LINC00341通过靶向miR-187对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体(pcDNA3.1-LINC00341)转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)法检测Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2和E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。双荧光素酶报告实验联合RT-qPCR验证LINC00341对miR-187的靶向调控关系。将miR-187模拟物(miR-187 mimics)和pcDNA3.1-LINC00341共转染DU145细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化。结果 过表达LINC00341抑制DU145细胞Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的表达,促进P21、Bax和E-cadherin蛋白的表达水平,抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。miR-187是LINC00341的靶基因,LINC00341靶向负性调控miR-187表达。过表达miR-187可逆转LINC00341过表达对DU145细胞的增殖、迁移侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论 LINC00341通过靶向下调miR-187抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用于后续实验,并采用CCK-8法检测DU145细胞增殖,流式细胞术检测DU145细胞周期、凋亡情况,Western印迹检测DU145细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase 3的表达。结果:筛选结果显示100、200、400μg/ml浓度的芪蓝方均能显著抑制DU145细胞的生长、降低轮廓清晰度和贴壁能力,且200、400μg/ml浓度的芪蓝方可显著降低DU145细胞活力,故确定高中低浓度为400、200、100μg/ml,并用于后续实验研究。与空白组比较,G2期各浓度组DU145细胞数显著增加(P<0.01),而S期高、中浓度组细胞数显著下降(P<0.01、P<0.05);与空白对照组相比,芪蓝方各组DU145细胞总凋亡数均显著增高(P<0.01),高浓度组Cyclin D1表达显著降低,高、中浓度组Bcl-2表达明显降低,Bax和Cleaved-Caspase 3表达水平明显上升(P均<0.01)。结论:芪蓝方能够抑制前列腺癌DU145细胞的细胞增殖,促进其细胞凋亡,其机制可能与下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达,破坏Bax/Bcl-2平衡,上调Cleaved-Caspase 3表达相关。

鸦胆子苦醇抑制人前列腺癌DU145细胞生长及作用机制

中药鸦胆子是一种常用的抗肿瘤中草药,鸦胆子苦醇是来源于鸦胆子的主要成分。该研究探讨了鸦胆子苦醇(brusatol)对人前列腺癌DU145细胞的生长抑制及其作用机制。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测鸦胆子苦醇对不同细胞株的生长抑制情况,以及不同浓度的鸦胆子苦醇对DU145细胞的增殖抑制率;应用Hoechst 33258染色法观察鸦胆子苦醇处理DU145细胞后所发生的形态学变化;分别采用PI单染及AnnexinV-FITC双染法流式细胞术分析细胞周期分布个凋亡率的变化;以Western blot测定鸦胆子苦醇对MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果表明:鸦胆子苦醇对人前列腺癌DU145细胞的抑制作用更为显著,并且可以时间和剂量依赖性地抑制人前列腺癌DU145细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为(0.27±0.04)μmol·L-1;鸦胆子处理DU145细胞后,Hoechst 33258染色可见到明显的凋亡特征;细胞周期图中可见明显的亚二倍体峰,且随着作用时间的延长凋亡比例增加,FCM检测鸦胆子苦醇作用24 h后凋亡图中,可见凋亡的发生;Western blot检测表明鸦胆子苦醇处理后可使磷酸化的p38和JNK表达增加,使磷酸化的ERK表达降低。鸦胆子苦醇能显著抑制DU145细胞增殖,诱导DU145细胞凋亡。磷酸化的P38和JNK的表达增加,但磷酸化的ERK表达下降,这表明MAPK途径的活化可能是鸦胆子苦醇对DU145细胞生长抑制的作用机制之一。因此,鸦胆子苦醇是潜在的抗前列腺癌药物,有必要进一步在动物水平阐明其抗前列腺癌活性。

