超声分子影像组学评估前列腺癌前列腺特异膜抗原表达:实验研究

目的 观察超声分子影像组学评估前列腺癌(PCa)前列腺特异膜抗原(PSMA)表达的价值。方法 分别于裸鼠皮下接种22RV1细胞(PSMA阳性表达,n=9)或PC-3细胞(PSMA阴性表达,n=10),构建不同PSMA表达水平人前列腺癌细胞移植瘤裸鼠模型。制备靶向PSMA的超声纳米泡(PSMA-NB),进行表征检测及体内、外超声分子成像。以7∶3比例将裸鼠随机分为训练集及测试集,提取训练集纹理特征,以组内相关系数、单因素分析、最小绝对收缩和选择算子等方法筛选特征,构建超声分子影像组学模型,并评估模型诊断PSMA阳性PCa的效能。结果 所制备PSMA-NB平均粒径为(392.2±31.56)nm, Zeta电位为(-29.3±0.95)mV,体外显像效果理想,稳定性好。共基于训练集数据提取1 561个纹理特征,最终筛选出3个特征,包括exponential_glszm_ZoneVariance、wavelet_HHH_gldm_SmallDependenceLowGrayLevelEmphasis及logarithm_gldm_DependenceVariance,以之构建的超声分子影像组学模型诊断训练集、测试集PSMA阳性表达PCa的曲线下面积分别为0.950、0.875。结论 基于靶向PSMA超声分子影像组学模型可用于评估PCa裸鼠PSMA表达。

中国人前列腺特异膜抗原基因的克隆及序列测定

目的克隆人前列腺膜特异抗原 ( prostate- specific m embrane antigen,PSMA)的编码区 c DNA片段。方法从前列腺癌组织提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出人 PSMA基因编码区序列 ,将其克隆至 pc DNA3 .1载体中 ,并行序列测定。结果序列测定表明 ,克隆获得的 2 2 5 3 bp片段与文献报道的人 PSMA基因编码区 c DNA序列一致。结论本研究为进一步研究

前列腺癌双探针PET/CT显像的肿瘤负荷及转移与血清前列腺特异性抗原的相关性

目的以18氟-脱氧葡萄糖(^(18)F-FDG)及18氟-前列腺特异性膜抗原(^(18)F-PSMA)双探针PET/CT显像为基础,探究前列腺癌患者的肿瘤负荷和肿瘤转移与血清前列腺特异性抗原(PSA)的关系。方法选择2021年3月1日~2022年11月27日潍坊市人民医院经病理组织学确诊的初诊前列腺癌患者共54例,行^(18)F-FDG及^(18)F-PSMA双探针PET/CT检查。依据双探针PET/CT检查及临床资料分为无转移组(n=16)与转移组(n=38),统计所有患者双探针PET/CT检查确定的肿瘤负荷指标,采用Spearman检验对血清PSA与肿瘤负荷指标进行相关性分析,采用Mann-Whitney U检验进行组间比较。结果两组的血清PSA、全身代谢体积、原发灶表达体积、糖酵解总量及表达总量差异均有统计学意义(P<0,05);血清PSA>31,83μg/L时检测前列腺癌转移的效能最佳,敏感度及特异性分别为84.21%和93.75%;经双探针PET/CT检查获取的各项肿瘤负荷均与血清PSA具有相关性(P<0.01)。结论血清PSA越高提示前列腺癌肿瘤负荷越大,转移组肿瘤负荷均高于无转移组,患者血清PSA>31.83μg/L时,提示发生前列腺癌转移的可能性大,有必要行^(18)F-PSMA PET/CT显像全面评估。

