前列腺六段跨膜上皮抗原4对炎症环境下前列腺癌细胞增殖的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下前列腺六段跨膜上皮抗原4(STEAP4)在前列腺癌发展中的作用。方法采用LPS诱导前列腺癌细胞PC3和VCa P的炎症环境;将PC3和VCa P细胞分为对照组、LPS处理组(将PC3和VCa P细胞暴露于1μg/ml的LPS)、转染对照组(LPS+转染si-con)和转染沉默组(LPS+转染si-STEAP4)。转染24 h后采用蛋白免疫印迹检测STEAP4水平。采用酶联免疫吸附试验检测细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。采用CCK-8和Ed U染色检测细胞增殖能力。采用蛋白免疫印迹检测环鸟苷酸(c GMP)-c GMP依赖性蛋白激酶(PKG)信号通路相关蛋白表达水平。结果LPS处理组PC3和VCa P细胞的STEAP4蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组PC3和VCa P细胞的STEAP4蛋白表达水平与转染对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞的STEAP4蛋白表达水平显著低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞的IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组和转染对照组PC3和VCa P细胞的IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞的IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平显著低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞24、48、72 h的增殖活力均显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组和转染对照组PC3和VCa P细胞24、48、72 h的增殖活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞24、48、72 h的增殖活力均低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞的增殖活力显著高于对照组(P<0.05);LPS处理组和转染对照组PC3和VCa P细胞的增殖活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组PC3和VCa P细胞的增殖活力显著低于转染对照组(P<0.05)。LPS处理组PC3和VCa P细胞中c GMP、PKG1、PKG2和磷酸化血管扩张剂刺激磷酸蛋白(pVASP)/VASP的相对表达量显著低于对照组(P<0.05);转染对照组和LPS处理组PC3和VCa P细胞中c GMP、PKG1、PKG2和pVASP/VASP的相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染沉默组的PC3和VCa P细胞中c GMP、PKG1、PKG2和pVASP/VASP的相对表达量显著高于转染对照组(P<0.05)。结论STEAP4沉默能够抑制LPS诱导的前列腺癌细胞的增殖和炎症反应。STEAP4下调可能通过减少细胞增殖和炎症反应来抑制LPS诱导的肿瘤发生。

前列腺癌组织中前列腺跨膜上皮抗原表达的临床意义

目的 :探讨前列腺跨膜上皮抗原 (STEAP)在前列腺癌 (PCa)组织中的表达及与肿瘤病理分级之间的关系。方法 :采用免疫组化SP法 ,用STEAP单克隆抗体对前列腺不同病变组织及非前列腺肿瘤组织石蜡包埋切片进行免疫组化染色 ,其中PCa组织 131例 ,良性前列腺增生 (BPH)组织 16 4例 ,非前列腺肿瘤组织标本 5 6例。引入阳性面积单位概念判定STEAP染色强度。 结果 :2 95例前列腺病变组织中 ,仅 3例PCa和 5例BPH组织STEAP呈阴性表达 ,STEAP在PCa组织中明显高表达 ,非前列腺肿瘤组织染色均呈阴性。STEAP表达与PCa的Gleason分级之间存在显著负相关性。 结论 :STEAP能够用来判断PCa的预后 ,在PCa的免疫治疗方面具有良好的应用前景。

前列腺特异性膜抗原在前列腺癌中的表达及临床意义

目的研究前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌中的表达及其与Gleason分级之间的关系,同时探讨其在前列腺癌诊断中的价值。方法采用免疫组化EnVision法检测PSMA在前列腺癌、前列腺上皮内瘤变(PIN)和良性前列腺增生症(BPH)中的表达。结果PSMA在BPH、PIN和前列腺癌中均表达。在BPH中,PSMA阳性表达部位在前列腺腔缘或顶端/胞质表达,而在PIN中表达模式为胞质伴胞膜阳性,前列腺癌为顶端/胞质、胞质伴胞膜阳性或胞质表达阳性。PSMA在分化差前列腺癌中多为胞质表达,而在分化好的癌中为顶端/胞质和胞质伴胞膜表达。PSMA表达强度在PIN和前列腺癌中明显高于BPH(P<0.05),同时PSMA染色强度与Gleason评分呈正相关(P<0.05)。结论PSMA与Gleason分级密切相关,PSMA表达模式和染色强度的改变对PIN和前列腺癌诊断具有参考价值。

