E型前列腺素受体4对CCL4诱导的肝损伤小鼠肝组织肝纤维化相关蛋白表达的影响

目的探讨E型前列腺素受体4(EP4)在CCL4诱导的肝损伤小鼠肝纤维化发生过程中的作用.方法取30只C57BL/6N小鼠,随机分为对照组、模型组和CCL4联合E7046处理组(n=10),采用CCL4注射法建立肝损伤模型,分别给予甲基纤维素或EP4特异性拮抗剂E7046溶液灌胃干预.采用Western blot和qPCR检测小鼠肝组织EP4、α-SMA蛋白及其mRNA水平.常规行HE染色、Masson染色和天狼星红染色,鉴定小鼠肝组织病理学变化.结果模型组小鼠肝组织EP4蛋白表达比对照组显著增高,经E7046干预后,肝组织EP4蛋白表达降低,同样地,模型组小鼠肝组织EP4编码基因Ptger 4 mRNA水平为(3.5±0.1),显著高于对照组[(1.0±0.1),P<0.05],而CCL4联合E7046处理组为(2.4±0.2),较模型组显著降低(P<0.05);模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为(1753.5±328.6)U/L和(1586.2±204.1)U/L,显著高于对照组(P<0.05),而在CCL4联合E7046处理组,两种酶水平较模型组显著降低[分别为(885.9±269.6)U/L和(892.4±208.6)U/L,P<0.05];模型组小鼠肝组织α-SMA表达较对照组增高,而在CCL4联合E7046组α-SMA水平较模型组降低,模型组小鼠肝组织Acta2和Col1a1 mRNA水平较对照组显著上调,而CCL4联合E7046组则较模型组显著降低(P<0.05).结论EP4在CCL4诱导的小鼠肝纤维化发生过程中发挥重要作用,阻断EP4与其配体结合有助于改善肝纤维化.

前列腺素E受体4拮抗剂与透明质酸钠在间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征大鼠模型中的作用比较

目的 比较前列腺素E受体4（EP4）拮抗剂与透明质酸钠对透明质酸酶诱导的大鼠间质性膀胱炎（IC）的作用.方法 将50只成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠（200 ～ 250 g）,分为对照组15只（膀胱灌注生理盐水）,模型组15只（膀胱灌注透明质酸酶）,拮抗组10只（AH23848）,黏膜保护组10只（透明质酸钠）.采用长期（1个月）间歇灌注透明质酸酶（4 g/L）构建大鼠IC/膀胱疼痛综合征（BPS）模型,尿流动力学检测膀胱功能,离体膀胱检测膀胱张力,实时定量聚合酶链反应检测炎性因子信使核糖核酸（mRNA）表达,免疫组织化学检测膀胱EP4和P物质蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠两次排尿间隔缩短[（145.62 ±44.96）s],膀胱容量降低[（0.40±0.07） ml],炎性因子白细胞介素（IL）-6、IL-1β mRNA表达升高,膀胱中EP4受体和P物质表达升高（P＜0.05）.AH23848和透明质酸钠处理模型大鼠后,两次排尿间隔均延长,膀胱容量均提高,IL-6、IL-1β的mRNA表达均降低（P＜0.05）.但与透明质酸钠比较,AH23848能更好的延长两次排尿间隔[（427.52 ±54.24）s],增加膀胱容量[（1.19±0.09）ml].同时AH23848能明显降低膀胱P物质的表达（P＜0.05）,而透明质酸钠不能.另外模型组离体膀胱加入AH23848后,出现明显舒张[抑制率为（19.75±3.59）％,P＜0.05].结论 与透明质酸钠比较,EP4受体拮抗剂AH23848能直接舒张膀胱肌,改善透明质酸酶诱导的大鼠尿频症状,同时缓解膀胱疼痛.

