吴茱萸碱介导前列腺素E受体2/Nod样受体蛋白3通路对原发性痛经大鼠的影响

目的 探讨吴茱萸碱对原发性痛经大鼠的改善作用及其可能的作用机制。方法 将雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组和吴茱萸碱低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠均构建原发性痛经大鼠模型,吴茱萸碱低、中、高剂量组大鼠分别灌胃10、20、40 mg·kg^(-1)吴茱萸碱,阳性对照组大鼠每天灌胃2.1 g·kg^(-1)痛经宝颗粒,正常组和模型组大鼠灌胃等量的0.9%NaCl。记录各组大鼠扭体次数和扭体潜伏期,以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清相关因子表达水平和子宫组织Ca^(2+)含量,以硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法分别检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,以苏木精-伊红(HE)染色观察子宫病理学变化,以蛋白质印迹法检测子宫组织蛋白表达水平。结果 正常组、模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱中剂量组、吴茱萸碱高剂量组和阳性对照组前列腺素F2α(PGF2α)/前列腺素E2(PGE2)值分别为0.73±0.07、2.35±0.44、1.84±0.18、1.40±0.17、1.04±0.12和0.97±0.14;Ca^(2+)含量分别为(1.00±0.17)、(2.57±0.33)、(2.01±0.24)、(1.68±0.11)、(1.38±0.16)和(1.78±0.10)nmol·gprot^(-1);MDA水平分别为(3.11±0.19)、(5.07±0.19)、(4.54±0.18)、(4.01±0.13)、(3.37±0.25)和(4.25±0.37)nmol·mL^(-1);前列腺素E受体2(EP2)蛋白水平分别为0.25±0.03、0.75±0.09、0.62±0.06、0.53±0.06、0.32±0.03和0.72±0.07;Nod样受体蛋白3(NLRP3)蛋白水平分别为0.35±0.04、0.87±0.07、0.71±0.03、0.58±0.04、0.42±0.03和0.82±0.05;胱天蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平分别为0.40±0.06、0.90±0.07、0.73±0.07、0.59±0.06、0.45±0.03和0.86±0.07;以上指标,模型组与正常组比较,吴茱萸碱低、中、高剂量组分别与模型组比较,吴茱萸碱各剂量组之间比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 吴茱萸碱可能通过抑制EP2/NLRP3/caspase-1通路,改善大鼠原发性痛经。

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法将HBZY-1细胞分为5组:正常组、LPS组(100 ng·m L^(-1)LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^(-1)LPS+0.5μmol·L^(-1)雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)川陈皮素+0.5μmol·L^(-1)雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot法检测AMPK/NLRP3信号通路蛋白水平。结果与正常组比较,LPS组CAT、SOD、GSH水平、细胞OD值以及AMPK蛋白水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及NLRP3蛋白水平明显升高(P<0.05)。与LPS组比较,川陈皮素组CAT、SOD、GSH水平、OD值以及AMPK蛋白水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及NLRP3蛋白水平明显下降(P<0.05);而雷帕霉素组以上指标均呈现与川陈皮素组相反的趋势(P<0.05)。与川陈皮素组比较,川陈皮素+雷帕霉素组以上指标均呈现与川陈皮素组相反的趋势(P<0.05)。结论川陈皮素可能通过上调AMPK/NLRP3信号通路减轻LPS诱导的肾小球系膜细胞细胞炎性损伤。下调AMPK/NLRP3信号通路可消除川陈皮素对LPS诱导的肾小球系膜细胞细胞炎性损伤的改善作用。