大鼠前列腺上皮细胞体外培养及其屏障功能的初步研究

目的:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,并观察其屏障功能。方法:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,采用免疫组化观察腺上皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,光镜以及电镜观察大鼠前列腺上皮细胞的结构组成。采用跨膜电阻测量仪检测前列腺上皮细胞的跨膜电阻,采用酚红渗漏实验检测前列腺上皮细胞的通透性。结果:大鼠前列腺上皮细胞在体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,紧密连接蛋白在相邻的腺上皮细胞之间表达,透射电镜结果显示相邻的单层腺上皮细胞之间存在紧密连接。体外培养的大鼠前列腺上皮细胞跨膜电阻在培养第8天可以达到(201.3±3.5)Ω/cm2,酚红渗漏实验显示随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低。结论:大鼠前列腺上皮细胞具有与脑毛细血管内皮细胞、肠上皮细胞等具有屏障功能的细胞相似的结构和功能,体外培养的大鼠前列腺上皮细胞具有屏障特性,可以作为血前列腺屏障研究的体外模型。

PSMA、CD44v6在前列腺癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨PSMA、CD44v6在前列腺癌中的表达及其与临床特征的关系,为临床预测前列腺癌的转移潜能及预后、指导治疗提供客观有效的指标。方法采用免疫组化S-P法检测PSMA、CD44v6在前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺组织中的表达情况。结果PSMA在前列腺癌组织与前列腺增生组织中的表达无显著性差异;肿瘤分化程度低及有淋巴结转移者PSMA表达明显高于分化程度高及无淋巴结转移者。CD44v6在正常前列腺组织及前列腺增生组织中无表达,在前列腺癌组织中的表达较高,并且分化程度低及有淋巴结转移者CD44v6表达明显高于分化程度高及无淋巴结转移者。结论前列腺癌组织中PSMA与CD44v6的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关,且两者的表达在前列腺癌组织中具有相关性。

前列腺组织STEAP表达与H2O2水平的关系

目的:探讨STEAP基因的功能。方法:应用RT-PCR、免疫印迹的方法,检测STEAP mRNA和蛋白在国人正常前列腺、前列腺癌组织中的表达水平。应用钼酸还原法检测正常前列腺内腺、外腺及前列腺癌组织H2O2水平,同时应用黄嘌呤氧化法测定3种组织中SOD水平,分析其与STEAP表达的相关性。结果:国人前列腺癌STEAP mRNA和蛋白高表达;前列腺癌组织中H2O2水平及总SOD水平明显高于正常前列腺。结论:STEAP的功能之一可能是诱导内源性H2O2水平增高,促进细胞快速生长。

糖尿病伴乳腺癌患者硫氧还蛋白结合蛋白、前列腺跨膜上皮抗原2、转录因子家族中成员GATA3的表达及血清氧化应激指标的变化

目的研究硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、前列腺跨膜上皮抗原2(STEAP2)、转录因子(GATA)家族中成员GATA3与糖尿病伴乳腺癌的关系,并分析患者术前及术后的血清氧化应激指标变化。方法检测45例糖尿病伴乳腺癌患者癌组织及对应癌旁组织中TXNIP、STAMP2、GAT.A3 mRNA表达量、蛋白水平及蛋白阳性表达情况,分析其临床病理特征,以及血清氧化应激指标的变化。结果乳腺癌组织中TXNIP mRNA、STAMP2 mRNA、GATA3 mRNA的相对表达量均下降(P<0.05)。TXNIP、STAMP2、GATA3蛋白在乳腺癌组织中的表达低于癌旁正常组织(P<0.05),且3个指标的表达阳性率为60%、66.7%、73.3%,均高于对应癌旁正常组织中的TXNIP蛋白表达阳性率(2.2%)(P<0.05)。乳腺癌组织中TXNIP、STAMP2、GATA3蛋白表达阳性率均与分化程度、淋巴结转移与临床分级相关(P<0.05)。患者术后血清MDA、髓过氧化物酶(MPO)均呈现先上升后下降变化趋势,SOD及总抗氧化力(TAC)呈现先下降后上升的变化趋势,术后6 d为转折点。结论 TXNIP、STAMP2、GATA3及血清氧化应激指标可能成为糖尿病伴乳腺癌患者诊断及治疗的参考指标。