新型前列腺特异膜抗原剪接变异体的发现及临床意义初步探讨

目的:探讨前列腺特异膜抗原(PSMA)及其与前列腺癌发生、发展的关系,寻求更为特异的前列腺癌诊断和治疗的靶点。方法:采用RT-PCR和DNA测序技术,克隆PSMA基因新的剪接变异体,并根据其序列信息,设计特异性引物,检测其在不同病变前列腺组织及不同组织来源肿瘤细胞中的表达。结果:发现了一种新的PS-MA剪接变异体,其在前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺组织中的表达率分别为92.6%、78.8%及10.0%,且特异表达于前列腺癌LNCaP细胞株,而在前列腺癌PC3细胞株、膀胱癌、肾癌、肝癌细胞株中均不表达。结论:发现了一种新型PSMA剪接变异体(定名为PSMA5),并证实该变异体与前列腺癌及前列腺增生有明显相关性,为研究前列腺癌的发生机制和寻求前列腺癌特异性诊治靶点提供了新的线索。

前列腺特异膜抗原在Pichia pastoris酵母中的表达及鉴定

前列腺特异膜抗原是一种具有高度前列腺特异性的糖蛋白 ,其表达的增高与肿瘤的术后复发、激素抵抗及较差的预后正相关 ,在前列腺癌的诊断和治疗中有广泛的应用前景 .从前列腺癌组织提取总RNA ,利用RT PCR技术获得PSMA基因的全长序列 ,构建了重组酵母表达载体pPIC3.5K PSMA .电击法转化Pichiapastoris酵母 ,通过表型筛选和PCR鉴定证实该基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS PAGE显示 ,获得的PSMA蛋白分子量约 10 0kD ,表达产物经West ern印迹证实可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合 .结果表明 ,成功地获得PSMA编码的cDNA并在酵母细胞中获得表达 .

抗前列腺特异膜抗原单克隆抗体的标记及在荷瘤裸鼠体内的分布研究

目的:研究125I标记的抗前列腺特异膜抗原(PSM A)单克隆抗体(125I-Ed-5)及正常小鼠IgG(125I-NM IgG)在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的分布,探讨应用125I-Ed-5进行放射免疫显像诊断和放射免疫治疗实验性人前列腺癌的可行性。方法:建立荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,用125I标记抗PSM A单克隆抗体Ed-5和NM IgG,125I-Ed-5和125I-NM IgG经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,于注射后24、48、72、120小时分批处死,测定肿瘤和血液、肝、肺等重要脏器的单位重量放射性比值(T/NT)、各组织摄取百分比(%ID/g),研究其在荷瘤裸鼠体内的放射性分布情况。结果:125I-Ed-5的标记率为72.3%,放射性比活度为55.2M Bq/m g,放射性化学纯度是90.2%,免疫活性分数为63%。在注射125I-Ed-5后24～120小时内,裸鼠体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚;各组织的T/NT比值在72h达到最高,其中肿瘤/肌肉高达6.36。而在注射125I-NM IgG的对照组中,裸鼠体内未见放射性浓聚,呈全身均匀性分布。结论:标记后的125I-Ed-5免疫活性没有改变,在裸鼠体内对前列腺癌移植瘤有靶向定位作用,为进一步应用125I-Ed-5进行前列腺癌放射免疫显像和放射免疫治疗的实验研究奠定基础。

前列腺癌患者外周血前列腺特异性膜抗原mRNA检测的意义

目的观察前列腺癌(PCa)患者外周血前列腺特异性膜抗原mRNA(PSMA-mRNA)的表达,并探讨其临床意义。方法从PCa患者外周血中分离单个核细胞,采用RT-PCR方法检测其中PSMA-mRNA的表达。以前列腺增生(BPH)患者为对照。结果PCa患者PSMA-mRNA阳性率为60.8%(45/74),BPH患者PSMA-mRNA阳性率为5.9%(1/17);伴远处转移的PCa患者外周血PSMA-mRNA阳性率高达89.5%(34/38),无远处转移者阳性率为38.9%(14/36);PCa患者中血清PSA≥20μg/L者PSMA-mRNA阳性率(68.8%),显著高于PSA<20μg/L者(23.0%)。结论外周血PSMA-mRNA检测可诊断前列腺癌血行播散及转移。

前列腺特异膜抗原mRNA检测方法的建立及应用

目的 建立前列腺特异膜抗原 (PSM)mRNA检测方法。方法 利用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿 /异戊醇一步法从前列腺癌患者外周血有核细胞或前列腺癌组织中提取总RNA ,进行RT PCR扩增。结果 在PCR反应体系中投入相当于 1～ 1 0 0个癌细胞所含总RNA量时 ,均能得到清晰的 2 6 2bp的产物带。结论 本法有很高的稳定性和灵敏度。临床应用有助于早期发现前列腺癌转移。

