15脱氧前列腺素J2对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究15脱氧前列腺素J2(15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)对体外培养的人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法不同浓度的15d-PGJ2干预体外培养的HepG2细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖能力,3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成速率,RT-PCR和Western blot检测PPARγmRNA和蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;使用GW9662和/或转染pSG5-PPARγ真核表达质粒来观察PPARγ通路在15d-PGJ2抑制HepG2细胞增殖中的作用,并使用pGCsi-PPARγ转染观察PPARγ沉默后15d-PGJ2对HepG2细胞增殖作用的影响;最后采用凝胶迁移电泳实验(EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性。结果 15d-PGJ2作用于HepG2细胞后能够导致使细胞增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,并诱导了细胞凋亡,此作用呈一定的剂量依赖关系;在上述过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达并没有显著变化。GW9662可以部分拮抗15d-PGJ2的增殖抑制作用,但转染pSG5-PPARγ可以逆转GW9662的作用;15d-PGJ2在20μmol/L时对pGCsi-PPARγ转染的HepG2细胞仍可以表现出增殖抑制效应,EMSA结果表明其在50μmol/L时明显抑制了NF-κB的DNA结合活性。结论 15d-PGJ2能够抑制HepG2细胞的增殖、诱导其凋亡并干扰细胞周期,表现出明显的抑瘤作用,此过程涉及PPARγ依赖途径和非依赖途径,而其中PPARγ非依赖途径可能与其抑制NF-κB的作用有关。

15-脱氧前列腺素J2在大鼠缺氧性神经细胞损伤中的作用

目的观察环氧合酶-2的代谢产物15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在原代培养的大鼠皮质神经细胞损伤中的作用。方法原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为未处理组、缺氧再复氧组、不同浓度15d-PGJ2处理的缺氧再复氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定神经细胞生存率,用DNA凝胶电泳法检测神经细胞凋亡情况。结果 15d-PGJ2具有剂量依赖性保护神经细胞免于缺氧导致的死亡的作用,15d-PGJ2在10μmmol/L以上保护神经细胞,与未处理组比较差异有统计学意义(P<0.01);15d-PGJ2预处理组皮质神经细胞凋亡的DNA所出现的梯形裂解条带比单纯缺氧再复氧组明显减轻。结论环氧合酶-2代谢产物15d-PGJ2参与了神经细胞死亡、凋亡的病理过程,减轻缺氧再复氧后神经细胞的损伤。

15-脱氧-△^12，14-前列腺素J2对兔耳增生性瘢痕结缔组织生长因子及胶原表达的影响

核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）作为负调节信号，在组织和器官纤维化中发挥抗纤维化作用，但在增生性瘢痕中的作用尚不清楚。我们采用兔耳增生性瘢痕模型，观察PPAR-γ的配体15-脱氧-△^12,14-前列腺素J2（15d-PGJ2）对增生性瘢痕结缔组织生长因子（CTGF）及胶原表达的影响，