跨膜型TGFα与分泌型TGFα增殖作用异同的比较

目的：比较跨膜型TGFα和分泌型TGFα促增殖作用的异同。方法：通过MTT法检测二型TGFα小鼠成纤维细胞NIH3T3促增殖作用，采用免疫组化法检测PCNA的表达；原位杂交检测HaCaT细胞IL-6mRNA的水平。结果：二型TGFα均可促进NIH3T3细胞的增殖和PCNA的表达以及提高人角质细胞HaCaT IL-6mRNA的水平，但S-TGFα比对TM-TGFα的作用强（P＜0．01）。结论：二型TGFα促细胞增殖、产生IL-6的效应基本相似，仅呈量的差异性，提示TM－TGFα可能在体内起维持和更新机体组织细胞代谢的作用，而S-TGFα则可能在组织损伤、炎症反应中发挥更强的效应。

前列腺跨膜上皮抗原在前列腺癌组织中的表达及与PSA的关系

目的探讨前列腺癌组织中前列腺跨膜上皮抗原（STEAP）表达及与前列腺特异性抗原（PSA）的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测65例前列腺癌（其中T19例、T214例、T317例、T425例，高分化癌37例、中分化癌12例、低分化癌16例）组织标本中STEAP的表达，引入阳性灰度值概念判定染色强度；分析STEAP表达水平与肿瘤分期、分级、血清PSA及游离PSA／总PSA（f／tPSA）比值的关系。结果65例患者血清PSA值为（27．65±8．34）ng／ml，f／tPSA为0．15±0．04。STEAP阳性表达63例，其中T17例、T214例、T317例、T425例，高分化癌37例、中分化癌11例、低分化癌15例。T1、T2、T3、T4前列腺癌组织中STEAP表达平均阳性灰度值（Gs）分别为26．8％、45．6％、62．3％、76．5％，高、中、低分化癌组织中STEAP表达平均Gs分别为71．2％、52．8％、34．4％。STEAP表达与肿瘤分期呈正相关（r=0．67，P〈O．01）；随着Gleason评分的增高，STEAP表达逐渐降低（P〈O．01）；STEAP表达与患者血清PSA无明显相关性（r=0．21，P〉0．05），而与f／tPSA比值呈负相关（r=-0．83，P〈0．01）。结论STEAP可作为判断前列腺癌浸润深度、分化程度的指标之一。

如何早期发现前列腺癌

前列腺癌是欧美国家最常见的肿瘤之一,其发病率在美国男性肿瘤中位于第1位,约占男性肿瘤的17%,是55岁以上男性的第2位癌症死因。多种资料显示,随着我国人均寿命延长,饮食结构和生活方式的改变,前列腺癌发病率逐渐上升,逐渐成为威胁我国老年男性健康的重要杀手。 早期局限在前列腺包膜内的肿瘤可以通过手术和放射治疗等达到根治的效果,晚期的肿瘤因为有局部的浸润和远处的转移可以通过内分泌治疗、化学治疗和放射性核素等方法治疗,有效延缓肿瘤进展,一般病程在5-7年。早期发现肿瘤可以达到根治,预后非常好,所以了解如何早期发现前列腺癌对其治疗及预后有重要意义。

载STEAP-1抗体前列腺癌靶向超声微泡的制备及体外寻靶实验研究

目的:采用生物素-亲和素法制备载前列腺跨膜上皮抗原-1(STEAP-1)抗体的靶向超声微泡,检测其结合率、稳定性及体外寻靶能力。方法:(1)体外培养人前列腺癌细胞LNCa P和PC3;(2)采用生物素-亲和素法将STEAP-1抗体与普通声诺维微泡结合,显微镜下观察靶向微泡荧光情况,通过流式细胞术检测其结合率与稳定性;(3)检测所制备的靶向微泡体外结合能力。结果:(1)荧光显微镜下两种前列腺癌细胞表面均发出绿色荧光,即呈阳性表达;蛋白免疫印迹实验结果显示,LNCa P细胞中STEAP-1呈相对高水平表达。(2)载STEAP-1抗体靶向微泡涂片后荧光显微镜下观察,微泡表面呈现环状绿色荧光,普通对照组镜下视野丢失;流式细胞术检测显示,所制备的靶向微泡大小均一,结合率明显高于对照组(P<0.05),振荡后结合率略小于振荡前,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)靶向微泡与前列腺癌细胞孵育反应后出现微泡向细胞区域聚集的现象;靶向微泡于细胞周边呈花环状黏附,LNCa P细胞的黏附率高于PC3细胞(P<0.05);两种细胞的前、后黏附率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)STEAP-1蛋白在人前列腺癌细胞LNCa P和PC3中均呈阳性表达,且前列腺癌分化早期代表细胞株LNCa P细胞呈相对高水平表达;(2)载STEAP-1抗体的靶向微泡可经生物素-亲和素法制备,STEAP-1抗体与普通微泡的结合率高且稳定性好;(3)载STEAP-1抗体靶向微泡体外寻靶可与人前列腺癌细胞牢固结合,且LNCa P细胞较PC3细胞结合率高。

