前列腺素D_(2)对大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织中细胞因子和损伤相关因子表达的影响

以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,运用ELISA、荧光定量PCR、HE染色和免疫荧光法分析了内源性和外源性前列腺素D_(2)(prostaglandin D_(2),PGD_(2))在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)感染奶牛子宫内膜组织过程中对细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和损伤相关因子(HMGB-1)表达的调控作用。结果显示,与空白对照组相比较,E.coli感染组奶牛子宫内膜组织中COX-2和H-PGDS的基因表达显著升高(P<0.001);PGD_(2)分泌量也显著上升(P<0.001);内源性PGD_(2)抑制剂(H-PGDS inhibitor 1、HQL-79)能够显著抑制E.coli感染奶牛子宫内膜组织中促炎细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的分泌、损伤相关因子(HMGB-1)的表达并减轻了组织损伤;外源性添加PGD_(2)后可显著促进E.coli感染奶牛子宫内膜组织中促炎细胞因子的分泌,HMGB-1的表达及组织损伤程度明显增加。结果表明,PGD_(2)能够通过调控E.coli感染奶牛子宫内膜组织的过程促炎细胞因子和损伤相关因子的表达,进而加剧了由细菌感染引起的组织损伤。

前列腺素D_(2)受体拮抗剂关键中间体的工艺改进

前列腺素D_(2)受体拮抗剂是治疗哮喘和过敏性疾病的潜在药物,其关键中间体合成方法尚不成熟。以N-乙酸叔丁酯吲哚和环状苯并磺酰醛亚胺为底物,自制的新型螺环噁唑啉为配体,路易斯酸为催化剂,通过催化的傅克烷基化反应制备了前列腺素D_(2)受体拮抗剂的关键中间体。配体筛选过程发现:不同的配体对反应的收率起到关键作用,其中螺环喹啉噁唑啉配体和三氟甲磺酸锌复合物催化的反应收率最高,且未产生开环结构的双吲哚副产物。通过对反应溶剂,底物物质的量比例,反应温度等反应条件的研究,确定了最佳的反应条件:以二氯甲烷为反应溶剂,N-乙酸叔丁酯吲哚和环状苯并磺酰醛亚胺物质的量之比为1∶1,0℃反应时,收率最高可达97%。该工艺反应条件温和,使用了廉价且环境友好的催化剂,避免使用传统工艺中腐蚀性和易制爆物料。

在LPS诱导的天然免疫反应中前列腺素D_(2)与TLR2和TLR4的相互调控作用

体外培养小鼠腹腔巨噬细胞后通过实时荧光定量PCR、Western blot、ELISA和流式细胞仪检测,分析模式识别受体TLR2和TLR4对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导巨噬细胞前列腺素D合成酶表达和PGD_(2)分泌的影响。结果显示,在TLR2或TLR4缺失的情况下,LPS诱导巨噬细胞中H-PGDS和COX-2基因或蛋白的表达(P<0.05),以及PGD_(2)的分泌(P<0.01)会受到不同程度的影响。此外,分析了内外源性PGD_(2)对LPS诱导巨噬细胞TLR2和TLR4表达的影响。结果显示,前列腺素D合成酶抑制剂HQL-79和H-PGDS inhibitorⅠ预处理可显著下调LPS诱导TLR2的表达(P<0.001)。但是,当使用外源性PGD_(2)后,LPS诱导巨噬细胞TLR4的表达水平发生显著下调,而不是TLR2(P<0.05)。结果表明,TLR2和TLR4参与LPS诱导巨噬细胞中PGD_(2)合成分泌,且内外源性PGD_(2)对LPS刺激巨噬细胞诱导TLR2和TLR4的表达具有不同调控作用。

前列腺素D_(2)对大肠杆菌诱导的小鼠巨噬细胞细胞因子分泌的影响

通过体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,分析内源性和外源性前列腺素D2(PGD2)对大肠杆菌诱导的促炎性细胞因子(TNF-α和IL-1β)、抗炎因子(IL-10)和趋化因子(RANTES)分泌的影响。结果显示,大肠杆菌诱导的巨噬细胞PGD2合成分泌依赖于细胞中TLR2(TLR2)、TLR4(TLR4)和NLRP3(NLRP3)的存在。大肠杆菌诱导的巨噬细胞细胞因子分泌一定程度上依赖于内源性PGD2的合成分泌(P<0.001)。此外,外源性PGD2能够上调大肠杆菌刺激后巨噬细胞促炎性细胞因子(TNF-α和IL-1β)的分泌(P<0.001),同时对抗炎因子(IL-10)和趋化因子(RANTES)的分泌具有下调作用(P<0.001)。结果表明,PGD2对大肠杆菌诱导的巨噬细胞细胞因子分泌具有一定的调控作用。