肥大细胞中前列腺素合成酶的组织化学观察

用正常成年豚鼠20只、大鼠10只,颈椎脱臼或重击头部处死后,立即取胸腺、淋巴结和小肠,部分材料投入-70℃液氮速冻,部分材料入10%甲醛和纯甲醇固定,石蜡切片,HE和肥大细胞特殊染色;肠系膜铺片经氮气吹干后,与液氮速冻的组织块一并置-70℃低温冰箱保存。可随时取出做恒冷箱切片,部分冰冻切片及肠系膜铺片用Janszen和Nugteren前列腺素合成酶组织化学法显示,以此法同步显示家兔肾脏。每种切片均用酶的特异抑制剂消炎痛作对照。部分连续冰冻切片,做HE和肥大细胞特殊染色。结果表明,前列腺素合成酶活性存在于肥大细胞的胞质内,颗粒和胞核为阴性。家兔肾脏集合管恒为阳性。消炎痛抑制反应极弱。确证前列腺素合成酶的组织化学方法可靠并且具特异性。前列腺素合成酶阳性反应的细胞,见于大鼠和豚鼠的小肠粘膜及粘膜下层、胸腺被膜和胸腺隔的结缔组织以及胸腺髓质、淋巴结被膜和小梁结缔组织及深皮质区;散布于肠系膜铺片上的细胞多呈椭圆形。以上所示酶活性细胞的分布,与肥大细胞的其他特殊染色结果相符。证明酶反应确是在肥大细胞内。本文用组织化学技术,证实肥大细胞内存在前列腺素合成酶,此酶是衡量前列腺素合成的敏感指标,可考虑用此方法研究肥大细胞的生理和病理。

晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列腺素合成的影响及可能机制

目的探讨晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列环素、前列腺素E2合成的影响及可能机制。方法不同浓度的晚期糖基化终末产物作用内皮细胞,酶联免疫吸附法测定前列环素的稳定代谢产物6-酮—前列腺素F1α和前列腺素E2的表达。逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学测定环氧合酶2 mRNA和蛋白表达的改变。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA对晚期糖基化终末产物刺激内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2的影响。结果晚期糖基化终末产物引起内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2增加(P<0.01),具有剂量依赖关系。晚期糖基化终末产物引起内皮细胞环氧合酶2的mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA可减轻晚期糖基化终末产物刺激的内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2(P<0.05或0.01),双基因的抑制效果更明显(P<0.05)。结论晚期糖基化终末产物可能通过晚期糖基化终末产物受体、核因子κB途径使内皮细胞的环氧合酶2表达增加,从而引起前列环素、前列腺素E2合成增加,这个机制可能参与了晚期糖基化终末产物所致的血管炎症损伤。

冠状动脉粥样硬化组织环氧化物酶-2、诱导型前列腺素合成酶-1表达及塞来昔布的影响

目的探讨兔冠状动脉粥样硬化组织环氧化物酶-2(Cox-2)、诱导型前列腺素合成酶-1(mPGES-1)表达机制及塞来昔布对其表达的影响。方法采用32只雄性新西兰大白兔,正常对照组8只(A 组);另24只将给予1%高胆固醇喂养2周,建立兔动脉粥样硬化动物模型。将模型兔随机分为无干预组(B 组)、小剂量塞来昔布治疗组(15mg/kg,C 组),大剂量塞来昔布治疗组(35 mg/kg,D 组),每组8只。治疗4周后取双侧冠状动脉并分为平等2段,分别行半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印记法(Western blot)测定各组冠状动脉粥样硬化组织 Cox-2及 mPGES-1表达。结果与 A 组比较,B 组冠状动脉粥样硬化组织 Cox-2及 mPGES-1表达增高,差异具有统计学意义(P<0.05);与 B 组比较,C、D 组冠状动脉组织的 Cox-2及 mPGE-1表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);与 B 组比较,C 组的 ALD 明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在动脉粥样硬化的病理过程中炎症反应可能起着主导作用,塞来昔布干预可抑制 Cox-2及 mPGES-1表达,减缓动脉粥样硬化的进展。

前列腺素合成酶D2与非小细胞肺癌及肺癌相关性分析

目的探讨前列腺素合成酶D2在肺癌发生发展和淋巴细胞浸润相关免疫反应中的作用。方法通过生物信息学分析和肺癌组织芯片中前列腺素合成酶D2在不同临床分期表达水平进行检测。结果前列腺素合成酶D2(PTGDS)在肺鳞癌和肺腺癌中的低表达(P<0.05);肺腺癌以及肺鳞癌中DC细胞浸润程度较高,肺腺癌中B细胞以及CD4+T细胞浸润程度与PTGDS表达量呈正相关。结论PTGDS在肺癌中的表达情况提示,PTGDS可能有促进淋巴细胞免疫反应及肺癌发生发展的作用。

