靶向调控前列腺素内过氧化物合成酶2基因抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化

背景:骨质疏松症可归因于成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收之间的不平衡。成骨细胞是骨形成的基础,对于骨骼的生长和维持必不可少,成骨细胞功能的紊乱会导致骨骼生长发育不良和骨质疏松症。然而目前对于成骨细胞成骨分化过程中的关键基因仍不清楚。目的:使用生物信息学鉴定MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的关键基因及其上游miRNA,并验证其对MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响。方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载基因表达谱GSE46400成骨诱导数据,使用R语言limma包获得差异表达基因。利用DAVID数据库对DEGs进行了基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析。通过STRING网站建立蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络并利用CytoHubba插件筛选网络中的重要模块,以鉴定其中的关键基因。培养MC3T3-E1细胞并分别转染siRNA和miRNA,转染72 h后进行实时荧光定量PCR检测前列腺素内过氧化物合成酶(prostaglandin-endoperoxide synthase,Ptgs)2和骨化相关水平变化,转染72 h后进行Western Blot检测PTGS2蛋白水平变化;转染14 d后进行碱性磷酸酶定量检测;转染21 d后进行茜素红染色及定量检测。结果与结论:(1)筛选出差异表达基因229个,其中114个基因表达上调,115个基因表达下调。富集在骨矿化生物学过程的5个基因:Mmp13,Ibsp,Gpnmb,Ptgs2及Aspn均为显著高表达。进一步使用CytoHubba鉴别高表达差异基因中的核心模块中只有Ptgs2参与骨矿化生物学过程,即定义Ptgs2为成骨分化过程的关键基因。(2)通过Targetscan对Ptgs2上游miRNA进行预测,发现mmu-miR-107-3p可以靶向调控Ptgs2。(3)在MC3T3-E1细胞中敲减Ptgs2后可以显著抑制细胞增殖和成骨分化(P<0.05);在转染mmu-miR-107-3p后,细胞的增殖和成骨分化同样被抑制。(4)双荧光素酶报告基因结果显示mmu-miR-107-3p可以直接靶向抑制Ptgs2的转录(P<0.05)。(5)mmu-miR-107-3p可以通过靶向Ptgs2进而抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化,Ptgs2可能是MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的关键基因。

肺腺癌组织中前列腺素内过氧化物合酶2表达水平与表皮生长因子受体基因突变的相关性分析

目的 分析肺腺癌组织中前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)表达水平与表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的相关性。方法 选取57例肺腺癌患者为研究对象,收集肺腺癌组织及其相应癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测癌组织及癌旁组织中PTGS2 mRNA表达水平;采用免疫组织化学法分析PTGS2蛋白表达;采用RT-PCR法检测癌组织及癌旁组织EGFR基因突变情况。分析肺腺癌患者临床病理参数与PTGS2 mRNA水平、EGFR基因突变情况的关系。采用Spearman秩相关分析探讨肺腺癌患者EGFR基因突变情况与PTGS2 mRNA水平的相关性。结果 57例肺腺癌患者中,5例癌旁组织EGFR基因突变型患者,其对应癌组织也均发生突变,且为同一突变类型。26例(45.61%)癌组织EGFR基因突变型患者,未发现双重突变,其中19外显子突变17例(29.82%),均为缺失突变;21外显子突变9例(15.79%),均为L858R点突变。癌组织中PTGS2mRNA表达水平、PTGS2蛋白阳性率及EGFR基因突变型比例高于癌旁组织,EGFR基因野生型比例低于癌旁组织(P<0.01)。肺腺癌患者性别、TNM分期、吸烟与PTGS2 mRNA表达水平、EGFR基因突变情况有关(P<0.05或0.01)。EGFR基因突变型PTGS2 mRNA表达水平高于EGFR基因野生型(P<0.01)。肺腺癌患者EGFR基因突变与PTGS2 mRNA表达水平呈正相关(r=0.512,P<0.01)。结论 肺腺癌患者癌组织中PTGS2mRNA表达水平及PTGS2蛋白阳性率升高,且与EGFR基因突变关系密切,二者可能共同影响疾病进程。