前列腺素E2调节大鼠成骨细胞RANKL／OPGmRNA表达的信号通路研究

目的探讨前列腺索E2（PGE2）对大鼠成骨细胞RANKL和OPGmRNA表达的调节及其信号转导机制。方法培养大鼠UMR106成骨细胞，采用不同浓度的PGE2、不同信号通路的激动剂和阻断剂干预细胞不同时间后收集细胞提取总RNA，实时荧光定量PCR检测RANKL和OPGmRNA的表达水平。结果PGE2、Forskolin和db—cAMP均可促进RANKLmRNA表达，抑制OPGmRNA的表达。PMA促进RANKL和OPGmRNA表达而A23187则下调RANKL和OPG表达。KT-5720下调PGE2诱导的RANKLmRNA表达约53％（P〈0．001），而chelerythrine、维拉帕米、W7、KN-62和PD98059则对PGE，诱导的RANKLmRNA表达无明显影响（P〉0．05）。KT-5720（P=0．01）、维拉帕米（P=0．029）和W7（P〈0．001）均能部分阻断PGE，对OPGmRNA表达的下调作用，KN-62、PD98059和chelerythrine则不影响PGE2对OPG表达的调节（P〉0．05）。结论PGE2诱导的RANKL表达是由PKA信号通路介导的，而PKA和钙／钙调蛋白信号通路则介导了PGE2对OPG表达的抑制作用。

前列腺素E受体在抑制人肺巨噬细胞炎性反应中的作用

前列腺素E2(PGE2)是花生四烯酸的环氧合酶-2代谢产物,在不同组织中具有多种生物功效;而这些功能主要由4种特异的膜G蛋白偶联前列腺素E受体(EP1、EP2、EP3 和EP4)调控发挥作用[1]。PGE2具有抑制肺巨噬细胞释放炎性因子的作用[2],但究竟通过哪个EP受体信号通路调控尚不清楚。因此,本研究拟以原代培养的人肺巨噬细胞为研究对象,利用新型EP受体激动剂和拮抗剂研究EP受体信号通路在PGE2发挥抗炎效应中的作用。

鹰嘴豆芽素A通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻卵清蛋白诱导哮喘大鼠的气道炎症

[目的]探讨鹰嘴豆芽素A(BCA)通过调节Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘大鼠气道炎症的影响。[方法]将SD大鼠分为对照(CK)组、模型(Model)组、低剂量BCA组(BCA-L组,25 mg/kg)、高剂量BCA组(BCA-H组,100 mg/kg)、地塞米松阳性对照组(Dex组,1 mg/kg)、BCA-H+LPS(TLR4激活剂)组(100 mg/kg+0.1 mg/kg),每组12只。除CK组,其他组均通过OVA诱导构建哮喘大鼠模型。建模成功24 h后,进行给药处理,给药每日1次,持续10 d。利用动物肺功能测定仪检测大鼠吸气阻力、呼气阻力、肺通气顺应性的变化;吉姆萨(Giemsa)染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;苏木精-伊红染色法(HE)染色检测大鼠肺组织病理变化;免疫组化检测大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测大鼠肺组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达。[结果]与CK组比较,Model组大鼠吸气阻力、呼气阻力、BALF中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平升高,肺组织中的支气管及血管周围炎性细胞浸润明显,肺组织中Eotaxin阳性染色面积百分数、TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达升高,肺通气顺应性降低(P<0.05);与Model组比较,BCA-L组、BCA-H组、Dex组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);LPS减弱了高剂量BCA对哮喘大鼠气道炎症的改善作用。[结论] BCA可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻OVA诱导哮喘大鼠的气道炎症。

