1mRNA表达上调,ET-1蛋白分泌增加,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);不同剂量EGF干预后,ET-1分泌随EGF浓度增加而增加,单因素方差分析表明,不同剂量的EGF对PC-3细胞ET-1分泌的影响不同,差异具有显著性(P<0.05)。结论:EGF可上调激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞中ET-1mRNA表达及蛋白分泌,在前列腺癌的进展中起协同作用,为HRPC的治疗提供了分子生物学基础。

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞抑制效应

目的探讨姜黄素在体外对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3生物活性的影响。方法分别采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)比色法、流式细胞分析、人工基底膜穿透法分析姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。采用Western blot法检测姜黄素在体外对核因子κB(NF-κB)、蛋白激酶(Akt)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)蛋白表达的影响。结果姜黄素干预后,PC-3细胞的增殖水平和细胞迁移率下降,而凋亡率提高(P<0.01)。姜黄素能在体外抑制PC-3细胞的NF-κB、Akt、uPA蛋白的表达(P<0.01)。结论姜黄素可在体外显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡;其机制可能通过抑制NF-κB、Akt、uPA等信号通路。

姜黄素诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞周期阻滞和凋亡研究

目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的生长抑制作用。方法10～100μmol姜黄素作用PC3细胞5～24h后,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相及细胞凋亡变化,透射电镜观察细胞超微结构变化,Western印迹法检测细胞内IκBα的表达。结果姜黄素能显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的体外生长(P<0.05),呈时间与剂量依赖性;姜黄素将PC3细胞周期阻滞于G2/M期;不同浓度姜黄素诱导PC3细胞凋亡率分别为(6.33±0.88)%、(7.53±2.32)%、(12.74±3.02)%、(18.09±2.51)%与(27.54±2.63)%(P<0.05);细胞内IκBα的表达随姜黄素剂量的增加而逐步升高(P<0.05)。结论姜黄素通过抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长。

三氧化二砷对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞Caspase-3活性及Survivin基因表达的影响

目的 探讨三氧化二砷对激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞株细胞增殖、细胞凋亡、Caspase 3活性及Survivin基因表达的影响。方法 以 1、2、3、6、10 μmol/L的三氧化二砷作用于体外培养的PC 3细胞 ,48h后对细胞增殖、细胞凋亡、Caspase 3活性 ,SurvivinmRNA表达进行检测。结果 48h后各浓度的三氧化二砷均可抑制PC 3细胞增殖 ,3、6、10 μmol/L处理组可检测到细胞凋亡 ,凋亡率分别为 11.8%、12 .7%、2 9.6% (P <0 .0 0 1)。1、2、3、6、10 μmol/L三氧化二砷组Cas pase 3活性较对照组升高10 .5、2 7.5、3 1.5、3 4.5及 42倍。对照组及 1、2、3、6、10 μmol/L组的Sur vivin基因表达强度分别为 1.11± 0 .2 4、0 .99± 0 .0 6、0 .89± 0 .12、0 .78± 0 .0 4、0 .5 1± 0 .0 6、0 .4±0 .0 5 ,差异具有统计学意义意义 (P <0 .0 1)。结论 三氧化二砷可抑制PC 3细胞的增殖 ,诱导凋亡 ,与三氧化二砷的浓度相关 ,这一作用与三氧化二砷抑制PC 3细胞中Survivin基因表达及增加Caspase 3的活性有关。