前列腺素受体EP4在心肌肥厚和心肌缺血/再灌注损伤中作用的研究进展

前列腺素E2(PGE2)是一种内源性脂质介质,由花生四烯酸在磷脂酶A2、环氧合酶和前列腺素E合成酶作用下代谢产生。PGE2通过4个不同的前列腺素E受体(EPS)偶联产生不同的作用,定义为EP1、EP2、EP3和EP4。其中,EP4受体是一个最广泛分布于心脏中的受体。关于全身性EP4基因敲除小鼠的研究以及心脏特异性EP4敲除小鼠和选择性EP4激动剂/拮抗剂的发展证明EP4受体在心脏中起保护作用。在缺血性心脏疾病中,PGE2-EP4信号通路的激活同时能产生保护和不利2种影响。本文简要介绍PGE2-EP4信号在缺血性心脏疾病,包括心肌肥厚和心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤中的作用。为了解PGE2-EP4信号通路的作用机制,促进缺血性心脏疾病的治疗、减少不必要的并发症提供依据。

岗松中抗前列腺素E2受体4拮抗剂筛选及其体内抗类风湿性关节炎作用

筛选岗松中抗前列腺素E2受体4(EP4)的拮抗剂和探讨抗类风湿关节炎的作用。体外建立HEK293T-EP4细胞拮抗剂筛选模型,采用均相时间分辨荧光(HTRF)技术筛选岗松活性成分。SPF级别ICR小鼠,雄性,随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组、岗松提取物BF-2(100、50和25 mg/kg)组,体内建立胶原诱导型类风湿性关节炎(CIA)小鼠模型,测量小鼠足趾肿胀体积,苏木精和伊红染色进行病理学检测。小鼠随机分为对照组、岗松提取物BF-2(100、50和25 mg/kg)组和阿司匹林组,采用醋酸诱导扭体试验观察扭体次数。本研究成功建立了EP4体外拮抗剂筛选模型,初筛结果发现岗松提取物BF-2,BF-20,BF-11和BF-12具有较强的EP4拮抗活性[(102.11±3.45)%,(90.31±3.59)%,(75.72±1.79)%和(76.84±1.64)%],其中,BF-2拮抗活性最强(IC50=0.99±0.08μg/mL)。BF-2可以明显抑制CIA小鼠的足趾肿胀,并缓解关节软骨基质降解和炎性细胞浸润。同时,与对照组比较,BF-2各剂量组小鼠的扭体次数均显著减少。筛选得到了一种EP4拮抗剂BF-2,并且具有潜在抗类风湿性关节炎活性。

EP4在结肠癌细胞株HT29增殖中的作用

目的探讨PGE2诱导结肠癌细胞株HT29增殖和凋亡的机制,明确以EP4为靶点治疗结肠癌的作用途径。方法将EP4抑制剂L161982按不同浓度作用于结肠癌细胞系HT29,用MTT(四甲基偶氮唑蓝比色法)法分别于作用12、24、48、72 h时检测细胞增殖状态;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,进一步采用Western Blot法检测Caspase-3的表达。结果 EP4抑制剂L161982对结肠癌细胞系HT29呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增殖;流式细胞仪检测结果显示,随着L161982剂量增加,HT29细胞凋亡增强;凋亡蛋白Caspase-3表达水平随L161982剂量增加而升高。结论PGE2可能通过EP4受体作用于结肠癌细胞,通过Caspase-3途径影响结肠癌细胞HT29的增殖与凋亡,这可能是结肠癌细胞增殖的分子机制。

EP4对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生长的影响

【目的】探讨前列腺素E受体4(EP4)对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生长的影响。【方法】体外培养人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1及人甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1,Nthy-ori 3-1细胞作为对照,用ELISA法检测细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量;用实时荧光定量PCR法检测四种前列腺素E2受体亚型(EP1、EP2、EP3、EP4)m RNA表达水平;用Western Blot法检测EP1-4、PKA及PI3K两种亚型(p110α、p110γ)蛋白的表达情况。用噻唑蓝(MTT)比色法检测EP4受体拮抗剂L-161982对两种细胞生长的作用。【结果】两种细胞均分泌PGE2。与Nthy-ori 3-1细胞相比,TPC-1细胞EP2、EP4表达显著上调(P<0.05),EP4下游信号因子PI3K亚型p110α、p110γ蛋白表达升高(P<0.05)。L-161982呈浓度依赖性抑制TPC-1细胞生长(P<0.05)。【结论】EP4受体拮抗剂L-161982可抑制TPC-1细胞生长。