牡荆素调控AMPK/NLRP3途径介导的细胞焦亡对大鼠急性咽炎的作用机制研究

目的:基于AMPK/NLRP3信号通路探究牡荆素对大鼠急性咽炎的影响及其调控机制。方法:60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、阿莫西林组和牡荆素低、中、高剂量组,每组各10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用咽部定向喷射25%氨水的方法构建急性咽炎模型。牡荆素各剂量组大鼠分别腹腔注射3、6、12 mg/kg牡荆素;阿莫西林组大鼠给予0.36 g/kg阿莫西林灌胃;其余腹腔注射等量0.9%生理盐水。各组大鼠于给药干预7 d后进行行为状态评分、咽部组织病理学染色观察,并进行血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)检测,筛选出牡荆素最佳给药剂量;同时检测咽部组织焦亡相关蛋白及AMPK/NLRP3表达。随后将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、牡荆素组(腹腔注射12 mg/kg牡荆素)、牡荆素+CC(AMPK抑制剂)组(腹腔注射12 mg/kg牡荆素后,立刻注射20 mg/kgCC),每组各10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用咽部定向喷射25%氨水的方法构建急性咽炎,造模后使用相应药物干预,1次/d,共干预7 d。苏木素-伊红(HE)染色观察咽部组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平;Western blot检测咽部组织AMPK/NLRP3通路及细胞焦亡相关蛋白表达。结果:与模型组相比,牡荆素各剂量组大鼠行为状态评分均显著降低(P<0.05),血清IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平降低(P<0.05),咽部组织病理性损伤明显减轻,且呈剂量相关性,筛选得出牡荆素12 mg/kg为最佳给药剂量。与模型组相比,牡荆素组大鼠咽部组织p-AMPK蛋白阳性率明显升高,NLRP3蛋白阳性率明显降低,细胞焦亡相关蛋白表达明显降低(P<0.05)。与牡荆素组相比,牡荆素+CC组大鼠咽部组织损伤程度加重,血清IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平,细胞焦亡相关蛋白和NLRP3蛋白表达显著升高,p-AMPK/AMPK降低(P<0.05)。结论:牡荆素能够通过调控AMPK/NLRP3信号通路,抑制细胞焦亡,进而改善大鼠急性咽炎。

基于嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7的资生肾气丸镇痛机制研究

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用。方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1 h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型。观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E 2(PGE 2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况。结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE_(2)、NGF的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P<0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近。结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

基于Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路探讨异荭草苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨异荭草苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果及其作用机制。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(600 mg·kg^(-1))、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1))、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))及异荭草苷对照组(50 mg·kg^(-1)),每组8只。小鼠自由饮用2%DSS溶液复制UC模型,实验进行3周后,各给药组给予相应药物灌胃治疗4周。给药结束后,称取体质量,摘眼球取血,剖取结肠组织。采用苏木素-伊红(HE)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)法观察小鼠结肠组织病理形态变化;透射电子显微镜观察小鼠结肠组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)和髓过氧化物酶(MPO)水平;免疫组化法检测小鼠结肠组织中半乳糖凝集素(Gal-3)蛋白表达;免疫荧光法检测黏蛋白(MUC2)表达及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量明显下降,结肠长度明显缩短,肠质量指数明显增加(P<0.01);小鼠肠黏膜结构紊乱,微绒毛稀疏,隐窝结构见大量炎性细胞浸润,线粒体肿胀明显,杯状细胞明显减少;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达减少及NLRP3和ASC共定位增强;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显增加,Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,异荭草苷低、高剂量组小鼠体质量明显上升,结肠长度明显增长,肠质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);肠黏膜、微绒毛及线粒体结构明显恢复,炎性浸润减轻,杯状细胞明显增加;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达增加,NLRP3和ASC共定位减弱;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,Occludin和ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论异荭草苷对DSS诱导的UC小鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路,保护肠黏膜屏障有关。

川陈皮素调节Notch/NF-κB/NLRP3信号通路对类风湿关节炎大鼠炎性损伤的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节神经源性基因同源蛋白(Notch)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠炎性损伤的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、NOB低剂量组(NOB-L组,50 mg/kg)、NOB高剂量组(NOB-H组,100 mg/kg)、NOB高剂量+Notch激活剂Jagged1组(NOB-H+Jagged1组,100 mg/kg NOB+50 mg/kg Jagged1)。于给药第0天与末次给药后对各组大鼠进行关节炎指数评价。自给药第0天开始,每7天测定1次大鼠足趾肿胀度。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数;HE染色观察每组大鼠踝关节滑膜足趾病理学变化;ELISA法检测各组大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;RT-qPCR法测定各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA表达;Western blot检测各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果1)RA的病情进展:与Control组相比,Model组大鼠关节炎指数和足趾肿胀度显著上升(P<0.05),滑膜组织病理学损伤严重。2)大鼠脏器指数及炎性因子变化:与Control组相比,Model组大鼠胸腺和脾脏指数显著上升(P<0.05),血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升(P<0.05)。3)Notch/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达变化:与Control组相比,Model组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA和蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Model组相比,NOB-L、NOB-H组相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05),滑膜组织病理学损伤有所减轻。Jagged1减弱了NOB对RA大鼠炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论NOB可能通过下调Notch/NF-κB/NLRP3信号通路,减轻RA大鼠的炎性损伤。