15-脱氧-前列腺素J_2对单核巨噬细胞中巨噬细胞移动抑制因子表达的影响及作用机制

目的研究15-脱氧-前列腺素J2(15 d-PGJ2)对小鼠单核巨噬细胞中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响及作用机制。方法以小鼠单核巨噬细胞系J774A.1为研究对象,分别给予以下处理:(1)脂多糖(LPS)组:1μg/ml LPS孵育1 h;(2)正常对照组:PBS孵育1 h;(3)阴性对照组:5μmol/L 15 d-PGJ2孵育1 h;(4)15 d-PGJ2组:5μmol/L 15 d-PGJ2预孵育1 h,1μg/ml LPS孵育1 h;(5)GW9662组:10μmol/L GW9662预孵育1 h,5μmol/L 15d-PGJ2孵育1 h,1μg/ml LPS孵育1 h;(6)Vehicle组:即GW9662对照组,使用GW9662的溶剂DMSO替代GW9662。采用免疫荧光和琼脂糖凝胶电泳技术检测小鼠单核巨噬细胞系J774A.1中MIF的表达,RT-q PCR和Western blot技术检测15 d-PGJ2对LPS诱导的J774A.1炎症反应模型中MIF mRNA和蛋白水平变化情况。观察GW9662对15 d-PGJ2调节MIF作用的影响,采用高内涵分析技术检测15 d-PGJ2是否调节巨噬细胞炎症反应时过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的核转位。结果 J774A.1在基因和蛋白水平均表达MIF。LPS组细胞中MIF mRNA表达上调到正常对照组的1.75倍(P=0.037),15 d-PGJ2组细胞中MIF mRNA表达上调被抑制,下调至LPS组的50%(P=0.026),MIF蛋白水平变化情况与mRNA水平相一致。GW9662逆转了15 d-PGJ2对MIF mRNA表达的下调(P=0.016)。高内涵自动成像系统分析结果显示,15 d-PGJ2处理组细胞中PPAR-γ的核质比上调至LPS组的1.39倍(P=0.003)。结论 15 d-PGJ2可抑制单核巨噬细胞中MIF的表达,该作用可能依赖于PPAR-γ。

15-脱氧前列腺素J_2对非酒精性脂肪肝大鼠影响的研究

目的研究15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治疗作用。方法高脂饲料喂养Wistar大鼠12周制备NAFLD大鼠模型,再将其随机分为HI组(15d-PGJ2高剂量干预组)、LI组(15d-PGJ2低剂量干预组)、MC组(模型对照组);将普通饲料喂养大鼠作为NC组(正常对照组)。干预2周后检测肝组织匀浆中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC),血清丙氨酸转氨酶(ALT)、TG、TC及血糖(GLU)的含量,观察各组大鼠的肝组织病理学变化。结果高脂饮食可引起大鼠肝脏脂肪变性。HI组所有检测指标及LI组肝内TC水平均高于NC组;LI组和NC组所有检测指标及HI组ALT、TC、TG水平均低于MC组;HI组ALT、TG、GLU水平均高于LI组,差异有统计学意义(P<0.05)。HI组、LI组肝组织脂肪变性程度较MC组改善更明显。结论 15d-PGJ2可有效改善NAFLD大鼠的肝脏病变。

15-脱氧-△^(12,14)-前列腺素J2在兔肾近曲小管钠和碳酸氢根转运作用及机制

目的探讨过氧化物酶体增生物活化受体-γ(PPAR-γ)的选择性配体15-脱氧-△12,14-前列腺素J2(15d-PGJ2)在兔肾近曲小管钠和碳酸氢根的转运作用及其传导通路。方法在15d-PGJ2(0.1、0.3、1.0、10.0μmol/L)及PPAR-γ拮抗剂(5μmol/LGW9662)或MAPKK/MEK抑制剂(10μmol/LPD98059)作用下,观察兔肾近曲小管钠和碳酸氢根转运活动度的变化,Western blotting法测定细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)的磷酸化。结果 15d-PGJ2刺激兔肾近曲小管钠和碳酸氢根的转运,随浓度增加刺激作用增强。0.3μmol/L15d-PGJ2引起的刺激作用被MAPKK/MEK抑制剂及PPAR-γ拮抗剂阻止。PPAR-γ的两种选择性配体0.3μmol/L15d-PGJ2和0.3μmol/L吡格列酮刺激ERK磷酸化,并被PPAR-γ拮抗剂阻滞。结论通过PPAR-γ依赖的ERK磷酸化介导15d-PGJ2在兔肾近曲小管钠和碳酸氢根的转运。