王不留行环肽B逆转前列腺癌C4-2细胞激素非依赖性生长及作用机制

目的明确王不留行逆转人前列腺癌C4-2细胞激素非依赖性生长的单体成分,探究王不留行抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的作用机制。方法采用CCK-8法检测王不留行单体成分对C4-2细胞增殖的影响;采用CCK-8法联合Annexin V-APC法检测王不留行单体成分对C4-2细胞雄激素非依赖性生长的作用;采用Western blotting检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和雄激素受体(androgen receptor,AR)蛋白表达;过表达AR后,采用荧光素酶报告基因检测AR的转录活性。结果王不留行环肽B对C4-2细胞增殖的抑制作用最为显著。在有雄激素的条件下,王不留行环肽B对C4-2细胞凋亡的诱导作用和对细胞增殖的抑制作用较弱;王不留行环肽B组p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低。过表达AR后,与对照组比较,双氢睾酮组AR蛋白表达水平和相对荧光素酶活力显著升高(P<0.05),王不留行环肽B组AR表达水平和相对荧光素酶活力显著降低(P<0.05);与双氢睾酮组比较,双氢睾酮+王不留行环肽B组AR蛋白表达水平和相对荧光素酶活力显著降低(P<0.05)。结论王不留行环肽B能明显抑制C4-2细胞增殖,具有逆转C4-2细胞激素非依赖性生长的作用,可以通过AR以及PI3K/Akt信号通路发挥抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的作用。

PARP抑制剂联合吉西他滨或多西他赛对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响

目的探讨多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)抑制剂AG014699联合吉西他滨或多西他赛对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响。方法体外培养PC3细胞,实验分PARP抑制剂AG014699组、吉西他滨组、多西他赛组、PARP抑制剂联合吉西他滨组、PARP抑制剂联合多西他赛组。采用CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术分析不同浓度的PARP抑制剂对PC3细胞凋亡及周期分布的影响。结果 PARP抑制剂AG014699能显著抑制PC3细胞的活力,促进凋亡,并具有浓度-时间依赖性(P<0.05);吉西他滨或多西他赛单药组均能抑制PC3增殖且具有浓度依赖性(P<0.05);吉西他滨或多西他赛与PARP抑制剂联合作用于PC3细胞后,相对单药组,细胞活力进一步降低(P<0.05)。结论 PARP抑制剂AG014699联合吉西他滨或多西他赛均可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞的增殖,有望成为雄激素非依赖性前列腺癌的治疗方法之一。

内皮素受体在雄激素非依赖性前列腺癌中的作用

目的 研究雄激素非依赖性前列腺癌株PC3中内皮素 (ET)受体表达及受体阻断后PC3细胞的凋亡情况。方法 RT PCR法测定PC3中ET受体的表达以及采用受体拮抗剂干预后其表达的变化 ,通过流式细胞仪和透射电镜研究干预后PC3细胞凋亡的情况。结果 PC3中ETA表达较高 ,而ETB表达非常弱。ETA受体拮抗剂干预后 ,ETA表达明显减少 ,随干预浓度的增加 ,PC3细胞凋亡的比例逐渐增加 ;而ETB受体拮抗剂干预后无明显改变。结论 PC3中ET 1的作用主要通过ETA受体介导 ,ETB受体是静止的。ETA受体阻断后 ,表达减少 ,PC3细胞出现凋亡 。

表皮生长因子对PC-3细胞内皮素-1及其受体mRNA表达的影响

目的:探讨表皮生长因子(EGF)对激素非依赖性前列腺癌(HRPC)PC-3细胞中内皮素1(ET-1)及其受体mRNA表达的影响。方法:EGF作用不同时间(0、8、16、24、32、48h)后,RT-PCR法测定PC-3细胞中ET-1及其受体ETAR mRNA、ETBR mRNA表达;EGF干预24h后,RT-PCR法测定ET-1及其受体ETAR mRNA、ETBR mRNA表达变化。结果:在PC-3细胞中可检测到ET-1及ETAR mRNA表达,但无ETBR mRNA表达;EGF可上调ET-1及ETAR mRNA表达,与对照组比较,差异具有显著性;ET-1及ETAR mRNA表达随EGF干预时间增加而增加,EGF作用不同时间对PC-3细胞ET-1、ETAR mRNA表达的影响不同,差异具有显著性(P<0.05)。结论:EGF可上调PC-3细胞中ET-1及ETAR mRNA表达,为HRPC的治疗提供了分子生物学基础。