甘草酸通过ROS依赖性NLRP3炎性通路减轻缺氧H9c2细胞损伤的实验研究

目的:观察甘草酸(GA)对缺氧H9c2细胞炎症、氧化应激的影响,并探讨其潜在作用机制。方法:将正常培养的H9c2细胞设置为对照组,缺氧培养H9c2细胞设置为缺氧组;GA、GA+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)处理的缺氧H9c2细胞设置为缺氧+GA组、缺氧+GA+NAC组;将生理盐水、双蒸水+GA处理的缺氧H9c2细胞设置为缺氧+生理盐水组、缺氧+GA+双蒸水组。采用细胞计数试剂盒(CCK8)、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法测定细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS);实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞NOD样受体蛋白3(NLPR3)mRNA表达。结果:与对照组比较,缺氧组H9c2细胞存活率、EdU阳性率均降低,细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量及ROS、NLRP3 mRNA水平均升高,SOD含量降低(P<0.05);与缺氧+生理盐水组比较,缺氧+GA组H9c2细胞存活率、EdU阳性率均升高,细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量及ROS、NLRP3 mRNA水平均降低,SOD含量升高(P<0.05)。与缺氧+GA+双蒸水组比较,缺氧+GA+NAC组H9c2细胞ROS、NLRP3及TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA降低,SOD含量升高(P<0.05)。结论:GA可减轻缺氧诱导H9c2细胞的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性NLRP3炎性通路有关。

根皮素对2型糖尿病肾病小鼠的肾保护作用及机制

为探究根皮素对2型糖尿病肾病小鼠肾损伤的分子保护作用及潜在机制,将小鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、阳性药物组(二甲双胍500 mg/kg)、根皮素低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg·d)。造模成功后,各组小鼠灌胃给予相应药物,12周后,观察肾脏肥大指数、肾脏病理形态学变化,测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和尿β2-微球蛋白(β2-MG)、血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)等指标,并检测肾组织丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达。结果显示:与模型组比较,根皮素中、高剂量组小鼠肾脏肥大指数极显著减小(P<0.01);HE染色和Masson染色见肾小球体积明显减小、系膜增生明显减少,肾小球和肾间质纤维化明显减轻;血BUN、Scr、IL-1β、IL-18和肾组织MDA含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ι(CollagenΙ)、NLRP3、IL-1β和Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01);肾组织GSH-Px活性、Nrf2、HO-1、钙粘附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达显著升高(P<0.05)。结果表明:根皮素能保护2型糖尿病肾病小鼠肾功能改善肾纤维化,可能与调控Nrf2/HO-1/NLRP3通路改善氧化应激与炎症反应有关。

嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7及其下游分子在痛风性关节炎中作用机制的研究进展

目前随着痛风性关节炎的发病率逐年上升,对该病炎性反应及疼痛机制的研究越来越多,该病主要由尿酸盐沉积及ATP刺激P2X7R、Nod样受体蛋白3、NEK7表达诱导炎性反应递质成熟与分泌所致,但具体机制尚不明确。现对P2X7R、NLRP3、NEK7的国内外研究进展进行综述,以探讨GA炎性反应及疼痛的发病机制,为防治GA提供新思路与治疗靶点。

益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面TGF-β/ALK5/Smad2/3通路的影响

目的 :探讨益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面转化生长因子-β(TGF-β)/激活素受体样激酶(ALK)5/Smad蛋白2/3通路的影响。方法 :将50只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、糖尿病对照组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,运用Westernblot技术手段分别检测各组肉芽增生期创面成纤维细胞ALK5/Smad2/3的表达水平。结果:糖尿病对照组ALK5表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组ALK5表达水平明显低于糖尿病对照组(P<0.05),其与益气组、化瘀组、正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。糖尿病对照组smad2表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组smad2表达水平与各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病对照组smad3表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组smad3表达水平低于化瘀组(P<0.05),明显低于糖尿病对照组、益气组(P<0.01),高于正常对照组(P<0.05)。结论:糖尿病创面难以愈合及瘢痕形成的机制可能与ALK5/Smad2/3通路有关,益气化瘀中药可能通过抑制ALK5/Smad2/3通路,加速创面愈合,减少瘢痕形成。