人前列腺特异膜抗原膜外区基因的克隆表达及抗体的制备

利用RT PCR技术 ,从前列腺癌组织总RNA中扩增人前列腺特异膜抗原 (PSMA)基因编码区序列 ,克隆至pcDNA3.1载体 ,以此为模板再次PCR扩增出PSMA膜外区cDNA(edPSMA) ,序列测定表明克隆获得的PSMA及edPSMA与基因库所登录的序列相一致。构建原核表达质粒pMAL c2x edPSMA ,经IPTG诱导表达的MBP edPSMA融合蛋白分子量约 12 0kD ,Westernblot证实表达产物可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合。用直链淀粉琼脂糖凝胶 (Amyloseresin)亲和层析纯化蛋白质可得到电泳均一的融合蛋白 ,免疫BALB C小鼠制备多抗 ,获得效价为 1∶12 80 0的多克隆抗体 。

前列腺特异膜抗原的结构模型研究

目的对前列腺特异膜抗原(PSMA)进行结构模建并尝试其小分子抑制物的设计。 方法通过网络资源和分子设计软件SYBYL进行PSMA的三维模建和小分子抑制物的设计。 结果以气单胞菌氨肽酶(AMP)的晶体结构为模板使用Composer模块,获得PSMA胞外区三维结构模型。采用分子对接方法,以AMP和p-碘基-D-苯丙酸-氧肟酸(AIDPH)的复合物晶体结构IIGB为参照,将AIDPH对接到PSMA的结构上,相对应形成疏水作用一端的残基为Y279、Y294、Y298及Y301,与IIGB的晶体结构中的蛋白-抑制剂间的疏水作用非常相似,相对应于另一端形成氢键的4个残基中有3个相同,说明两个复合物氢键形成的方式大体一致。 结论成功获得PSMA三维结构的理论模型。AIDPH有望作为设计PSMA靶向性药物的前导基团。

前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达

【目的】克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达。【方法】用 RT-PCR 方法扩增前列腺癌组织标本中的 PSMA cDNA 序列,并将其克隆至真核表达载体 pcDNA3.0。用脂质体转染法,把 pcDNA3.0-PSMA 转染哺乳动物细胞,鉴定 PSMA 蛋白的表达。【结果】序列测定结果表明,两条引物之间的片段长度为2279bp,与预期长度一致。将克隆的编码区序列与 GenBank 的 PSMA 序列进行 Blast 对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的相对分子质量为100ku。【结论】成功扩增了 PSMA 编码区序列,构建了 PSMA 真核表达载体,建立了 PSMA 稳定表达的细胞株。经免疫分析,证实了真核细胞内表达的 PSMA 为分子质量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性。所获得的 PSMA 真核表达系统为进一步研究 PSMA 基因修饰的 DCs 疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础。

前列腺特异膜抗原mRNA的临床应用研究

目的 :通过检测治疗前后的前列腺癌 (PC)病人外周血前列腺特异膜抗原信使核糖核酸 (PSMAmRNA)的表达 ,了解原发性前列腺癌的血行播散情况及为前列腺癌综合治疗提供依据。 方法 :采用巢式逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测技术 ,对 31例PC病人外周血PSMAmRNA的表达进行了研究。 结果 :31例样本中 ,17例PC病人 (5 4.8% )PSMAmRNA阳性 ,10例正常人和 2 1例良性前列腺肥大 (BPH)病人全阴性 ;10例伴远处转移的PC病人外周血PSMAmRNA全阳性 ,2 1例检测时尚无转移证据者 33.3% (7/ 2 1)阳性 ;外周血PSMAmRNA阳性率与血清PSA水平密切相关 ;根治术或姑息性治疗前、后外周血PSMAmRNA阳性率差异无显著性。 结论 :外周血PSMAmRNA检测可诊断前列腺癌血行播散及转移 ,可作为预测前列腺癌复发、转移的参考指标 ,对外周血PSMAmRNA阳性病人应在围手术期辅以激素、放疗或免疫等辅助治疗 ,以预防肿瘤复发、转移。