TGF-α诱导前列腺癌DU145细胞神经内分泌分化和增强DU145对顺铂的化疗耐药性

目的:研究TGF-α是否具有EGF相似的可诱导前列腺癌DU145细胞发生神经内分泌分化(neuroendocrine differentiation,NED)的作用,并探讨TGF-α诱导的前列腺癌DU145细胞神经内分泌分化对肿瘤化疗耐药性的影响。方法:将接受不同培养液处理的DU145细胞分为3组:2%FBS组、2%FBS+TGF-α5 ng/mL组和2%FBS+TGF-α10 ng/mL组。显微镜下观察TGF-α处理后DU145细胞的形态变化;Real time RT-PCR法检测神经特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)mRNA的表达水平;Western印迹检测NSE,P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),多药耐药相关蛋白1(multiple drug resistance protein,MRP1)和Bcl-2蛋白的表达水平。流式细胞术分析TGF-α(5μg/mL)处理后DU145细胞周期的变化;MTT比色法测定TGF-α(5μg/mL)对DU145细胞顺铂化疗耐药性的影响。结果:同2%FBS组相比,2%FBS+TGF-α处理组的DU145细胞出现多形性,细胞伪足伸出;NED标志物NSEmRNA的表达水平升高,分别为上调了(3.6±0.5)倍(P<0.05)和(10.1±0.1)倍(P<0.01);细胞的NSE,Bcl-2和MRP1蛋白的表达水平也明显增加,但未检测到P-gp蛋白的表达;同时,TGF-α(5μg/mL)处理后DU145细胞的G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例升高;顺铂的化疗耐药性增加。结论:TGF-α也可诱导前列腺癌DU145细胞神经内分泌分化增强,从而进一步增强DU145细胞对顺铂的化疗耐药性。

Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P<0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。

胡椒碱与棉酚联用对前列腺癌DU145细胞生长抑制的协同作用

目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉酚联用时,表现出协同作用。棉酚对细胞的半数抑制浓度IC50由单用时的21.00μmol·L-1下降到联合用药时的8.07μmol·L-1;两药相互作用指数CDI<1。胡椒碱与棉酚联合用药,可引起细胞G0/G1期阻滞和亚二倍体峰(凋亡峰)增加;同时上调细胞周期抑制蛋白p21Cip1的表达,并下调Cyclin D1、Cyclin A、CyclinB1以及药物代谢酶CYP3A4的表达。结论胡椒碱与棉酚联用,可能是通过诱导细胞周期阻滞,增强凋亡以及抑制CYP3A4药物代谢酶活性,发挥其协同抗前列腺癌作用。

川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制

目的:检测川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,探讨其作用机制。方法:将培养的人前列腺癌DU145细胞分为对照组和0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6和51.2μmol·L^-1川陈皮素组。MTT法检测各组人前列腺癌DU145细胞的增殖活性,细胞划痕实验分析各组人前列腺癌DU145细胞迁移能力,Transwell实验分析各组人前列腺癌DU145细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组人前列腺癌DU145细胞凋亡率,Western blotting法检测各组人前列腺癌DU145细胞中磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶(p-P38)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,作用24、48和72 h时,25.6μmol·L^-1川陈皮素组人前列腺癌DU145细胞增殖活性明显降低(P<0.01),川陈皮素对DU145细胞的增殖抑制作用呈现时间和浓度依赖性。与对照组比较,作用48 h后,12.8μmol·L^-1川陈皮素组人前列腺癌DU145细胞划痕愈合率和侵袭细胞数明显降低(P<0.01),人前列腺癌DU145细胞中p-ERK蛋白表达水平降低(P<0.01);25.6μmol·L^-1川陈皮素组人前列腺癌DU145细胞中p-ERK蛋白表达水平降低(P<0.01),但细胞凋亡率明显升高(P<0.01),p-JNK和p-P38蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞生长具有抑制作用,可促进细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移和侵袭;MAPK途径相关蛋白表达的改变可能是川陈皮素对DU145细胞生长抑制作用的机制之一。

AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响

目的:观察AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抗癌机制。方法:DU145细胞分组培养,对照组单纯用DMEM高糖培养基培养,实验组给予终浓度为10、25、50及80μmol/L的AG490,分别培养24、48和72h后,采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率,Western blot检测作用72h后STAT3信号通路相关蛋白(p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL)。结果:AG490能够抑制DU145细胞的增殖,呈剂量(F=786.170,P<0.001)、时间依赖性(F=354.570,P<0.001)。AG490作用于DU145细胞72h后,p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL蛋白的表达均降低。结论:AG490能抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,其机制可能与阻断STAT3信号通路有关。

Survivin-siRNA真核重组质粒的构建及对前列腺癌DU145细胞增殖抑制作用

目的应用RNA干扰技术（RNAi），构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA，并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株，通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡的影响．结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒，转染72h后，两个实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的（37．2％±5．8％）（n=3）和（43．5％±7．2％）（n=3）．流式细胞术发现：实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡，与脂质体组比较，两实验组细胞的凋亡率分别为（21．70％±6．45％），（14．835±5．65％）．结论成功构建针对survivin siRNA的真核重组质粒，两种质粒体外均可抑制DU145增殖并诱导其凋亡，为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础．

SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞凋亡的影响及可能机制

目的观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制。方法体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度为10,25和50μmol/L),Western印迹检测DU145细胞SIRT1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测DU145细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达。结果与对照组相比,随着sirtinol浓度的增加,SIRT1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡比例增加,诱导细胞发生凋亡。不同浓度sirtinol作用DU145细胞后Bcl-2蛋白表达减少,且随剂量增加表达越低;Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比率降低;伴随Cytochrome C的释放和Caspase-3的激活。结论下调SIRT1表达诱导前列腺癌细胞DU145细胞凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达相关。

sirtinol对前列腺癌DU145细胞周期的影响及其机制

目的:观察沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞生长增殖、细胞周期进程和细胞周期正性调节蛋白Cyclin D1、CDK4及pRb表达的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能作用机制。方法:取处于对数生长期DU145细胞随机分为对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度分别为10、25和50μmol·L-1),MTT法测定各组DU145细胞生长抑制率,RT-PCR和Western blotting法检测DU145细胞中SIRT1mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期进程,Western blotting法检测DU145细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4和pRb的表达水平。结果:与对照组比较,各浓度sirtinol组DU145细胞生长抑制率明显升高(P<0.01),G1期细胞明显增多(P<0.01),且呈浓度依赖性。与对照组比较,各浓度sirtinol组DU145细胞中SIRT1mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Cyclin D1和pRb蛋白表达水平降低(P<0.01),CDK4蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:下调SIRT1表达可以抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和阻滞细胞周期进程,其机制可能与改变细胞周期蛋白CyclinD1和pRb的表达有关。

稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株的构建

目的应用RNA干扰技术降低前列腺癌DU145细胞株Raptor基因表达水平,并建立稳定转染细胞株。方法针对Raptor基因设计合成siRNA,鉴定、测序正确后转染293T细胞观察基因表达情况;构建Raptor-shRNA慢病毒载体;进行Raptor-shRNA慢病毒包装及滴度测定;筛选稳定表达Raptor-shRNA的前列腺癌DU145细胞株;Western blot检测稳定转染细胞中的Raptor表达水平。结果 Raptor-shR-NA成功转染前列腺癌DU145细胞后,通过嘌呤霉素筛选,获得了Raptor基因沉默的DU145细胞株,Western blot检测证实该细胞株的Raptor表达水平明显低于对照组(P<0.01)。结论成功构建稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株,为后续研究奠定了基础。

隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞中异黏蛋白表达的影响

目的:探讨隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞增殖及细胞凋亡的作用,并初步探讨隐丹参酮对DU145细胞中异黏蛋白(MTDH)表达及下游PI3K/AKT信号通路的影响。方法:四氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度隐丹参酮分别作用DU145细胞24、48、72 h后对细胞的生长抑制作用;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况;Western印迹检测不同浓度隐丹参酮及作用不同时间对DU145细胞中MTDH蛋白的表达影响;RT-PCR技术检测隐丹参酮分别作用DU145细胞12、24、48 h后细胞中MTDH mRNA的表达情况;Western印迹检测隐丹参酮作用DU145细胞48 h后细胞中MTDH、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:隐丹参酮能够明显抑制DU145细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P<0.05);以10μmol/L隐丹参酮作用DU145细胞24、48、72 h后细胞凋亡率分别为(29.42±4.51)%、(55.07±5.67)%和(70.84±4.66)%,明显高于对照组(3.1±2.48)%(P<0.05)。Western印迹和RT-PCR结果显示,隐丹参酮可在转录和翻译水平下调MTDH的表达(P<0.05),抑制AKT信号通路和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:隐丹参酮可抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调MTDH表达,抑制其下游PI3K/AKT信号通路。

siRNA靶向沉默B7-H4基因对人前列腺癌DU145细胞增值和凋亡的影响

目的研究siRNA沉默B7-H4基因对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响。方法以脂质体Lipofectami-neTM2 000(Lipo)为载体转染siRNA-B7-H4至DU145细胞,应用RT-PCR和Western Blot检测B7-H4表达水平,CCK-8法检测细胞增殖的变化,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白组和阴性对照组(NC)相比,转染B7-H4-siRNA的细胞B7-H4 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),DU145转染B7-H4 siRNA后,增殖能力减弱,凋亡显著。结论通过B7-H4-siRNA抑制DU145细胞B7-H4的表达,可以抑制细胞增殖,促进其凋亡,表明B7-H4在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用。

miRNA141表达的调控对人前列腺癌DU145细胞恶性生物行为的影响

目的:研究microRNA-141(miR-141)表达的调控对人前列腺癌细胞系DU145细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法:利用脂质体Lipofectamine2000将miR-141 mimics(miR-141 up组)和miR-141 inhibi-tiors(miR-141 down组)分别转染至人前列腺癌DU145细胞中,同时设置未转染组(Control组)和miRNA无义序列转染组(NC组)。qPCR检测转染前后各组DU145细胞中miR-141表达变化,MTT方法检测各组DU145细胞的增殖活力和对顺铂(DDP)作用敏感性变化,流式细胞术检测各组DU145细胞周期和顺铂作用下凋亡率变化,Transwell方法检测各组细胞侵袭和迁移能力的变化,Western blotting检测各组细胞中VEGF、EGFR蛋白表达量变化。结果:与Control组和NC组相比,miR-141 down组DU145细胞中miRNA-141表达水平下降为(0.18±0.08),其细胞增殖活力显著下降而对DDP敏感性显著上升、细胞周期被阻滞于G0+G1期而细胞凋亡率显著上升至(46.67±5.86)%、细胞侵袭率和迁移率分别显著下降至(44.34±8.32)%和(57.73±6.19)%、VEGF和EGFR相对表达量分别下降至(0.47±0.06)和(0.36±0.06)(上述各指标分别P<0.05或P<0.01)。miR-141 up组DU145细胞中miR-NA-141表达水平上升为(4.23±0.53),其细胞增殖活力显著上升而对DDP敏感性显著下降、细胞周期提前进入S和G2期而细胞凋亡率显著下降至(18.77±4.24)%、细胞侵袭率和迁移率分别显著上升至(89.94±6.34)%和(94.44±5.84)%、VEGF和EGFR相对表达量分别上升至(0.89±0.07)和(0.73±0.06)(上述各指标分别P<0.05或P<0.01)。结论:miR-141在前列腺癌DU145细胞中发挥促癌因子作用,其下调表达能够显著抑制DU145细胞增殖活力、周期、侵袭与迁移,而促进对DDP的敏感性和细胞凋亡,其机制可能与其抑制VEGF和EGFR蛋白表达有关。