15脱氧前列腺素J_2对同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用和对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)的作用。方法:用不同浓度的Hcy和15d-PGJ2对大鼠VSMCs进行刺激,以3H-TdR掺入方法观察15d-PGJ2对Hcy诱导大鼠VSMCs增殖的抑制作用,以Western印迹方法分析ERK1/2蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果:15d-PGJ2可明显抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖,但对Hcy诱导的ERK1/2磷酸化无明显作用。结论:15d-PGJ2可能通过MAPK/ERK1/2信号途径的下游步骤抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖。

15-脱氧前列腺素J_2对脂肪肝大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达的影响

目的观察15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法普通饲料喂养的雄性Wistar大鼠作为正常对照组8只;高脂饲料喂养雄性Wistar大鼠建造NAFLD模型16只,将建模成功的大鼠随机分为模型对照组8只和实验组8只。模型对照组大鼠腹腔注射生理盐水2ml·kg-1·d-1;实验组大鼠腹腔注射15d-PGJ210μg·kg-1·d-1。干预2周后处死各组大鼠,检测各组肝组织匀浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织PPAR-γ、TNF-α和IL-6的表达。结果模型对照组肝组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显高于正常对照组,TC(1.27±0.26)mmol/g vs(0.74±0.18)mmol/g、TG(1.56±0.27)mmol/g vs(1.13±0.39)mmol/g(P<0.01);实验组肝组织TC、TG水平明显低于模型对照组,TC(1.01±0.22)mmol/g vs(1.27±0.26)mmol/g、TG(1.15±0.20)mmol/g vs(1.56±0.27)mmol/g(P<0.05)。光镜下未见正常对照组肝组织病理形态学异常;模型对照组可见大量肝细胞脂肪变性及肝组织多处点状坏死;实验组大鼠肝细胞脂肪变性及点状坏死较模型对照组减轻;正常对照组肝组织PPAR-γ普遍表达而TNF-α和IL-6几乎不表达;实验组肝组织PPAR-γ表达强于模型对照组,而TNF-α和IL-6表达低于模型对照组。结论 15d-PGJ2可以缓解NAFLD大鼠肝细胞脂肪变性和坏死、降低肝组织TC和TG水平,这种效果可能是通过增加肝脏PPARγ和减少TNF-α、IL-6的表达来实现的。

15-脱氧-△^12，14-前列腺素J2在脑缺血中的神经保护作用

15-脱氧-A12,14-前列腺素J2（15-deoxy-△^12，14-prostaglandinJ2，15d-PGJ2）是过氧化物酶体增殖物激活受体1的天然配体之一，在脑缺血中发挥重要的保护作用。文章对15d-PGJ2神经保护机制的研究进展进行了综述。

15-脱氧-Δ^(12,14)-前列腺素J_2对大鼠酸性胃内容物吸入性肺损伤的保护作用

目的:探讨15-脱氧-Δ^(12,14)-前列腺素J_2(15-deoxy-Δ^(12,14)-prostaglandin J2,15d-PGJ_2)在大鼠酸性胃内容物(combined acid and gastric particles,CAGP)吸入性肺损伤中的保护作用。方法:制备大鼠CAGP模型,将20只大鼠模型随机分为对照组与治疗组,每组10只。对照组:气管内滴注CAGP,腹腔内注射PBS;治疗组:气管内滴注CAGP,腹腔内注射15dPGJ_2。肺损伤后4h和12h,两组各取5只大鼠采集标本,测定动脉血氧分压(PaO_2)、肺组织湿重/干重比值(W/D)、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总蛋白浓度、BALF白细胞计数和分类计数、BALF和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度、肺组织苏木精-伊红(H-E)染色炎症评分等指标。结果:与对照组比较,损伤后4h和12h,治疗组大鼠肺组织H-E染色炎症程度减轻,肺组织炎症评分下降,动脉血压分压(PaO_2)升高,肺组织W/D、BALF总蛋白浓度、白细胞总数和中性粒细胞数均下降,BALF和血清TNF-α浓度下降(P<0.05)。结论:15d-PGJ_2能减轻大鼠CAGP吸入性肺损伤和肺部炎症水平,改善动脉血氧分压。