前列腺素合成酶在肾及胃分布的探讨

前列腺素合成酶是人体内重要的酶系,对其的研究目的旨在为临床医学、病理学提供形态学参考依据。

血竭有效组分对前列腺素合成酶系作用的研究

目的 :观察血竭有效组分对猪肺微粒体中前列腺素合成酶系的作用。方法 :分离提取血竭有效组分 ,制备猪肺微粒体酶 ,分析药物对 6 酮 前列腺素F1α( 6 keto PGF1α)和血栓素B2 (TXB2 )生成的影响。结果 :组分A、C、D与阿司匹林作用类似 ,同时降低两者水平 (P <0 .0 1) ,而组分B显示选择性作用 ,即提高 6 keto PGF1α水平 ,而减少TXB2 形成。结论 :血竭对环氧化酶和TXA2 合成酶的抑制作用以及对PGI2

前列腺素合成和代谢酶与分娩发动

人妊娠分娩的发动机制尚不完全清楚,已知前列腺素在此过程中起重要作用。近来研究发现前列腺素15-羟基脱氢酶(15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase,PGDH)决定胎膜和胎盘部位前列腺素浓度,在分娩发动时局部胎膜此酶活性降低,前列腺素合成增加。

前列腺素合成酶基因调控与前列腺疾病关系的研究进展

前列腺素合成酶(PGS)能催化各种类型前列腺素的生成,调节相关物质的基因表达水平,其基因调控机制与前列腺疾病的发生和发展密切相关。目前有关PGS在前列腺疾病如良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)中调控机制的研究很少,鲜有研究直接对PGS基因调控与前列腺疾病关系进行探讨。本文拟对两者的关系进行分析,为从干预PGS调控途径防控BPH和PCa提供研发思路。

血红蛋白在抗炎药物抑制前列腺素合成酶方面的影响

前列腺素是由花生四烯酸在许多组织中合成的。从绵羊精囊腺匀浆中产生的前列腺素大部分是E型。谷胱甘肽和氢醌在前列腺素E生物合成方面有促进作用。它们也能促进抗炎药物对前列腺素合成酶的抑制作用。血红蛋白也有促进前列腺素合成酶的作用.在实验中初步发现。

体外催化花生四烯酸生产前列腺素F_(2α)

前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))具有广泛的生理活性,是一种重要的脂质介质。为了实现PGF_(2α)的绿色生物合成,构建了pET30a-TbPGFS、pET30a-MmPGHS、pET30a-GvPGHS载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达,同时对异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达条件进行了优化以提高重组蛋白在大肠杆菌中的表达量。另外,以最佳诱导表达条件下得到的重组蛋白为催化剂,催化花生四烯酸合成PGF_(2α)。结果表明:MmPGHS蛋白在大肠杆菌中没有表达;GvPGHS蛋白的最佳诱导表达条件为诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导温度30℃、诱导时间2 h,TbPGFS蛋白的最佳诱导表达条件为诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导温度30℃、诱导时间6 h;在最佳诱导表达条件下,由GvPGHS和TbPGFS的粗酶液构成的双酶催化未能检测到产物PGF_(2α),而在酶偶联化学催化时,GvPGHS能将花生四烯酸转化为PGH_(2),PGH_(2)被SnCl_(2)进一步还原为PGF_(2α)。综上,通过体外酶促反应结合化学法可高效转化花生四烯酸生产PGF_(2α)。

脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶在恶性肿瘤中的研究进展

脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)是脂质运载蛋白超家族成员中较重要的成分,除参与前列腺素合成和脂质转运外,其近年在恶性肿瘤中相关作用的研究也引起了广泛关注。L-PGDS基因在人类多种恶性肿瘤中表达异常,且与肿瘤患者预后有关,其可能通过参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移和凋亡等生物学行为过程,促进肿瘤的发生和发展。因此,较全面地阐明L-PGDS基因在人类恶性肿瘤中的的作用机制将为未来发现新的肿瘤标志物和治疗靶点提供新思路。

人颈动脉粥样硬化斑块环氧化物酶-2及I型前列腺素合成酶的表达

目的探讨环氧化物酶-2（cyclooxygenase type2，COX-2）及I型前列腺素合成酶（membrane associated prostaglandin E-1，mPGES-1）在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达变化及作用机制。方法收集24例人颈动脉粥样硬化斑块标本和10例肠系膜动脉标本做对照组，应用免疫组织化学及逆转录PCR方法测定COX-2及mPGES-1mRNA表达水平，Western印记方法检测COX-2及mPGES-1的蛋白表达水平。比较不同程度动脉粥样硬化组织间COX-2、mPGES-1 mRNA表达水平及蛋白表达水平。结果颈动脉粥样硬化斑块组的免疫组织化学染色检测COX-2和mPGES-1呈阳性表达，斑块组COX-2 mRNA和mPGES-1 mRNA表达与对照组相比上调，差异有统计学意义（P〈0．05）；COX-2及mPGES-1 mRNA上调水平相关（P〈0．05）：颈动脉粥样硬化斑块的COX-2蛋白表达上调水平与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；颈动脉粥样硬化斑块COX-2、mPGES-1 mRNA及蛋白表达水平与病理损害程度有关，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论COX-2及mPGES-1基因表达水平上调可能是进展性动脉粥样硬化损害的关键因素。