前列腺特异膜抗原基因的克隆及其蛋白表达

用RT-PCR法扩增前列腺癌组织标本中的前列腺特异膜抗原(PSMA)cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0。用脂质体转染法将pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白表达。序列测定结果表明,两条引物间的片断长度为2279bp,与预期长度一致;将克隆的编码区序列与Genebank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的相对分子质量为100kD。提示成功扩增了PSMA编码区序列,构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株;此研究为PSMA基因修饰的树突状细胞疫苗治疗前列腺癌奠定了基础。

前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达

目的克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达。方法用RT-PCR方法扩增前列腺癌组织标本中的PSMA cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0。用脂质体转染法,把pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白的表达。结果序列测定结果表明,两条引物之间的片断长度为2279 bp,与预期长度一致。将克隆的编码区序列与Genebank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的分子量为100 000。结论利用RT-PCR技术成功扩增了PSMA编码区序列,经序列分析显示扩增片断的序列正确。构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株。经免疫分析,证实了真核细胞内表达的PSMA为分子量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性。所获得的PSMA真核表达系统为进一步研究PSMA基因修饰的DCs疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础。

前列腺特异膜抗原及其临床应用研究新进展

前列腺特异膜抗原是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白 ,特异性表达于各种前列腺组织分泌性腺上皮及多种非前列腺恶性实体肿瘤的新生毛细血管内皮细胞 ,近年以其为靶向的诊断。

前列腺特异膜抗原(PSMA)的检测及临床应用进展

前列腺特异膜抗原 (PSMA)是一种新近发现的前列腺癌相关抗原 ,由于其较高的前列腺特异性和膜结合特性 ,使其在前列腺癌的临床诊断中 ,特别是在判断肿瘤的转移和进展方面 ,是一种较PSA更加敏感、特异的CaP肿瘤标记物。

^(18)F-PSMA-1007 PET/CT与mp-MRI对前列腺癌的检测效能及与病理分级的相关性研究

目的探讨18氟标记前列腺特异性膜抗原-1007正电子发射计算机体层摄影(fluorine-18 prostate specific membrane antigen 1007-positron emission tomography/computed tomography,^(18)F-PSMA-1007 PET/CT)与多参数磁共振成像(multi-parameter magnetic resonance imaging,mp-MRI)单独及联合对前列腺癌(prostate cancer,PCa)的检测效能,并比较最大标准化摄取值(maximum standardized uptake value,SUV_(max))、表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)、SUV_(max)/ADC、T1、T2、质子密度(proton density,PD)值与PCa病理分级的相关性。材料与方法回顾性分析我院2020年4月至2022年9月疑似PCa并拟行穿刺活检或手术的患者病例,最终50例患者被纳入研究,其中42例确诊PCa。按照国际泌尿病理协会(International Society of Urological Pathology,ISUP)分级共分为5组,包括中高级别组(分级≥4)25例和低级别组(分级1~3)17例,比较不同分组的SUV_(max)、ADC及SUV_(max)/ADC的差异。采用Spearman相关分析SUV_(max)、ADC、SUV_(max)/ADC、T1、T2、PD值之间的相关性及分别与ISUP分级的相关性。以病理为金标准,分析^(18)F-PSMA-1007 PET/CT与mp-MRI单独及联合对前列腺良恶性的检测效能。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)并计算曲线下面积(area under the curve,AUC)、敏感度和特异度,评价SUV_(max)、ADC、SUV_(max)/ADC及联合参数诊断效能,通过DeLong检验比较AUC间的差异。结果PCa高级别组与低级别组的ADC值、SUV_(max)、SUV_(max)/ADC差异均有统计学意义(P均<0.001)。50例患者的ADC值与SUV_(max)呈负相关性(r=-0.516,P<0.05),42例确诊PCa患者的ADC值与ISUP分级呈负相关(r=-0.616,P<0.05),SUV_(max)、SUV_(max)/ADC与ISUP分级呈正相关(r=0.549、0.639,P均<0.05)。20例完成定量磁共振图像编译(magnetic resonance image compilation,MAGiC)序列患者T1、T2、PD值与ISUP分级无相关性(r=0.045、0.202、0.028,P均>0.05);T1、T2值与ADC值呈正相关(r=0.616,r=0.756,P均<0.05),PD值与ADC值呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。SUV_(max)与T1、T2、PD值没有明显相关性(r=-0.132,r=-0.422,r=0.230,P均>0.05)。ROC曲线分析显示,SUV_(max)的AUC为0.940,差异有统计学意义(P<0.001),以7.80为临界值,诊断PCa的敏感度为83.33%,特异度为100.00%;ADC值的AUC为0.970,差异有统计学意义(P<0.001),以1.20×10^(-3)mm^(2)/s为临界值,诊断PCa的敏感度为95.24%,特异度为87.50%;SUV_(max)/ADC的AUC为0.970,差异有统计学意义(P<0.001),以6.43×10^(3)为临界值,诊断PCa的敏感度为90.48%,特异度为100%;SUV_(max)和ADC联合的AUC为0.976,差异有统计学意义(P<0.001),以0.85为临界值,诊断PCa的敏感度为90.48%,特异度为100.00%。结论联合^(18)F-PSMA-1007 PET/CT与mp-MRI可以提高对PCa的诊断效能;ADC值、SUV_(max)及SUV_(max)/ADC能够区分低危与中高危PCa。