15-脱氧前列腺J2对糖尿病脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积及核转录因子-κb的影响

目的观察15-脱氧前列腺J2(15d-PGJ2)对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积及核转录因子-κb(NF-κb)的影响。方法将80只成年SD大鼠随机分为假手术组、正常血糖组、糖尿病组及15d-PGJ2干预组,每组20只。采用链脲佐菌素诱导糖尿病,应用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。15d-PGJ2干预组在成功制备糖尿病大鼠模型后,给予15d-PGJ2 200μg/kg·d腹腔注射21 d后制作大脑中动脉缺血再灌注模型。再灌注后3 h腹腔注射15d-PGJ2 400μg/kg,以后给予15d-PGJ2 200μg/kg·d腹腔注射,连续6 d。分别于再灌注24 h及7 d对各组大鼠进行神经功能评价,TTC染色计算脑梗死体积,常规HE染色观察组织形态变化;采用ELISA法检测NF-κb水平。结果与假手术组比较,正常血糖组、糖尿病组、15d-PGJ2干预组再灌注24 h及7 d的神经功能评分及NF-κb水平显著升高,梗死体积均显著增加(均P<0.05)。与糖尿病组比较,正常血糖组再灌注24 h及7 d的神经功能评分、NF-κb水平及脑梗死体积均显著降低(均P<0.05)。15d-PGJ2干预组大鼠再灌注24 h及7 d的神经功能评分、NF-κb水平及脑梗死体积显著低于糖尿病组及正常血糖组(均P<0.05)。结论高血糖可加重缺血及再灌注后的脑损伤。15d-PGJ2可以减轻糖尿病及脑缺血对大脑的损伤,改善神经功能,减少脑梗死体积及NF-κb含量。

PPARγ的配体15d-PGJ_2对人类胃癌细胞生长的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)的配体15-脱氧前列腺素J2(15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)对人类胃癌MGC803细胞生长的影响及其机制。方法:RT-PCR检测PPARγ和survivin mRNA,Western blot检测PPARγ、survivin、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)和p27蛋白;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期分布;Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的形态学变化。结果:PPARγmRNA和蛋白在MGC803细胞均表达。15d-PGJ2作用MGC803细胞24 h后,5、10、20、30、40μmol/L组的增殖抑制率和凋亡率均高于0μmol/L组(P<0.001),且随浓度的增加而升高。30μmol/L组的MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率,随时间的延长而升高。G0/G1期细胞比例,30μmol/L组明显高于0μmol/L组(P<0.001);S和G2/M期细胞比例,30μmol/L组均明显低于0μmol/L组(分别为P<0.001,P<0.01)。随15d-PGJ2作用MGC803细胞浓度的增加,sur-vivin mRNA和蛋白及Skp 2蛋白的表达均降低,p27蛋白表达升高。结论:15d-PGJ2抑制人胃癌MGC803细胞的增殖、诱导其凋亡并将其阻滞在G0/G1期,survivin和Skp 2表达下调及p27表达上调在这个过程中起重要作用,提示15d-PGJ2可能对治疗胃癌有效。

PPARγ激动剂15d-PGJ_2在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用及机理

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用及机理。方法建立70%的大鼠肝脏缺血-再灌注损伤模型,40只SD大鼠随机均分为4组:假手术组、缺血-再灌注损伤组(缺血-再灌注组)、15d-PGJ2预处理组(15d-PGJ2组)及15d-PGJ2+GW9662预处理组(15d-PGJ2+GW9662组)。再灌注后,取静脉血检测肝血清酶(ALT、AST)水平,取肝脏组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性、NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达。结果与假手术组相比,其余3组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达均增加(P<0.05)。与缺血-再灌注组相比,15d-PGJ2组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NFκ-B活性、TNF-α含量和ICAM-1表达均明显降低(P<0.05);而15d-PGJ2+GW9662组与缺血-再灌注组相比有差异但无统计学意义(P>0.05)。与15d-PGJ2组相比,15d-PGJ2+GW9662组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达明显增加(P<0.05)。结论PPARγ激动剂15d-PGJ2对肝脏缺血-再灌注损伤有保护作用,其机理可能是通过PPARγ途径抑制NFκ-B活性,减少TNF-α和ICAM-1炎症介质的释放实现的。