基于Nrf2-NLRP3-GSDMD信号通路探讨肾消解毒通络方含药血清抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡的分子机制

目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2 related factor2,Nrf2)-Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)信号通路,探究肾消解毒通络方(Shenxiao Jiedu Tongluo Recipe,SJTR)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1焦亡的影响及分子机制。方法金黄地鼠灌胃给药制备SJTR含药血清。体外常规培养HBZY-1细胞,随机分为对照组、模型组、抑制剂组及中药低中高剂量6组。对照组细胞加入正常血清在低糖培养液中培养,模型组加入正常血清在高糖培养液中培养,抑制剂组加入正常血清及MCC950在高糖培养液中培养,中药低中高剂量组分别加入SJTR含药血清在高糖培养液中培养,干预24 h后收集细胞及上清液,ELISA检测各组细胞上清液中白介素-1β(Interleukin,IL-1β)、IL-18(Interleukin,IL-18)、IL-6(Interleukin,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);RT-PCR检测HBZY-1细胞Nrf2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子mRNA表达;Western blot法检测各分子蛋白的表达;免疫荧光法检测NLRP3分子蛋白的表达及分布;LDH释放实验检测细胞膜损伤情况;TUNEL染色检测DNA损伤情况。结果与对照组比较,模型组细胞上清液各炎症因子水平升高,MDA表达升高,SOD表达降低(P<0.05);细胞Nrf2分子呈低表达,IL-1β分子mRNA表达升高,NLRP3、Casepase-1、GSDMD分子mRNA及蛋白表达增强(P<0.05);上清液LDH含量增高(P<0.05);TUNEL阳性细胞增多。与模型组比较,中药中高剂量组及抑制组细胞上清液炎症因子含量下降,MDA水平降低而SOD升高(P<0.05);细胞Nrf2分子表达上调,而NLRP3、Caspase-1、GSDMD等分子表达明显降低(P<0.05);上清液LDH含量下降(P<0.05);TUNEL阳性细胞减少。结论SJTR含药血清可通过调控Nrf2-NLRP3-GSDMD信号通路各分子表达,抑制高糖诱导的HBZY-1细胞氧化应激及炎症反应,拮抗细胞焦亡,发挥细胞保护作用。

前列腺素E2及其受体在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜病变中的作用及机制研究

目的:探究前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)及其受体前列腺素E2受体(E-prostanoid2 receptor,EP2R)在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜病变中的作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为6组:对照组使用标准饲料喂养;其他组大鼠使用高脂高糖饲料喂养+腹膜内注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型;PGE2组、Butaprost组、AH6809组大鼠分别给予玻璃体腔内注射5 mmol/L的PGE2、EP2R激动剂Butaprost或EP2R抑制剂AH6809,注射剂量为6μL。DMSO组注射等剂量DMSO盐溶液。每周注射1次,共注射4周。通过苏木精伊红(HE)染色评价视网膜病变;免疫组化或蛋白质印迹分析视网膜组织中EP2R、胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、内皮一氧化氮合酶(eNOS)、核因子κB p65(NF-κB p65)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。此外,分别应用PGE2、Butaprost或AH6809处理高糖培养基(4.5 g/L葡萄糖)培养的视网膜微血管内皮细胞系(HRMEC),并检测各组细胞活力、细胞凋亡率和血管生成情况。结果:与正常视网膜组织相比,糖尿病大鼠视网膜组织中EP2R呈显著高表达(P<0.05)。与对照组和模型组相比,PGE2和Butaprost组的EP2R、IRS-1、p-PI3K、p-Akt、ICAM-1、eNOS、NF-κBp65和VEGF的表达水平显著升高,而AH6809组的上述蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。体外研究中,与对照组和模型组HRMEC相比,PGE2和Butaprost处理的HRMEC的活力和血管生成数量显著升高,而细胞凋亡率显著降低,AH6809处理则抑制了上述细胞改变(P<0.05)。结论:PGE2/EP2R可能通过促进IRS-1/PI3K/Akt信号通路介导的炎症反应、细胞凋亡和血管生成促进糖尿病视网膜病变的发生和发展。