Al^(18)F-PSMA-BCH扫描对生化复发的前列腺癌早期诊断及治疗决策影响的研究

目的:探索Al^(18)F-PSMA-BCH(北京肿瘤医院)标记法正电子发射计算机体层显像(PET/CT)扫描对生化复发的前列腺癌(PCa)早期诊断及治疗决策影响。方法:回顾性分析2021年8月至2022年6月喀什地区第一人民医院收治的80例PCa根治术(RP)患者,依据其是否存在生化复发(BCR)将其分为BCR组(29例)和非BCR组(51例),所有患者均行Al^(18)F-PSMA-BCH PET/CT标记扫描,分析Al^(18)F-PSMA-BCH标记扫描对BCR患者临床局部复发或转移的检出情况,对比复发及转移处的最大标准化摄取值(SUVmax)与患者血清前列腺特异抗原(PSA)及格利森(Gleason)评分的相关性,分析Al^(18)F-PSMA-BCH标记法扫描下SUVmax对不同危险程度BCR患者的检出效能。根据患者的术前PSA、术后病理所得Gleason评分及临床分期将80例患者分为低危、中危及高危分级。结果:Al^(18)F-PSMA-BCH PET/CT标记法扫描下,BCR组中23例患者存在临床复发及转移(占79.31%),其中14例为不同程度的淋巴结转移(占60.87%):包括单纯盆腔淋巴结转移8例(占34.78%),单纯腹膜后淋巴结转移2例(占8.70%),盆腔伴腹膜后淋巴结转移3例(占13.04%),隔上淋巴结转移1例(占4.35%);4例为前列腺术区复发(占17.39%),1例为内脏转移(占4.35%)(脑),15例患者伴有不同程度的骨转移(占65.22%)。对于RP术后BCR的PCa患者,Al^(18)F-PSMA-BCH标记法对临床局部复发或转移的检出受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.897(95%CI:0.808~0.953,P<0.001),灵敏度为79.3%,特异度为100.00%。出现骨转移患者的SUVmax为(14.82±24.32),与患者PSA水平及Gleason评分呈明显正相关性(r=0.442、0.372,P<0.001),出现术区复发的SUVmax为(24.38±26.54),与患者PSA水平及Gleason评分呈明显正相关性(r=0.423、0.338,P<0.05),出现盆腔淋巴结转移的SUVmax为(45.34±47.04),与患者PSA水平及Gleason评分呈明显正相关性(r=0.423、0.316,P<0.05)。同时,对存在BCR的患者中,Gleason评分≥8分的患者为(12/12,100%)复发或转移的检出率明显高于Gleason评分≤7分的患者(11/17,64.71%),差异有统计学意义(x2=6.502,P<0.05);0.2 ng/ml≤PSA<0.5 ng/ml患者(6/10)、0.5 ng/ml≤PSA<1 ng/ml患者(6/8)、1 ng/ml≤PSA<2 ng/ml的患者(12/12)以及PSA≥2 ng/ml的患者(9/9)检出率差异有统计学意义(x^(2)=9.041,P<0.05)。SUVmax对低、中及高危BCR患者出现复发或转移的AUC分别为0.708(95%CI:0.543~0.840,P>0.05)、0.780(95%CI:0.621~0.895,P<0.05)及0.914(95%CI:0.781~0.979,P<0.05),其中Al^(18)F-PSMA-BCH对高危BCR患者出现局部复发及转移的诊断效应明显优于对低危BCR患者(x^(2)=8.986,P<0.05)。在23例进行Al^(18)F-PSMA-BCH标记扫描的患者中,15例(占65.22%)患者在原治疗方案基础上增加了局部放疗、全身化疗、内分泌治疗或盆腔淋巴结清扫术,发生了治疗策略上的改变。结论:Al^(18)F-PSMA-BCH标记法扫描对BCR的PCa具有较高的早期诊断价值,会对患者的治疗策略造成一定的影响。