前列腺癌DU145细胞相关蛋白在构建体内三维空间模型中的表达研究

目的探讨前列腺癌相关蛋白在胶原、琼脂糖、基质胶、海藻酸钠加明胶4种支架材料培养的前列腺癌DU145细胞中的表达水平。方法将前列腺癌DU145细胞按照一定比例接种至胶原、琼脂糖、基质胶、海藻酸钠加明胶4种支架材料中,分别分组进行移植瘤模型的三维培养,然后采用免疫组化方法检测MMP9、FN1、Laminin等3个前列腺癌相关蛋白在3种支架材料中培养的DU145细胞构建移植瘤模型后培养的组织中表达情况。结果 MMP9在有支架材料培养的前列腺癌DU145中蛋白表达高于无支架材料培养的组织;FN1在海藻酸钠加明胶组中蛋白表达阴性,在琼脂糖与胶原组中蛋白表达阳性且明显强于空白组;Lamininm在空白组与海藻酸钠加明胶组中均表达阳性,但明显低于胶原、琼脂糖、基质胶组的强阳性。结论采用支架材料的三维培养体系优于无支架材料的二维培养体系。胶原为体内前列腺癌DU145细胞三维培养的最优支架材料。

刺梨多糖抑制PI3K/Akt/mTOR通路和抗氧化作用诱导前列腺癌DU145细胞凋亡

基于磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路,和通路相关分子磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、与Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-associated X protein,BAX),探究刺梨多糖抑制前列腺癌DU145细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用机制,并探讨刺梨多糖的抗氧化活性。使用不同浓度的刺梨多糖处理前列腺癌DU145细胞,采用CCK-8法检测刺梨多糖对DU145细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测刺梨多糖对DU145细胞迁移的影响;Transwell实验检测刺梨多糖对DU145细胞侵袭能力的影响;流式细胞术检测刺梨多糖诱导DU145细胞的凋亡情况;real-time PCR技术和Western blot技术检测刺梨多糖对DU145细胞PI3K、Akt、mTOR、PTEN、BAX、Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平的影响。二苯基苦基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)实验检测刺梨多糖的体外抗氧化活性。实验结果表明,刺梨多糖对DU145细胞的增殖、迁移和侵袭均有抑制作用。流式细胞术结果显示,与对照组相比,经刺梨多糖处理后的各组DU145细胞凋亡率随着多糖浓度的增加而升高;抑制性与多糖浓度呈正相关。刺梨多糖对PI3K/Akt/mTOR通路有抑制作用,通过上调PTEN、BAX基因和蛋白的表达,下调Akt、PI3K、mTOR和Bcl-2的表达,诱导DU145细胞凋亡。刺梨多糖对ABTS和DPPH自由基均有一定的清除作用,提示刺梨多糖可能通过清除细胞内活性氧(ROS)诱导DU145细胞凋亡。刺梨多糖可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路和清除细胞内ROS抑制DU145细胞增殖,诱导细胞凋亡。

基于miR-1297/PTEN/PI3K/AKT通路探讨芪蓝方影响前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡机制