mitoTEMPO通过调控线粒体自噬对慢性肾脏病模型大鼠足细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨线粒体靶向的2, 2, 6, 6-四甲基哌啶-1-氧基-4-氨基-2-氧基乙基(mitochondria-targeted 2, 2, 6, 6-tetramethylpiperidin-1-oxyl-4-amino-2-oxyethl,mitoTEMPO)对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型大鼠足细胞损伤的影响及其相关分子机制。方法 18只健康SD大鼠随机分为对照(Control)组、模型组(CKD组)和mitoTEMPO组,每组6只。采用全自动生化分析仪测定肾功能;苏木素-伊红染色检测肾病理结构;免疫组织化学法检测肾脏肌间质蛋白(desmin)和足突蛋白(podocin)表达;透射电镜检测足细胞超微结构;免疫荧光共染检测足细胞线粒体自噬;实时荧光定量PCR检测肾脏炎性因子表达;蛋白免疫印迹法检测Nod样受体家族成员蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体,自噬和帕金蛋白(Parkin)/PTEN诱导假定激酶1(PTEN induced putative kinase1,PINK1)通路相关蛋白表达。结果 与Control组比较,CKD组大鼠24h尿蛋白(84.89±8.98 mg/24h vs 5.79±1.39mg/24h),血清肌酐(serum creatinine,Scr)(75.10±10.46μmol/L vs 38.57±4.89μmol/L),尿素氮(urea nitrogen,BUN)(8.96±1.07 mmol/L vs 2.73±0.43mmol/L)水平升高,差异具有统计学意义(t=21.322,7.749,13.233,均P<0.001);肾小球体积增大、系膜增生、大量炎性细胞浸润;足细胞足突融合,基底膜增厚,线粒体嵴断裂和空泡化;desmin阳性区增多,podocin阳性区减少,差异具有统计学意义(t=9.903,7.651,均P<0.001);p62和desmin可见共定位;LC3 II/I,PINK1和Parkin蛋白表达降低(t=16.984,15.105,11.390),IL-1β,TNF-α,NLRP3,cleaved caspase-1和p62蛋白表达升高(t=5.700~21.571),差异具有统计学意义(均P<0.001)。与CKD组比较,mitoTEMPO组24h尿蛋白、Scr和BUN水平降低,差异具有统计学意义(t=12.508,4.712,7.338,均P<0.001);肾脏病理损伤和足细胞情况显著改善;desmin阳性区减少,podocin阳性区增多(t=6.649,7.686,均P<0.001);LC3和COX IV可见共定位;LC3 II/I,PINK1和Parkin蛋白表达升高(t=15.481,20.469,5.801),IL-1β,TNF-α,NLRP3,cleaved caspase-1和p62蛋白表达降低(t=3.477~9.681),差异具有统计学意义(均P<0.001)。结论mitoTEMPO对CKD足细胞损伤可产生保护作用,其机制可能与激活PINK1/parkin通路介导的线粒体自噬来抑制NLRP3炎症小体有关。

电针对帕金森病小鼠Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)小鼠黑质中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响,探讨其神经保护机制。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、假电针组、电针组,每组10只。采用鱼藤酮灌胃4周建立PD小鼠模型。电针组于“风府”和双侧“太冲”“足三里”给予电针刺激,每日1次,连续2周;假电针组于同样穴位浅刺至皮下,连接电针仪后不通电,其余操作均同电针组。采用敞箱实验观察各组小鼠的行为学变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分升高(P<0.01),自主运动的总时间缩短、总路程减少、平均速度降低(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01),黑质中TH阳性表达减少(P<0.01),Nrf2mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18mRNA表达水平均升高(P<0.01)。与模型组、假电针组比较,电针组小鼠行为学评分降低(P<0.01),自主运动的总时间延长、总路程增加、平均速度升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05),黑质中TH阳性表达增加(P<0.01),Nrf2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,假电针组小鼠上述各项指标差异均无统计学意义。结论:电针“风府”“太冲”和“足三里”可改善PD小鼠运动障碍,减少黑质多巴胺神经元的丢失,抑制神经炎性反应,其作用机制可能与调控Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡相关。