胰腺癌相关性成纤维细胞中前列腺环素合成酶对胰腺癌细胞作用研究

目的探究胰腺癌相关性成纤维细胞(CAFs)中的前列腺环素合成酶(PGIS/PTGIS)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关作用机制。方法利用GEPIA、Kaplan-Meier等数据库分析PGIS在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达差异;通过q-PCR检测PGIS在CAFs及人胰腺星状细胞(HPSC)中的表达差异;通过CoCl_(2)化学诱导构建肿瘤微环境缺氧模型,检测胰腺癌及CAFs细胞的PGIS表达水平;利用siRNA转染、慢病毒感染的方式分别构建敲低和过表达PGIS的CAFs细胞,通过CCK-8增殖、Transwell迁移及侵袭等实验探究敲低和过表达PGIS的CAFs细胞对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过小鼠胰腺原位成瘤探究过表达PGIS的CAFs细胞在体内对胰腺癌细胞增殖的影响;通过Western blot检测过表达PGIS的CAFs细胞对胰腺癌PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响。结果GEPIA、Kaplan-Meier数据库分析显示,与正常胰腺组织相比,PGIS在胰腺癌组织中高表达,并且与患者不良预后相关(P<0.05);与HPSC细胞相比,PGIS在CAFs细胞中显著高表达(P<0.05);胰腺癌及CAFs细胞在缺氧微环境中PGIS的表达水平明显上调(P<0.05);与对照组相比,敲低CAFs中的PGIS后,胰腺癌细胞的增殖速率明显减慢,细胞迁移和侵袭数量均明显减少(P<0.05);与对照组相比,过表达CAFs中的PGIS后,胰腺癌细胞的增殖速率明显加快,细胞迁移和侵袭数量均明显增多(P<0.05);与对照组相比,过表达PGIS的CAFs在体内可促进胰腺肿瘤的生长(P<0.05);与对照组相比,过表达CAFs中的PGIS后可明显上调VEGFA、p-Akt的蛋白表达水平(P<0.05),也可明显上调FGF-2、α-SMA及MMP-9的mRNA水平(P<0.05)。结论PGIS在胰腺癌组织中呈高表达,CAFs中的PGIS可能通过调节PI3K/Akt信号通路正向调控VEGFA的表达上调,促进胰腺癌细胞的增殖和侵袭,参与胰腺癌的发生、发展。

前列腺素合成酶2在前列腺癌和前列腺增生中的表达及其意义

目的 研究前列腺素合成酶 (COX) 2在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及与临床的关系。 方法 随机选择 42份前列腺增生和 16份前列腺癌患者的手术标本 ,从定性和定量两个方面分别采用免疫组织化学和蛋白印记方法对COX 2蛋白的表达进行研究。 结果 16份前列腺癌标本中 ,15份COX 2呈阳性表达 ,占 93 8% ;42份前列腺增生的组织中 ,只有 11份有COX 2的表达 ,占 2 6 % ,两者差异有非常显著意义 (直接概率法P <0 0 1)。且COX 2高表达的前列腺癌患者预后不佳。 结论 COX 2在前列腺癌组织中表达增强 。

人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂 疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合 。

人睾丸前列腺素D合成酶重组表达质粒的构建与鉴定

目的 :构建高效表达人睾丸前列腺素D合成酶 (htL PGDS)的重组表达质粒。 方法 :以经测序证实为人L PGDS的人睾丸L PGDScDNA为模板进行PCR扩增 ,得到编码L PGDS的基因片段 ,用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ进行酶切后 ,连接到经相同内切酶处理的原核表达载体pGEX 2T中。重组质粒pGEX 2T/htL PGDS被进一步转化感受态大肠杆菌JM10 3 ,转化物接种到含氨苄青霉素的LB平板 ,37℃培养 12～ 16h后 ,挑取氨苄青霉素抗性菌落 ,并接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中 ,37℃、16 0r/min培养 12～ 16h后 ,提取质粒DNA供PCR和双酶切鉴定。 结果 :共筛选出氨苄青霉素抗性菌落 10 9个 ,经PCR和双酶切鉴定出 10个重组质粒pGEX 2T/htL PGDS。结论 :重组表达质粒pGEX 2T/htL PGDS的构建及正确鉴定 ,为以后的重组抗原的表达、纯化及单克隆抗体的制备奠定了基础。