血清前列腺素内过氧化物合酶2、几丁质酶3样蛋白1水平与精神分裂症患者认知功能的关系

目的:探究血清前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin endoperoxide synthase 2,PTGS2)、几丁质酶3样蛋白1(chitinase 3-like protein 1,CHI3L1)水平与精神分裂症患者认知功能的关系。方法:选取130例精神分裂症患者设为研究组,同期来院体检的96名健康体检者作为对照组。采用精神分裂症认知功能成套测验(MATRICS consensus cognitive battery,MCCB)评分评估研究对象的认知功能。检测两组研究对象血清PTGS2、CHI3L1水平。Pearson法分析精神分裂症患者血清中PTGS2与CHI3L1水平与MCCB评分的相关性。结果:与对照组相比,研究组精神分裂症患者血清PTGS2、CHI3L1水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05),精神分裂症患者连线测验、语言记忆、言语流畅、符号编码、迷宫测验、视觉记忆的MCCB分值均降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。血清PTGS2、CHI3L1水平与连线测验、语言记忆、言语流畅、符号编码、迷宫测验、视觉记忆的MCCB分值均呈负相关(P均<0.05)。结论:血清PTGS2、CHI3L1水平均与精神分裂症患者的认知功能呈负相关,是评估精神分裂症患者认知功能的潜在标志物。

冠状动脉粥样硬化组织环氧化物酶-2、诱导型前列腺素合成酶-1表达及塞来昔布的影响

目的探讨兔冠状动脉粥样硬化组织环氧化物酶-2(Cox-2)、诱导型前列腺素合成酶-1(mPGES-1)表达机制及塞来昔布对其表达的影响。方法采用32只雄性新西兰大白兔,正常对照组8只(A 组);另24只将给予1%高胆固醇喂养2周,建立兔动脉粥样硬化动物模型。将模型兔随机分为无干预组(B 组)、小剂量塞来昔布治疗组(15mg/kg,C 组),大剂量塞来昔布治疗组(35 mg/kg,D 组),每组8只。治疗4周后取双侧冠状动脉并分为平等2段,分别行半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印记法(Western blot)测定各组冠状动脉粥样硬化组织 Cox-2及 mPGES-1表达。结果与 A 组比较,B 组冠状动脉粥样硬化组织 Cox-2及 mPGES-1表达增高,差异具有统计学意义(P<0.05);与 B 组比较,C、D 组冠状动脉组织的 Cox-2及 mPGE-1表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);与 B 组比较,C 组的 ALD 明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在动脉粥样硬化的病理过程中炎症反应可能起着主导作用,塞来昔布干预可抑制 Cox-2及 mPGES-1表达,减缓动脉粥样硬化的进展。

过氧化物酶体增殖物激活受体对人绒毛膜前列腺素代谢酶的调节

目的 探索不同妊娠状态人绒毛膜上过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)各亚型的基因和蛋白表达差异及其与前列腺素代谢酶15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)蛋白表达的相关性,进一步浅探PPARs对PGDH可能的调节机制和在分娩启动中可能发挥的作用。方法 收集2019年1月至12月正常足月妊娠未临产择期剖宫产分娩(TNL)、足月妊娠自然临产分娩(TL)的绒毛膜组织各40份,早产临产组(PL)22份,免疫组织化学实现PPARs和PGDH在绒毛膜滋养细胞内的定位,用RT-PCR和Western blot方法检测PPARs的mRNA及蛋白表达,检测同一份样本上PGDH的mRNA和蛋白表达,并统计PPAR各亚型蛋白表达与PGDH蛋白表达的相关性;收集足月妊娠顺产的绒毛膜组织,行绒毛膜滋养细胞培养,给予不同浓度PPARγ的特异性激动剂罗格列酮和拮抗剂GW9662处理细胞,检测PGDH的mRNA和蛋白表达。结果 PPARs和PGDH均在人绒毛膜组织上滋养细胞核表达。TL组PPARγmRNA和蛋白表达均低于TNL组(P<0.05),而两组PPARα、PPARβ的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。PL组PPARγmRNA和蛋白表达均低于TL组(P<0.01);人绒毛膜组织上PPARγ的蛋白表达与PGDH的蛋白表达呈正相关;在离体细胞培养上罗格列酮可剂量依赖性上调PGDH蛋白和mRNA表达,GW9662则可抑制PGDH蛋白和mRNA表达,且表现为剂量依耐性。结论 绒毛膜上PPARγ的表达可能影响绒毛膜局部的前列腺素浓度,PPARγ临产前后的变化可能与分娩启动相关。

脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶在恶性肿瘤中的研究进展

脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)是脂质运载蛋白超家族成员中较重要的成分,除参与前列腺素合成和脂质转运外,其近年在恶性肿瘤中相关作用的研究也引起了广泛关注。L-PGDS基因在人类多种恶性肿瘤中表达异常,且与肿瘤患者预后有关,其可能通过参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移和凋亡等生物学行为过程,促进肿瘤的发生和发展。因此,较全面地阐明L-PGDS基因在人类恶性肿瘤中的的作用机制将为未来发现新的肿瘤标志物和治疗靶点提供新思路。

前列腺素内过氧化物合酶2基因的研究进展

前列腺素内过氧化物合酶2是前列腺素生物合成的限速酶。本文介绍了前列腺素内过氧化物合酶2基因的结构、表达、调控机理及其与繁殖性能的关系。

舒心饮对豚鼠心脏再灌注冠脉流液前列腺素、心肌内皮素和脂质过氧化物的影响

目的:观察舒心饮对豚鼠心脏缺血再灌注的改善作用。方法:将豚鼠随机分为3组(对照组、缺血组、舒心饮组),观察舒心饮对豚鼠心脏缺血再灌注后冠脉流液中血栓素B2、6-酮-前列腺素 F_(1α)心肌组织内皮素和脂质过氧化物的影响。结果:对缺血后损伤的心肌, 于再灌注的同时给予舒心饮(1.6g/L),明显抑制血栓素 A_2的释放,促进前列环素I_2的产生,减少心肌内皮素的含量,加速清除氧自由基降低心肌组织脂质过氧化物的含量。结论:舒心饮具有抗心肌缺血的作用。

胰腺癌相关性成纤维细胞中前列腺环素合成酶对胰腺癌细胞作用研究

目的探究胰腺癌相关性成纤维细胞(CAFs)中的前列腺环素合成酶(PGIS/PTGIS)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关作用机制。方法利用GEPIA、Kaplan-Meier等数据库分析PGIS在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达差异;通过q-PCR检测PGIS在CAFs及人胰腺星状细胞(HPSC)中的表达差异;通过CoCl_(2)化学诱导构建肿瘤微环境缺氧模型,检测胰腺癌及CAFs细胞的PGIS表达水平;利用siRNA转染、慢病毒感染的方式分别构建敲低和过表达PGIS的CAFs细胞,通过CCK-8增殖、Transwell迁移及侵袭等实验探究敲低和过表达PGIS的CAFs细胞对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过小鼠胰腺原位成瘤探究过表达PGIS的CAFs细胞在体内对胰腺癌细胞增殖的影响;通过Western blot检测过表达PGIS的CAFs细胞对胰腺癌PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响。结果GEPIA、Kaplan-Meier数据库分析显示,与正常胰腺组织相比,PGIS在胰腺癌组织中高表达,并且与患者不良预后相关(P<0.05);与HPSC细胞相比,PGIS在CAFs细胞中显著高表达(P<0.05);胰腺癌及CAFs细胞在缺氧微环境中PGIS的表达水平明显上调(P<0.05);与对照组相比,敲低CAFs中的PGIS后,胰腺癌细胞的增殖速率明显减慢,细胞迁移和侵袭数量均明显减少(P<0.05);与对照组相比,过表达CAFs中的PGIS后,胰腺癌细胞的增殖速率明显加快,细胞迁移和侵袭数量均明显增多(P<0.05);与对照组相比,过表达PGIS的CAFs在体内可促进胰腺肿瘤的生长(P<0.05);与对照组相比,过表达CAFs中的PGIS后可明显上调VEGFA、p-Akt的蛋白表达水平(P<0.05),也可明显上调FGF-2、α-SMA及MMP-9的mRNA水平(P<0.05)。结论PGIS在胰腺癌组织中呈高表达,CAFs中的PGIS可能通过调节PI3K/Akt信号通路正向调控VEGFA的表达上调,促进胰腺癌细胞的增殖和侵袭,参与胰腺癌的发生、发展。

足月妊娠子宫蜕膜组织环氧化酶Ⅱ与前列腺素E合成酶2的表达与引产成功率的关系

目的研究足月妊娠人子宫蜕膜组织中环氧化酶Ⅱ(COXⅡ)与前列腺素E合成酶2(PTGES2)蛋白的表达与缩宫素引产成功率的关系。方法选择缩宫素引产成功与缩宫素引产失败的孕妇,于剖宫产术中取子宫蜕膜组织。行Western blot检测子宫蜕膜中COXⅡ与PTGES2蛋白的表达。结果缩宫素引产成功组与引产失败组子宫蜕膜组织COXⅡ蛋白的表达水平无明显差异。缩宫素引产成功组比引产失败组子宫蜕膜PTGES2蛋白的表达明显增高(P<0.05)。结论子宫蜕膜组织中PTGES2蛋白的表达量与缩宫素引产成功率关系密切。