PPARγ激动剂15d-PGJ_2对大鼠肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中细胞凋亡的作用及可能的机制。方法建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,40只SD大鼠随机均分为4组:假手术组(SO组)、缺血再灌注损伤组(IR组)、15-脱氧前列腺素J2预处理组(15d-PGJ2组),15d-PGJ2+GW9662预处理组(15d-PGJ2+GW9662组)。再灌注后,取静脉血检测肝血清酶(ALT、AST)水平,取肝脏组织TUNEL法检测缺血肝脏细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),免疫组化检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果与SO组相比,其他3组血清ALT和AST水平、肝脏细胞AI、Bax、Bcl-2及Caspase-3均升高(P<0.05)。与IR组相比,15d-PGJ2组血清ALT和AST水平、肝脏细胞AI、Bax及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.05);而15d-PGJ2+GW9662组与缺血再灌注组相比差异无显著性(P>0.05)。与15d-PGJ2组相比,15d-PGJ2+GW9662组血清ALT和AST水平、肝脏细胞AI、Bax及Caspase-3表达增加,Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论PPARγ激动剂15d-PGJ2对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过PPARγ激活上调Bcl-2、下调Bax的表达和抑制Caspase-3活性实现的。

15d-PGJ_2减弱香烟提取物抑制人脐静脉内皮细胞迁移

目的探讨15-脱氧-Δ12,14-前列腺素J2(15d-PGJ2)对香烟提取物(CSE)抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移的保护作用。方法 "划痕法"检测HUVECs的迁移。毛细管样成管实验检测HUVECs的血管新生。Western blot检测occludin蛋白表达。结果与对照组相比,CSE显著抑制HUVECs迁移,使单个视野划痕内细胞数由629±28降低至364±17(P<0.01),15d-PGJ2干预可使细胞数回升至546±20(P<0.01)。CSE抑制HUVECs血管新生,15d-PGJ2可逆转CSE对HUVECs血管新生的抑制。与对照组相比,CSE使HUVECs occludin蛋白表达量由0.37±0.04降至0.12±0.03(P<0.01)。15d-PGJ2干预可使其回调至0.28±0.04(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.05)。结论 CSE对HUVEVs迁移的抑制作用可能是通过下调occludin蛋白的表达实现的。15d-PGJ2减弱CSE下调occludin表达而逆转CSE对HUVECs迁移的抑制。

15-脱氧前列腺素 J_2体外诱导肝癌细胞失巢凋亡的研究

目的研究15-脱氧前列腺素 J_2(15-d-PGJ_2)体外诱导人肝癌细胞系 BEL-7402细胞失巢凋亡的特性,并探讨其机制。方法在纤连蛋白(Fn)或多聚2-羟乙基甲基丙烯酸脂(poly-HEMA)包被的培养板中,应用光学显微镜观察不同因素处理后的细胞生长状态和形态学变化;应用 DNA 片段分析和流式细胞术观察细胞的凋亡变化;应用 Western 印迹技术观察细胞焦点黏着斑激酶(FAK)和磷酸化 FAK(p-FAK)蛋白质的表达;应用小 RNA 干扰技术来沉默 FAK 基因。结果在 Fn 包被的培养板中贴壁生长的 BEL-7402细胞经15-d-PGJ_2处理24 h 或48 h 后,细胞变圆,脱离细胞外基质呈悬浮状态改变,而且这种改变呈时间和剂量依赖性关系;其中以浓度为20 μmol/L 的15-d-PGJ_2最为显著,24 h 和48 h 时间点细胞的黏附比率分别为(66.0±3.6)%和(35.0±5.0)%,与肝癌细胞对照相比差异有统计学意义(P<0.05)。经流式细胞术和 DNA 片段分析后发现肝癌细胞发生了失巢凋亡;Western 印迹显示 p-FAK 蛋白下降,而 FAK 蛋白质表达水平未发生改变。结论 15-d-PGJ_2在体外能够诱导 BEL-7402细胞失巢凋亡,这一过程与细胞 FAK 磷酸化水平降低有关。

