烟管头草水提物对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:研究烟管头草水提物(AECC)对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:将细胞分为对照组和AECC不同质量浓度组(5、10、20、40、80μg/L),加入相应药物或培养基培养不同时间(24、48、72 h)后,检测细胞存活率。将细胞分为对照组和AECC低、中、高质量浓度组(20、40、80μg/L),同法培养24 h后,采用Hoechst 33258染色法和流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;采用Transwell实验检测细胞迁移数和侵袭数;采用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法检测AECC低、中质量浓度组细胞中β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关迁移与凋亡蛋白[β-catenin、基质金属蛋白酶7(MMP-7)、髓细胞瘤病毒致癌基因(c-Myc)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的mRNA和蛋白表达水平。结果:随着给药浓度的增加和作用时间的延长,AECC不同质量浓度组细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),且呈不断降低趋势。与对照组比较,AECC各质量浓度组细胞的早期凋亡率(中质量浓度组除外),细胞迁移数和侵袭数,以及AECC低、中质量浓度组细胞中MMP-7、c-Myc(低质量浓度组除外)、Bcl-2(低质量浓度组mRNA除外)的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);AECC各质量浓度组细胞的晚期凋亡率,AECC低、中质量浓度组细胞中β-catenin、caspases-3(低质量浓度组除外)、Bax(低质量浓度组mRNA除外)的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:AECC可抑制PC3细胞的增殖、迁移与侵袭,其作用机制可能与调控β-catenin信号通路相关的迁移与凋亡因子的表达有关。

自噬在熊果酸诱导前列腺癌PC3细胞凋亡中的作用机制研究

为了探讨自噬在熊果酸抑制前列腺癌PC3细胞凋亡中的作用机制,PC3细胞培养至对数生长期后,以无糖、无氨基酸培养液代替原培养液培养细胞,并用不同浓度的熊果酸进行干预。72 h后收集细胞,采用透射电镜和免疫荧光技术观察PC3细胞自噬情况;Western Blot检测ATG5和Beclin-1蛋白表达;Elisa法测定Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9含量;流式细胞技术检测PC3细胞凋亡情况。结果表明,PC3细胞饥饿72 h后,细胞自噬明显增强。与对照组比较,熊果酸作用后的细胞自噬程度明显减弱;ATG5和Beclin-1蛋白表达显著减少(P<0.05);Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9含量显著增加(P<0.05);PC3细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。实验初步揭示,熊果酸可通过抑制饥饿状态的前列腺癌PC3细胞自噬,并进一步通过促进凋亡因子的分泌诱导其凋亡。

基于AEP/PI3K/AKT信号通路探讨温肾散结方对人前列腺癌细胞的调控作用和分子机制

目的:基于天冬酰胺内肽酶(AEP)/磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT),探讨温肾散结方(WSSJ方)对人前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法:制备WSSJ方冻干粉;体外培养人前列腺癌PC3、DU145和22RV1细胞,CCK-8法检测WSSJ方对前列腺癌细胞相对活力的影响并测定最佳给药浓度;集落形成实验检测WSSJ方对单细胞增殖能力的影响;划痕实验检测WSSJ方对前列腺癌细胞迁移能力的影响;RT-qPCR检测细胞内AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达;Western blotting检测细胞内AEP、PI3K及AKT蛋白表达。结果:WSSJ方组前列腺癌细胞增殖活力随给药浓度升高逐渐降低;WSSJ方组细胞计数与细胞融合情况均低于对照组;WSSJ方低、中、高剂量组细胞集落形成数量均少于对照组;WSSJ方组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01);WSSJ方组PC3细胞AKT蛋白相对表达量低于对照组,DU145细胞、22RV1细胞AEP、PI3K蛋白相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);WSSJ方组PC3细胞、DU145细胞、22RV1细胞AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:WSSJ方能有效抑制人前列腺癌细胞的增殖和迁移能力,并且其对肿瘤细胞的抑制呈现剂量依赖性,作用机制可能与下调AEP抑制PI3K/AKT信号通路有关。

槲皮素对前列腺癌PC3细胞VEGF及COX-2表达水平的影响

目的:探讨槲皮素有效抑制前列腺癌PC3细胞的作用机理。方法:观察不同浓度(37.5、75、150μmol/L)槲皮素处理PC3细胞48h后对细胞增殖的影响,观察150μmol/L槲皮素处理24h后对PC3细胞基因血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶-2(COX-2)表达的影响及细胞形态变化。结果:不同浓度槲皮素处理PC3细胞48h后,细胞生长出现了不同程度的抑制,且浓度越高,抑制作用越强。150μmol/L槲皮素处理PC3细胞24h后,细胞的VEGF及COX-2表达水平均有下调,与空白对照组、DMSO组比较,差异均有显著性意义(P<0.05),而空白对照组与DMSO组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。空白对照组与DMSO组细胞形态相似,细胞呈梭形或多角形,活力强;槲皮素组细胞出现了不同程度的皱缩,较多细胞变圆,少量细胞漂浮,表现出细胞生长受到抑制。结论:槲皮素抑制前列腺癌PC3细胞生长可能与下调COX-2及VEGF基因的表达水平有关。