过氧化物和抗氧化剂对前列腺素合成的调节作用

本文介绍了过氧化物和抗氧化剂对前列腺素的合成具有双向调节作用 ,低浓度的过氧化物是前列腺素合酶的激活剂 ,而高浓度的过氧化物则是前列腺素合酶和前列环素合酶的抑制剂 ;抗氧剂通过抑制过氧化物形成和影响环氧酶活性而调节前列腺素的合成。

过氧化物和抗氧化剂对前列腺素合成的调节作用

前列腺素的生成是多途径、多步骤的结果。参与前列腺素合成的酶类主要有:磷脂酶A2、前列腺素合酶（PGHS）-环氧化酶、前列腺素合酶-氢过氧化物酶、前列环素合成酶（PGIS）、血酸烷（thromboxane,TXAX）合成酶和内环氧化异构酶等,这些酶的催化活性对过氧化物的敏感性各不相同,因而其合成会受到过氧化物和抗氧化剂的影响[1,2]。1

体外催化花生四烯酸生产前列腺素F_(2α)

前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))具有广泛的生理活性,是一种重要的脂质介质。为了实现PGF_(2α)的绿色生物合成,构建了pET30a-TbPGFS、pET30a-MmPGHS、pET30a-GvPGHS载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达,同时对异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达条件进行了优化以提高重组蛋白在大肠杆菌中的表达量。另外,以最佳诱导表达条件下得到的重组蛋白为催化剂,催化花生四烯酸合成PGF_(2α)。结果表明:MmPGHS蛋白在大肠杆菌中没有表达;GvPGHS蛋白的最佳诱导表达条件为诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导温度30℃、诱导时间2 h,TbPGFS蛋白的最佳诱导表达条件为诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导温度30℃、诱导时间6 h;在最佳诱导表达条件下,由GvPGHS和TbPGFS的粗酶液构成的双酶催化未能检测到产物PGF_(2α),而在酶偶联化学催化时,GvPGHS能将花生四烯酸转化为PGH_(2),PGH_(2)被SnCl_(2)进一步还原为PGF_(2α)。综上,通过体外酶促反应结合化学法可高效转化花生四烯酸生产PGF_(2α)。

15-脱氧前列腺素J_2对脂肪肝大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达的影响

目的观察15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法普通饲料喂养的雄性Wistar大鼠作为正常对照组8只;高脂饲料喂养雄性Wistar大鼠建造NAFLD模型16只,将建模成功的大鼠随机分为模型对照组8只和实验组8只。模型对照组大鼠腹腔注射生理盐水2ml·kg-1·d-1;实验组大鼠腹腔注射15d-PGJ210μg·kg-1·d-1。干预2周后处死各组大鼠,检测各组肝组织匀浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织PPAR-γ、TNF-α和IL-6的表达。结果模型对照组肝组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显高于正常对照组,TC(1.27±0.26)mmol/g vs(0.74±0.18)mmol/g、TG(1.56±0.27)mmol/g vs(1.13±0.39)mmol/g(P<0.01);实验组肝组织TC、TG水平明显低于模型对照组,TC(1.01±0.22)mmol/g vs(1.27±0.26)mmol/g、TG(1.15±0.20)mmol/g vs(1.56±0.27)mmol/g(P<0.05)。光镜下未见正常对照组肝组织病理形态学异常;模型对照组可见大量肝细胞脂肪变性及肝组织多处点状坏死;实验组大鼠肝细胞脂肪变性及点状坏死较模型对照组减轻;正常对照组肝组织PPAR-γ普遍表达而TNF-α和IL-6几乎不表达;实验组肝组织PPAR-γ表达强于模型对照组,而TNF-α和IL-6表达低于模型对照组。结论 15d-PGJ2可以缓解NAFLD大鼠肝细胞脂肪变性和坏死、降低肝组织TC和TG水平,这种效果可能是通过增加肝脏PPARγ和减少TNF-α、IL-6的表达来实现的。