EP4基因沉默对甲状腺乳头状癌K1细胞生长及迁移的影响

目的探讨EP4表达下调对K1细胞生长及迁移的影响。方法利用慢病毒载体构建EP4沉默K1细胞株,qRT-PCR及Western blot法检测转染后K1细胞EP4 mRNA及蛋白表达;CCK8法和流式细胞术检测细胞生长及凋亡;transwell法检测细胞迁移。结果与阴性对照组相比,EP4基因沉默后K1细胞EP4 mRNA和蛋白表达明显下调,细胞生长受到明显抑制及细胞凋亡率显著增加。同时EP4沉默的K1细胞迁移能力显著降低。结论 EP4沉默可显著抑制K1细胞生长及诱导其细胞凋亡,并降低其细胞迁移能力。

链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠肾脏COX-2/PGE2/EPs的表达

【目的】探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠肾脏COX-2/PGE2/EPs的表达情况。【方法】多次小剂量腹腔注射STZ诱导1型糖尿病小鼠模型,实验分为两组:正常对照组(NC)和糖尿病组(DM)。ELISA法检测血清和尿液中前列腺素E2(PGE2)的表达水平;RT-q PCR法检测肾组织环氧合酶-2(COX-2)、膜结合型前列腺素E2合成酶-1(m PGES-1)、各型EP受体(EP1、EP2、EP3、EP4)的m RNA表达水平;Westernblot法检测相应蛋白表达水平。【结果】随着周龄增加,DM组小鼠逐渐出现明显多饮、多尿、体质量下降等糖尿病消耗症状;与NC组小鼠相比,DM组小鼠空腹血糖(FBG)和24 h尿蛋白排泄量均显著增加(P<0.05);肾脏COX-2和EP4表达水平明显上调(P<0.05)、而m PGES-1、EP1、EP2、EP3 m RNA表达无显著变化(P>0.05);同时,DM组小鼠24 h尿PGE2定量显著高于NC组(P<0.05)。【结论】1型糖尿病小鼠肾脏组织中,早期即可检测到COX-2和EP4表达上调,伴24 h尿PGE2定量增加,提示COX-2/PGE2/EP4信号轴激活可能参与了糖尿病肾病的发生发展。

视网膜母细胞瘤组织中PTGER4的表达及临床意义

目的探讨前列腺素E2受体4(PTGER4)在视网膜母细胞瘤(Rb)组织中的表达及临床意义。方法收集本院2012年1月至2016年12月病理确诊且临床资料完整的Rb组织67例及同期正常视网膜组织21例,采用实时定量PCR和免疫组化检测PTGER4在上述组织中的表达水平,分析PTGER4表达与Rb临床病理特征(年龄、性别、侧别、IIRC分期、病理分化和视神经浸润)的关系。结果67例Rb组织中的PTGER4 mRNA水平和阳性表达率分别为2.653±1.056和56.7%(38/67),均高于正常视网膜组织的1.027±0.346和28.6%(6/21),差异有统计学意义(P<0.05)。Rb组织中PTGER4表达与年龄、性别和侧别无关,而与IIRC分期、病理分化和视神经浸润有关,其中临床分期较晚、低未分化及视神经浸润对应组织中PTGER4 mRNA水平和阳性表达率均较高(P<0.05)。结论PTGER4在Rb组织中表达升高,且与Rb的临床分期、病理分化及视神经浸润有关,PTGER4可作为判断RB浸润及病情评估的潜在指标。