VK3通过引起氧化应激激活NF-κB诱导PC-3M细胞发生凋亡

目的探讨维生素K3(VK3)作用下人雄激素非依赖前列腺癌PC-3M细胞发生凋亡的机制。方法PC-3M细胞按处理方法不同分对照组、VK3(60μmol/L)组、VK3(60μmol/L)+NAC(40μmol/L)组,给药事件均为12 h。应用MTT法检测PC-3M细胞生存率;PI-AnnexinV双染法检测细胞凋亡率;荧光法检测细胞内还原型谷胱甘肽含量;提取细胞核蛋白,Western-blot法检测核蛋白中NF-κB的P65和P50亚单位表达。结果与对照组相比,60μmol/L VK3作用下,PC-3M细胞生存率和细胞内还原型谷胱甘肽含量降低,凋亡率和核蛋白中P65和P50表达增加;60μmol/L VK3和40μmol/L NAC联合应用的时候,与VK3单独作用组相比,细胞细胞生存率增加,还原型谷胱甘肽含量增加,凋亡率下降,核蛋白中P65和P50表达下降。结论VK3可能主要通过引起PC-3M细胞内氧化应激导致NF-κB激活诱导细胞发生调亡。

多沙唑嗪对前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙唑嗪对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC 3在裸鼠体内生长的影响及其作用机制。方法:建立前列腺癌细胞系PC 3的裸鼠体内移植瘤模型,将30只荷瘤裸鼠随机分为5组[A组(对照组),B组(多沙唑嗪3mg/kg),C组(多沙唑嗪10mg/kg),D组(多沙唑嗪30mg/kg),E组(多沙唑嗪100mg/kg) ]。接种肿瘤细胞1周后每天1次灌胃给药,每周测量肿瘤体积2次,给药2周后处死裸鼠,取肿瘤组织做免疫组织化学Ki67及细胞凋亡DNA原位标记法(TUNEL法)检测,并用免疫印迹法研究蛋白Smad 4及IκBα在各组肿瘤组织中的表达情况。结果:多沙唑嗪给药组肿瘤体积较对照组显著缩小,肿瘤的重量较对照组亦显著减轻,而不同剂量的多沙唑嗪给药组间肿瘤大小差异无统计学意义。免疫组织化学结果显示前列腺癌细胞Ki67的阳性率在A至E组依次为36. 5%±8. 5%, 37. 7% ±11. 3%, 40. 1% ±12. 7%, 37. 2% ±12. 3%, 39. 3% ±13. 1%,各组间差异无统计学意义(P>0.O5);而前列腺癌细胞的TUNEL阳性率在A至E组依次为9. 5% ±3. 5%, 24. 7% ±8. 3%, 25. 7%±9. 7%, 28. 2%±12. 1%, 27. 5%±11. 3%,各用药组明显高于对照组(P<0.O1);免疫印迹结果表明用药组蛋白Smad 4及IκBα的表达显著高于对照组。结论:α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙?

前列腺、精囊

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响；全反式维甲酸提高激素非依赖性前列腺癌自杀基因治疗的旁观者效应；犬前列腺导管三维计算机虚拟重构；间歇性雄激素阻断治疗对晚期前列腺癌患者生活质量的影响；前列腺偶发癌51例的临床分析.

环氧化酶-2抑制剂对前列腺癌细胞增殖影响的研究

本实验通过研究雄激素非依赖性前列腺癌PC-3、PC-3m细胞中环氧化酶-2（COX-2）的表达和前列腺素E（PGF-2）的释放，分析两者与前列腺癌的相关性，并观察塞来昔布（celeeoxib）对PC-3和PC-3m细胞增殖的影响。探讨选择性COX-2抑制剂用于防治晚期前列腺癌的机制。