^(18)F-PSMA与^(18)F-FDG PET/CT显像对前列腺癌全身淋巴结转移的诊断效能比较

目的:比较^(18)F-PSMA与^(18)F-FDG正电子发射断层显像(PET/CT)诊断前列腺癌全身淋巴结转移病灶的效能。方法:回顾性分析2020年7月—2021年4月在潍坊市人民医院病理确诊的31例前列腺癌患者资料,2周内分别行^(18)F-PSMA和^(18)F-FDG PET/CT检查,淋巴结转移以手术病理或治疗后随访结果为金标准,统计淋巴结转移区域数量、区域内最大淋巴结短径和最大标准化摄取值(SUVmax),比较两种显像方法的检出结果差异;对比两种显像剂的诊断效能及SUVmax的差异。结果:21例存在淋巴结转移患者共确诊转移区域107组,PSMA和FDG分别检出85组和51组(Z=-3.773,P<0.001);各区域淋巴结PSMA检出数量均高于FDG(Z=-2.953、-2.496,P=0.003、0.013);以短径1.0 cm为界比较,PSMA的检出率均高于FDG(χ^(2)=14.988、6.016,P<0.001、P=0.014);两者诊断淋巴结转移的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为90.91%、90.00%、95.24%、81.82%及76.19%、50.00%、76.19%、50.00%,两者的敏感度差异有统计学意义(χ^(2)=7.074,P=0.048);PSMA在淋巴结病灶中SUVmax高于FDG(12.95和5.6,H=1353.50,P<0.001)。结论:^(18)F-PSMA对前列腺癌全身不同区域淋巴结转移灶的诊断效能均高于^(18)F-FDG。

RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响

目的:构建LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体,探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因表达的干扰作用。方法:针对PSMA mRNA序列设计合成3对编码shRNA的寡核苷酸链,退火形成双链,连接入含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的pSilencer2.1-U6-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定。使用脂质体转染的方法将重组质粒导入LNCaP细胞,G418筛选后RT-PCR、Western blotting检测其对PSMA基因干扰作用,并观察对LNCaP细胞生物学行为的影响。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建shRNA真核表达载体p-shRNA1,2,3转染LNCaP后,对细胞PSMA mRNA表达抑制率分别为33.15%、9.26%、41.97%,Western blotting结果显示对PSMA蛋白表达的抑制率分别为26.26%、6.47%、40.69%。选择抑制效率较高的p-shRNA3进行体外生长及侵袭力实验,发现干扰后对LNCaP细胞侵袭力增强,但是对细胞生长影响不大。结论:成功构建了人PSMA基因的RNAi的真核表达载体,并在LNCaP细胞中有效地发挥了对PSMA基因表达的干扰作用,初步发现PSMA在前列腺癌的侵袭中起负向调节作用,为进一步研究PSMA的生物学功能,探索前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础。