老年良性前列腺增生患者微创术后发生性功能障碍的影响因素

目的:探讨老年良性前列腺增生患者微创术后发生性功能障碍的影响因素。方法:回顾性选取赣南医学院附属兴国医院2018年12月—2021年12月赣南医学院附属兴国医院82例行微创术的老年良性前列腺增生患者的临床资料,术后随访12个月,统计分析性功能障碍发生情况。将发生性功能障碍的患者设置为性功能障碍组,未发生性功能障碍的患者设置为无性功能障碍组。采用logistic回归分析法分析老年良性前列腺增生患者微创术后发生性功能障碍的影响因素。结果:随访12个月后,在82例接受微创术的老年良性前列腺增生患者中,发生性功能障碍的患者28例,发生率为34.15%。两组术前体重指数(BMI)、病程、吸烟史、饮酒史、高血压对比,差异均无统计学意义(P>0.05);性功能障碍组术前国际前列腺症状评分(IPSS)评分、年龄均高于无性功能障碍组,抑郁、焦虑占比均高于无性功能障碍组(P<0.05),前列腺素E_(2)、一氧化氮合成酶、一氧化氮水平均低于无性功能障碍组(P<0.05)。logistic回归分析结果显示,术前IPSS评分、年龄、抑郁、焦虑、前列腺素E_(2)、一氧化氮合成酶、一氧化氮水平均为老年良性前列腺增生患者微创术后发生性功能障碍的影响因素(P<0.05)。结论:术前IPSS评分、年龄、抑郁、焦虑、前列腺素E_(2)、一氧化氮合成酶、一氧化氮水平均为老年良性前列腺增生患者微创术后发生性功能障碍的影响因素,可为评估老年良性前列腺增生微创术后性功能障碍的发生风险提供可靠的预测方式。

前列腺素合成酶基因调控与前列腺疾病关系的研究进展

前列腺素合成酶(PGS)能催化各种类型前列腺素的生成,调节相关物质的基因表达水平,其基因调控机制与前列腺疾病的发生和发展密切相关。目前有关PGS在前列腺疾病如良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)中调控机制的研究很少,鲜有研究直接对PGS基因调控与前列腺疾病关系进行探讨。本文拟对两者的关系进行分析,为从干预PGS调控途径防控BPH和PCa提供研发思路。

Lipocalin型前列腺素D合成酶的结构、定位与特性

Lipocalin型前列腺素D合成酶 (L PGDS)是一种糖基化、双功能、单体蛋白质 ,具有催化PGD2的合成和转运亲脂性物质的作用。它在中枢神经系统、雄性生殖器官和人与猴的心脏等器官中有分布 ,并被分泌到脑脊液、精浆及血浆内。L PGDS浓度的检测对神经错乱、精子生成障碍、心血管疾病和肾功能障碍等疾病具有辅助诊断作用。

人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂 疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合 。

Lipocalin 型前列腺素D合成酶与男性生殖

Lipocalin型前列腺素D合成酶 (L PGDS)在男性生殖系统中广泛表达 ,且表达程度与男性生殖器官的发育成熟有关。附睾中L PGDS的合成可能受睾酮和睾丸因子的调节 ,而局部生殖细胞对睾丸L PGDS的表达亦起一定作用。男性生殖系统中的L PGDS为一种多形性的糖蛋白 ,可催化精浆中PGD2 的产生。L PGDS为一种生育相关蛋白 ,且与类视色素的运输和跨越血 睾屏障或血 附睾屏障的物质转运有关 ;PGD2 不仅与精子在女性生殖道中运行有关 ,亦可能与免疫性不育有关。人睾丸L PGDS的体外克隆和表达的研究 ,对进一步探索L

人睾丸前列腺素D合成酶的cDNA克隆和序列分析

目的 对人睾丸 L ipocalin型前列腺素 D合成酶 (L - PGDS) c DNA进行克隆和序列分析。 方法 用人脑 L - PGDS的特异性引物对人睾丸 RNA进行逆转录和 PCR扩增 ,并对扩增产物进行纯化和测序。 结果 人睾丸 L - PGDS c DNA核苷酸序列与人外周血淋巴细胞的 L - PGDS基因编码区序列的一致性为 99.5 % ,与人脑 L -PGDS c DNA的一致性为 96 .0 % ,相应氨基酸的一致性分别为 10 0 %和 94.2 %。 结论 人睾丸 L - PGDS c DNA序列及推导的氨基酸序列的阐明 ,对进一步探讨 L - PGDS蛋白的特性及其在男性生殖中的作用是十分有意义的。