新型口服纳米胶束跨膜转运机制研究

目的:对聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)胶束在单层上皮细胞的转运过程进行研究。方法:采用薄膜水化法制备包载荧光探针香豆素6的PEG-DSPE胶束,建立测定香豆素6含量的荧光分析法,考察马丁达比犬肾单层上皮细胞(Madin Darby canine kindey,MDCK)对香豆素6胶束的摄取和吸附作用,考察温度、不同内吞抑制剂对胶束在单层MDCK细胞跨膜转运的影响。结果:香豆素6 PEG-DSPE胶束可以很快被细胞吸附和摄取,随时间增加,吸附和摄取达动态平衡。胶束在单层细胞上的跨膜转运受温度的影响,4℃下,跨膜转运受到明显抑制;甲基-β-环糊精、高渗蔗糖、氯丙嗪及制霉菌素对胶束的内吞均有明显抑制作用,其中甲基-β-环糊精的抑制率高达88%。阿米洛利对胶束的内吞无影响。结论:胶束在MDCK单层细胞上的跨膜转运是主动的、能量依赖性的过程,跨膜转运机制是多因素的,包括了小窝蛋白介导的内吞过程和网格蛋白介导的内吞过程。

前列腺增生患者雌激素表达与组织成份定量比较的临床意义

前列腺增生是老年人的常见病,近年来有增多的趋势,我们应用免疫组化方法和单克隆抗体技术对前列腺增生组织雌激素受体(ER)、结蛋白(Desmin)、上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达进行观察和分析,并对增生成份进行定量比较和临床治疗意义分析.

STEAP1在膀胱移形细胞癌中的表达及其潜在诊断价值

目的探索前列腺六段扩膜上皮抗原1(STEAP1)在膀胱移行细胞癌中的表达及其潜在诊断价值。方法选取2021年6月至2022年12月于中国人民解放军联勤保障部队第九四O医院行外科手术治疗的52例膀胱移行细胞癌患者作为观察组,另外选取同期年龄、性别、基础疾病患病率等基础临床资料匹配的膀胱良性肿瘤患者52例作为对照组。通过酶联免疫吸附试验法、实时荧光定量聚合酶链反应测定两组患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平,以及对比不同病理参数患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平。通过Spearman相关性分析、二元Logistic回归分析筛选膀胱移行细胞癌发生及临床分期的危险因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)评价各指标对膀胱移行细胞癌的诊断及预测价值。结果观察组膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中晚期膀胱移行细胞癌患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平均显著高于早期膀胱移行细胞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。通过二元Logistic回归分析表明,患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平增高均是膀胱移行细胞癌发生及中晚期膀胱移行细胞癌的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA独立预测膀胱移行细胞癌发生的AUC分别为0.841(95%CI:0.760~0.922,P<0.001)、0.936(95%CI:0.893~0.980,P<0.001),均具有较高的预测效能。结论膀胱移行细胞癌患者膀胱肿瘤组织中STEAP1及STEAP1 mRNA相对表达水平与膀胱移行细胞癌发生及中晚期膀胱移行细胞癌呈正相关,提示STEAP1可作为诊断、预测膀胱移行细胞癌发生、发展的潜在标志物。

表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

目的构建表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)的DNA疫苗,观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA,将DNA疫苗pCDNA3.1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL/6小鼠体内,分离小鼠脾细胞,检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)反应。以B16-PSMA细胞攻击免疫后小鼠,观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性,经过免疫后的小鼠成瘤率降低,无瘤生存期延长,肿瘤生长缓慢,肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润,表明产生较强的抗肿瘤反应。结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用,为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路。