EP4受体抑制剂对滤泡辅助性T细胞分化的调控作用研究

为探究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)小鼠中前列腺素E受体4(prostaglandin E receptor 4,EP4)对滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)分化的调控作用,通过2种不同的方式研究EP4对小鼠体内Tfh分化的影响。先采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)/铝佐剂(aluminium, Alum)/LPS免疫小鼠,免疫过程中使用EP2受体抑制剂或EP4受体抑制剂处理模型鼠并设置对照组,7 d后处死小鼠,分析脾脏免疫细胞中CD4^(+)CXCR5^(+)PD-1^(+)Tfh的分化情况;再构建胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型并在免疫过程中使用EP4受体抑制剂,进行关节肿胀程度评分,并在疾病高峰期处死小鼠,分析其脾脏免疫细胞中CD4^(+)CXCR5^(+)PD-1^(+)Tfh百分比。结果显示,在体内分化模型中,EP4抑制剂处理组小鼠脾脏炎症反应程度轻微;FACS检测结果显示,与PBS处理组相比,EP4受体抑制剂处理组Tfh分化百分比和绝对数显著降低(P<0.05);EP2受体抑制剂处理组无此现象(P>0.05)。在CIA模型中,与PBS处理组相比,EP4抑制剂处理组小鼠疾病评分显著降低(P<0.05),且FACS检测结果也显示,与PBS组相比,EP4受体抑制剂处理组脾脏中Tfh百分比及绝对数显著减少(均P<0.05)。综上,在体内分化模型中,EP4受体抑制剂可抑制Tfh分化,该抑制剂在CIA小鼠模型中也有同样作用,从而降低CIA模型小鼠的疾病严重程度。

前列地尔注射液对β-氨基丙腈诱导的小鼠主动脉夹层的作用及其机制探讨

目的探讨前列地尔注射液对β-氨基丙腈(BAPN)诱导的主动脉夹层的作用及其机制。方法选取3周龄雄性C57BL/6小鼠26只随机分成对照组(普通饮水,n=13)和模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水,n=13),14 d时提取主动脉组织RNA和总蛋白,采用实时定量聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹检测对照组和模型组主动脉炎症相关基因、EP基因mRNA(每组各6只)和前列地尔受体4(EP4)蛋白(每组各7只)表达。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠88只,按随机区组设计法分为3组:对照组(普通饮水+生理盐水80μg·kg^-1·d^-1,n=22)、模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+生理盐水80μg·kg-1·d-1,n=33)和治疗组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+80μg·kg^-1·d^-1前列地尔注射液,n=33)。BAPN饮水前1 d开始每日腹腔注射给药,连续给药28 d。记录每组小鼠体重、血压变化及因主动脉夹层破裂死亡情况。28 d时,大体解剖观察主动脉夹层发生情况;取主动脉组织进行固定、包埋和切片,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色观察主动脉的形态结构变化,同时,免疫组化染色观察对照组(6只)和模型组(6只)EP4蛋白的表达分布情况。并对模型组(3只)和治疗组(4只)血浆PGE1进行ELISA检测。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠13只,随机分为模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+生理盐水,n=7)和治疗组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+80μg·kg^-1·d^-1前列地尔注射液,n=6),14 d时对主动脉EP4蛋白表达进行定量分析。结果模型组小鼠BAPN诱导14 d时主动脉单核细胞趋化因子1[(2.74±1.55)比(1.00±0.49)]和基质金属蛋白酶2[(1.38±0.42)比(1.00±0.27)]的mRNA表达及EP4蛋白(1.48±0.51比1.00±0.19)表达高于对照组(P均<0.05)。免疫组化结果显示EP4可在模型组的内皮细胞、炎症细胞中表达。小鼠主动脉解剖观察可见模型组和治疗组均有明显的夹层,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色显示模型组和治疗组主动脉夹层血管可见弹力板断裂、充满红细胞的假腔形成和炎症细胞浸润。对照组无主动脉夹层和死亡发生,与对照组相比,模型组主动脉夹层发生率(60.6%,20/33)、破裂死亡率(30.3%,10/33),以及治疗组的主动脉夹层发生率(72.7%,24/33)、死亡率(24.2%,8/33)均明显升高,体重明显降低(P均<0.05),但模型组与治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组间血压无明显差异(P>0.05)。相较于模型组,治疗组在给药后血药浓度高[(0.540±0.041)μmol/L比(0.436±0.012)μmol/L,t=4.10,P<0.05],EP4蛋白表达低[(0.60±0.30)比(1.00±0.20),P<0.05]。结论在BAPN诱导的小鼠主动脉夹层模型中EP4表达增高,但使用前列地尔注射液腹腔给药对该模型中主动脉夹层的破裂无保护作用,其可能原因是前列地尔反馈抑制了EP4的表达。