15-deoxy-△^(12,14)-prostaglandin-J_2 induces apoptosis in ECV304 endothelial cells by inhibiting NF-kB and AP-1 activation pathways

Prostaglandin J2 (PG J2) and its metabolites are naturally occurring derivatives of Prostaglandin D2 (PG D2). The pathway for formation of these compounds involves sequential conversion of PG D2 to PG J2, and 15-deoxy-△12,14-prostaglandin-J2 (15d-PGJ2). 15d-PGJ2 is a high-affinity ligand for peroxisome proliferation-activated receptor gamma (PPAR7), it represses several genes in different cell lines. Our previous studies have demonstrated that 15d-PGJ2 induced apoptosis in ECV304 endothelial cells. However, the mechanism remains unclear. In this paper, our aim was to explore the molecular mechanism of 15d-PGJ2 on apoptosis in ECV304 endothelial cells. Hoechst 33258 staining, terminal deoxynucleotidyl transferase-

(1S,2R,3R)-2-[(E)-3-氧代辛-1-烯基]-3-羟基-1-甲酯基环戊烷的合成

以四氢吡喃炔丙醇和１－溴－３－氯丙烷为原料经７步反应制备合成前列腺素Ｊ２的重要中间体，７－氰基－３，４－反－环氧庚－１－烯（９），并以９闭环合成（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ）－２－［（Ｅ）－３氧代辛－１－烯基］－３－羟基－１－甲酯基环戊烷（１６）。

PPARγ激动剂抑制脂多糖诱导肾小管上皮细胞分泌趋化因子及机制

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对脂多糖(LPS)诱导的趋化因子表达的影响及可能机制。方法:用15d-PGJ2(5μM)预处理人近端肾小管上皮细胞2h后加入LPS(1μg/ml),与LPS组、15d-PGJ2组及未加任何刺激组进行比较。用Real-time PCR方法检测IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达水平;用ELISA法检测细胞上清中IL-8和MCP-1蛋白水平;通过RNAi技术沉默肾小管上皮细胞PPARγ,观察15d-PGJ2的作用是否依赖于PPARγ;用间接免疫荧光法观察NF-κB在细胞内的定位;用Western blot法检测胞质中IκB的磷酸化水平。结果:在HK-2细胞中,与对照组相比,LPS刺激4h使IL-8 mRNA及蛋白分别升高(5.67±1.83)和(1.62±0.12)倍,使MCP-1 mRNA及蛋白分别升高(5.24±1.33)和(2.25±0.40)倍,且胞质中IκBα磷酸化水平明显增加(P<0.05)。与LPS组相比,15d-PGJ2+LPS组,IL-8和MCP-1表达在mRNA水平分别下降74.23%和79.42%,在蛋白水平分别下降69.03%和49.44%,差异有统计学意义;在PPARγ沉默的HK-2细胞中,与LPS刺激组相比,15d-PGJ2使IL-8和MCP-1表达在mRNA水平分别下降59.21%和44.08%,在蛋白水平分别下降47.11%和39.40%(均P<0.05),并明显抑制LPS诱导NF-κB核易位,下调IκBα磷酸化水平。结论:15d-PGJ2可抑制LPS诱导的趋化因子表达,且不完全依赖于PPARγ,可能与抑制IκBα磷酸化有关。