融合蛋白G3G6和HST1致敏DC疫苗抗黑色素瘤的药效学研究

探究促性腺激素释放激素(GnRH)与胃泌素释放肽(GRP)偶联的融合蛋白(G3G6)和热休克蛋白65(HSP65)与六跨膜前列腺上皮抗原(STEAP1)偶联的融合蛋白(HST1)致敏树突状细胞(DC)的效果和致敏后DC对B16F10黑色素瘤的抑制杀伤作用。利用实验室现存工程菌表达融合蛋白G3G6和HST1,按未致敏DC(US-DC)组,G3G6融合蛋白致敏DC(G3G6-DC)组,HST1融合蛋白致敏DC(HST1-DC)组和G3G6及HST1联合致敏DC(GH-DC)组致敏小鼠骨髓来源的DC分化成熟,获得融合蛋白致敏的相应DC疫苗。将B16F10黑色素瘤细胞以1×10~6个/只移植于C57BL/6J雄性小鼠构建黑色素瘤模型,DC疫苗免疫治疗,体内外实验探究DC疫苗的抗肿瘤药效。流式细胞术分析证明,融合蛋白有效刺激DC分化成熟;动物实验显示,与US-DC组相比,G3G6-DC黑色素瘤抑制率为35.75%,HST1-DC组为34.03%,GH-DC组为55.74%。研究结果初步证明,G3G6-DC和HST1-DC均可有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长(P<0.05),且联合用药优于单独用药(P<0.01)。

1株九江分离的柯萨奇A6病毒VP1基因分析及B细胞表位预测

目的对1株在九江地区分离的柯萨奇A6病毒(CoxA6)VP1区域进行克隆,并对其编码蛋白的结构、功能及B细胞表位进行分析和预测,为CoxA6疫苗制备和诊断方法的研究提供理论基础。方法采用RT-PCR法对CoxA6分离株VP1区进行扩增和克隆、序列分析,应用SigaIP、TMPRED、TMHMM、Big-PI Predictor、Cell-Ploc、PSORT、NetNES、Netphos、SOPMA、NetNGlyc、MotifScan、InterProscan、SMART、PROSITE、GOR4、Bepipred Linear Epitope Prediction等生物信息学方法预测其VP1基因编码蛋白特性和潜在的B细胞表位。结果该CoxA6分离株VP1基因编码305aa的多肽,分子量为33.5kDa。该蛋白无信号肽、跨膜区,是亲水性蛋白;二级结构主要以无规则卷曲为主,其次为α-螺旋及β-片层。该蛋白共有7个可能的B细胞抗原表位,位于151~173aa区域内的表位分值最高为2.774。结论成功克隆了1株CoxA6的VP1基因,并对其进行序列分析、蛋白质结构和B细胞表位预测,为制备CoxA6疫苗和开发诊断方法提供了分子生物学基础。

香豆素6胶束的制备及在单层上皮细胞摄取和跨膜转运研究

目的探讨胶束在马丁达比犬肾(Madin Darby canine Kidney,MDCK)单层上皮细胞的摄取和跨膜转运机制。方法采用溶剂挥发法制备包载荧光探针香豆素6的聚乙二醇-聚乳酸(PEG3000-PLA3000)胶束,建立高效液相色谱法测定香豆素6含量的方法,考察空白胶束对香豆素6胶束的竞争摄取,考察温度、抑制剂对胶束在单层马丁达比犬肾细胞跨膜转运的影响,Ca2+浓度和乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)的加入对胶束跨膜转运的影响。结果胶束可以很快被细胞摄取,胶束的细胞摄取可被空白胶束竞争抑制。胶束在单层细胞上的跨膜转运受温度和抑制剂的影响,说明胶束的跨膜转运是主动的、能量依赖性的过程;Ca2+浓度和乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸可以影响胶束的跨膜转运,说明胶束可以经过细胞旁路途径跨膜转运。从单层细胞顶侧经跨膜转运到达基底侧的胶束的量相对于加入到顶侧的胶束量非常少。结论胶束在马丁达比犬肾单层细胞上的跨膜转运是细胞旁路途径和经细胞途径的结合。