鸭CD36基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖的影响

为了探讨鸭CD36基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖的效应，通过克隆鸭CD36基因CDS区，构建真核表达载体pEGFP-N3＋CD36＋His，空载体pEGFP—N3为对照，转染培养的前列腺癌PC3细胞。结果表明：前列腺癌PC3细胞均被pEGFP-N3＋CD36＋His和pEGFP—N3成功转染，转染效率均较高；通过检测转染48h的CD36＋His-tag融合蛋白表达量和细胞数量，CD36＋His—tag融合蛋白表达量为98．81pg／mL，pEGFP-N3＋CD36＋His组细胞数为0．72×106^个，pEGFP-N3组细胞数为0．61×106^个，pEGFP-N3＋CD36＋His组细胞数显著高于pEGFP-N3组。研究结果揭示，鸭CD36基因的表达对前列腺癌PC3细胞增殖和生长可能有促进作用。

前列腺癌PC3细胞表达鸭SREBP1基因的分析

为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载体均成功转染前列腺癌PC3细胞,p EGFP-N3+SREBP1+His转染效率高于空载体,通过检测转染48 h的细胞数量和SREBP1表达量,p EGFP-N3+SREBP1+His组细胞数为0.82×10~6个,SREBP1基因表达量为124.128 pg/m L;空载体组细胞数为0.74×10~6个,没有检测到His标签表达量。研究结果揭示,鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列对前列腺癌PC3细胞的增殖有促进作用。

人前列腺癌PC3细胞Bloom解旋酶基因干扰载体的构建

通过RNAi技术干扰人前列腺癌PC3细胞Bloom(BLM)解旋酶基因的表达。实验前期根据BLM解旋酶基因序列设计并合成两对sh RNA,插入到CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs载体,构建针对BLM解旋酶基因的重组干扰载体CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs-BLM1、CMV-cop GFPT2A-Puro-H1-mcs-BLM2。经测序载体构建成功后,用脂质体将所构建的载体及阴性对照载体转染前列腺癌PC3细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测转染细胞的BLM解旋酶表达情况。检测结果显示,成功构建了BLM解旋酶RNAi真核表达载体;利用脂质体转染PC3细胞后,荧光定量PCR和Western blot鉴定结果表明,BLM解旋酶的表达水平显著降低,即Bloom RNAi真核表达载体在m RNA和蛋白质水平阻断了BLM解旋酶的表达。

miR-873靶向生存蛋白基因对人前列腺癌PC3细胞侵袭性的影响

目的探讨人前列腺癌PC3细胞中miR-873和生存蛋白(Survivin)基因的表达,阐明miR-873对生存蛋白基因的靶向调控作用以及对PC3细胞侵袭性的影响。方法培养PC3细胞并应用免疫荧光化学技术检测生存蛋白基因的表达;采用生物信息学方法对miR-873和生存蛋白基因的匹配关系进行预测,并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定;转染miR-873模拟物后,行实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-873和生存蛋白基因的表达,Western印迹检测生存蛋白的表达,Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性。结果倒置相差显微镜下可见细胞均匀分布,形态规则均一;免疫荧光化学显示,胞质内有生存蛋白的表达;靶基因预测软件miRanda和Target Scan显示,miR-873和生存蛋白基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现,miR-873能够结合生存蛋白mRNA 3'UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR和Western印迹检测结果均表明,miR-873的过表达能够下调生存蛋白基因表达。Transwell实验显示,miR-873的过表达能够抑制PC3细胞的侵袭。结论 miR-873通过靶向作用于生存蛋白mRNA 3'UTR负性调控人前列腺癌PC3细胞中生存蛋白的表达,并能够抑制其侵袭。

枸杞子抑制人前列腺细胞增殖活性成分的提取与分离

目的 :筛选与分离枸杞子中抑制人前列腺细胞增殖的活性成分。方法 :水、95 %乙醇、5 0 %乙醇、丙酮与正丁醇等溶剂分别提取 ,经硅胶柱色谱和TLC分离 ;MS ,IR ,1HNMR ,UV确定结构。MTT显色试验测定提取物的抑制人前列腺癌PC3 细胞增殖活性。结果 :从枸杞子 5 0 %乙醇提取物中分得单体化合物莨菪亭 ,并证明有显著的抑制PC3 细胞增殖活性。结论 :莨菪亭是枸杞子抑制PC3 细胞增殖的活性成分。