目的 探究芪蓝方影响前列腺癌细胞增殖及凋亡的可能作用机制。方法 将DU145细胞分为空白组(NC mimics)、芪蓝方组(NC mimics+芪蓝方)、miR-1297过表达组(miR-1297 mimics)、miR-1297过表达+芪蓝方组(miR-1297 mimics+芪蓝方)、AKT激动剂组(SC79)、AKT激动剂+芪蓝方组(SC79+芪蓝方)。CCK-8法、EdU法检测各组DU145细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况;RT-PCR检测miR-1297、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、蛋白激酶B (AKT) mRNA表达;Western Blot检测PTEN、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、p-AKT、Cyclin D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Cleaved-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3蛋白表达。结果 与空白组比较,芪蓝方组DU145细胞活性、增殖率、EdU阳性细胞率、G1期细胞比例、miRNA 1297 mRNA表达、PI3K、p-AKT、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达降低,G2期细胞比例、Q1-LR(早期凋亡)+Q1-UR(晚期凋亡)、PTEN mRNA表达、PTEN、Bax、Cleaved-caspase 3蛋白表达升高(P<0.01);miR-1297过表达组和AKT激动剂组DU145细胞活性、增殖率、PI3K、p-AKT、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达升高,Q1-LR+Q1-UR、PTEN蛋白表达降低(P<0.01)。与miR-1297过表达组比较,miR-1297过表达+芪蓝方组DU145细胞活性、增殖率、G1期细胞比例、miRNA 1297 mRNA表达、PI3K、p-AKT、Cyclin D1、Bcl-2蛋白下降,G2期细胞比例、Q1-LR+Q1-UR、PTEN mRNA表达、PTEN、Bax、Cleaved-caspase 3蛋白表达升高(P<0.01)。与AKT激动剂组比较,AKT激动剂+芪蓝方组DU145细胞活性、增殖率、EdU阳性细胞率、S期细胞比例、PI3K、p-AKT、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下降,G1、G2细胞比例、Q1-LR+Q1-UR、PTEN mRNA表达、PTEN、Bax、Cleaved-caspase 3蛋白表达升高(P<0.01)。结论 芪蓝方可通过调节miR-1297/PTEN/PI3K/AKT通路抑制DU145细胞增殖和促进细胞凋亡。

核受体NURR1在前列腺癌细胞中的表达及其对环状RNA表达谱的影响

目的探讨核受体NURR1过表达对前列腺癌(PCa)细胞中环状RNA(circRNA)表达谱的影响,为揭示NURR1相关circRNA分子在PCa进展过程中的作用提供参考。方法通过UALCAN和TNMplot分析NURR1在PCa中的表达;通过高通量测序分析筛选NURR1过表达的PCa细胞中特征性circRNA分子表达谱;通过GO和KEGG分析差异表达的circRNA分子的功能和参与的信号通路。结果circ_0000915在DU145、LNCaP以及PC3细胞中均发生显著的下调表达。在核受体NURR1上调表达的DU145细胞中,1个circRNA上调表达(circ_0005991),2个circRNA下调表达(circ_0001460、circ_0001315);在核受体NURR1上调表达的LNCaP细胞中有2个circRNA显著上调表达(circ_0040729、circ_0000722);在NURR1上调表达的PC3细胞中有3个circRNA上调表达(circ_0001577、circ_0000854、circ_0018168),4个circRNA下调表达(circ_013035、circ_0003028、circ_0082096、circ_0005320)。KEGG分析发现差异表达的circRNA分子与背侧/腹侧神经管模式、蛋白质折叠伴侣、无序结构域特异性结合、BMP信号通路的正调控以及神经管模式化功能显著相关。结论circRNA在NURR1介导的PCa进展过程中发挥着重要作用,但是在不同的PCa细胞类型中存在着一定的差异。核受体NURR1与circ_0000915分子在PCa进展中的分子机制有待进一步研究。

黄鱼鱼鳔肽分离及其诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的机制

为探讨黄鱼鱼鳔肽诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的作用机制,从黄鱼鱼鳔酶解产物中分离纯化得到鱼鳔肽,鉴定其氨基酸序列。采用CCK-8法检测鱼鳔肽作用后DU-145细胞抑制率的变化;AO/EB法检测DU-145细胞凋亡情况;流式细胞术检测DU-145细胞凋亡率和周期;免疫印记法检测DU-145细胞凋亡蛋白表达。结果表明,分离得到的鱼鳔肽YCSB-1c中包含Ser-Pro-Ser-Pro和Gly-Pro-Ala-Arg两条寡肽。与空白组相比,YCSB-1c组中凋亡细胞明显增多,且呈质量浓度依赖性;流式细胞仪检测得出YCSB-1c组中存活细胞明显减少,晚期凋亡细胞明显增多。YCSB-1c将DU-145细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期,上调Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达,诱导DU-145细胞凋亡。YCSB-1c能有效诱导DU-145细胞凋亡,其作用机制与细胞周期停滞和线粒体介导的凋亡途径有关。