川陈皮素对脂多糖诱导的牙周膜细胞损伤和NOD样受体蛋白3炎性通路的影响

目的 探讨川陈皮素(NOB)对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的影响及其机制。方法 将体外培养的hPDLCs分为对照组(不做处理)、模型组(10μg·mL^(-1) LPS处理24 h)和低、中、高剂量实验组(模型组的基础上分别使用5,10和20μmol·L^(-1) NOB处理24 h),采用流式细胞术和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测各组细胞凋亡率和细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6含量,以蛋白质印迹法检测细胞中微管相关蛋白1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶(caspase)-1和IL-1β蛋白表达水平。结果 对照组、模型组和低、中、高剂量实验组细胞存活率分别为(96.13±5.33)%,(62.47±4.19)%,(68.25±4.83)%,(75.77±5.07)%和(83.60±5.88)%,凋亡率分别为(5.05±1.31)%,(33.86±2.27)%,(28.63±2.22)%,(23.35±2.04)%和(17.51±1.91)%,Beclin-1蛋白表达水平分别为0.18±0.02,0.26±0.03,0.36±0.03,0.47±0.04和0.65±0.04,LC3Ⅱ/Ⅰ比值分别为0.16±0.02,0.23±0.03,0.56±0.03,1.08±0.06和1.65±0.13,NLRP3蛋白表达水平分别为0.18±0.02,1.15±0.10,0.80±0.05,0.52±0.03和0.19±0.02,ASC蛋白表达水平分别为0.12±0.02,0.55±0.03,0.47±0.03,0.38±0.04和0.25±0.03,caspase-1蛋白表达水平分别为0.09±0.02,0.63±0.04,0.50±0.03,0.35±0.02和0.23±0.02,IL-1β蛋白表达水平分别为0.15±0.02,0.57±0.04,0.48±0.03,0.36±0.03和0.20±0.03;模型组与对照组比较,低、中、高剂量实验组与模型组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 NOB可减轻LPS诱导的hPDLCs损伤,其作用机制可能与增强细胞自噬和NLRP3炎性通路活化有关。

雷公藤甲素对脂多糖诱导脊髓损伤小鼠及BV2小胶质细胞的调节作用及机制研究

目的:探讨雷公藤甲素(TPL)对脂多糖(LPS)诱导的脊髓损伤(SCI)小鼠及BV2小胶质细胞的调节作用,并探究TPL对抗炎症的可能机制。方法:将45只C57小鼠作为研究对象。15只作为对照组。30只采用改良Allen’s法制备小鼠SCI模型,其中15只不加干预作为SCI组,另15只行TPL治疗[0.2 mg/(kg·d)连续注射7 d]作为TPL组。采用HE染色评估各组脊髓组织损伤情况。采用运动功能评分(BBB)评估各组运动能力。再以BV2细胞为研究对象,分为对照组、LPS诱导组(100 ng/ml)以及TPL处理组(LPS 100 ng/ml+TPL 50 nmol/L)。采用ELISA法检测BV2细胞各组及小鼠各组炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量。采用生化方法检测一氧化氮(NO)含量。采用Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达。采用Western blot及免疫荧光法检测BV2细胞及脊髓损伤组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白的表达。结果:TPL可抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞及SCI小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α的表达及iNOS介导的NO产生,促进SCI小鼠脊髓修复。同时,TPL可通过抑制NLRP3通路调节LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症及SCI小鼠模型的炎症。结论:TPL可通过抑制NLRP3通路及iNOS-NO通路在BV2小胶质细胞及SCI小鼠模型中发挥抗炎作用,这为脊髓损伤的治疗用药提供了理论支持。