庆大霉素损伤后豚鼠前庭感觉上皮细胞凋亡和再生

目的 研究豚鼠前庭毛细胞庆大霉素损伤后前庭感觉上皮细胞凋亡和细胞增殖之间的关系。方法 成年豚鼠肌肉注射庆大霉素 10 0mg/kg/d连续 14d ,停用庆大霉素后1d和 10d ,腹腔注射Brdu 30 0mg/kg 6h后处死实验动物。免疫组化显色壶腹嵴中可见Brdu标记细胞 ,同时应用TUNEL技术原位显示凋亡细胞 ,观察应用庆大霉素后 1d和 10d壶腹嵴毛细胞损伤区域细胞凋亡和细胞增殖状况。结果 损伤后 1d ,可见TUNEL标记的凋亡细胞位于壶腹嵴的腔面细胞层 ,支持细胞层未发现TUNEL阳性细胞 ,及Brdu阳性细胞 ;损伤后修复 10d ,可见TUNEL阳性细胞位于壶腹嵴腔面细胞层 ,同时壶腹嵴支持细胞层出现Brdu阳性细胞 ,壶腹腔面细胞层未发现增殖细胞。结论 研究显示细胞凋亡是庆大霉素损伤后哺乳动物前庭毛细胞的一种死亡方式 ,并且细胞凋亡和细胞增殖发生的时间和部位一致。

胎儿前庭感觉上皮的定量学研究

目的:补充正常胎儿前庭感觉上皮的解剖形态学资料。方法:本组实验选用新鲜胎尸30例,通过球囊斑、椭圆囊斑、壶腹嵴的分离铺片技术,光学显微镜观察,结果输入JVC图象分析系统。结果:球囊斑、椭圆囊斑、壶腹嵴的毛细胞数分别为18634±297、32834±246、7459±94个,与成人相应部位比较差异不显著(P>0.05)。球囊斑、椭圆囊斑、壶腹嵴的表面积分别为1.95±0.14、3.62±0.36、0.87±0.06mm2,与成人相应部位比较差异显著(P<0.05)。随着胎龄的增加,前庭感觉上皮的面积也增加(0<r<1且P<0.05)。结论:胎儿的前庭感觉上皮的面积较成人的前庭感觉上皮的面积小,但感觉毛细胞数与成人的感觉毛细胞数差别不大。24周以上胎儿前庭感觉上皮的表面积与胎龄呈正相关。

慢性庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮细胞的凋亡和再生观察

目的 观察慢性庆大霉素中毒后豚鼠前庭上皮的损伤和修复过程 ,探讨前庭毛细胞凋亡和再生的关系。方法 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (terminaldeoxyuncleotidyltransferase -mediateddeoxyuridinetriphosphatenickendlabeling ,TUNEL)法 ,观察前庭感觉上皮细胞的凋亡 ,采用 5’ -溴 - 2 -脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,Brdu)免疫细胞化学法观察前庭上皮的再生过程。 结果 对照组没有观察到TUNEL和Brdu阳性细胞。停止庆大霉素注射 1天至 3周均可观察到TUNEL阳性细胞 ,但 1天组阳性细胞数量最多 ,3周仍有阳性细胞存在 ,阳性细胞主要位于毛细胞层。停止庆大霉素注射后 1天组支持细胞层和毛细胞层均有Brdu标记阳性细胞 ,3d组支持细胞层阳性细胞显著增多 ,1周组毛细胞层也出现较多阳性细胞 ,2周组Brdu标记阳性细胞主要位于毛细胞层 ,3周仍可观察到Brdu标记阳性细胞。结论 慢性庆大霉素耳中毒后豚鼠前庭上皮细胞凋亡增加 ,凋亡与增殖伴随存在 ,前庭毛细胞的损伤可能是其增殖的触发因素。增殖过程表现为支持细胞增生向毛细胞增生移行的趋势 ,支持细胞增殖并转化成毛细胞可能是前庭上皮细胞损伤修复机理之一。

豚鼠发育过程中前庭上皮IGF-1及IGF-1R的表达变化

目的检测胰岛素样生长因子－ｌ（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１，ＩＧＦ－ｌ）及其受体（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＩＣＦ－１Ｒ）在豚鼠发育过程中前庭上皮的表达和分布特点，并探讨其生物学特性及意义。方法 利用免疫组织化学的方法，以ＩＧＦ－１和ＩＣＦ－１Ｒ抗体为标记物，检测发育期豚鼠前庭器中的表达情况及分布特点，以增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）检测细胞增殖变化。结果ＩＧＦ－１及ＩＣＦ－１Ｒ可在豚鼠前庭上皮细胞中表达，随年龄增加而逐渐减少；ＰＣＮＡ表达于支持细胞，随年龄增加，阳性细胞数逐渐减少。结论 豚鼠正常发育过程中前庭上皮中有ＩＣＦ－ｌ及ＩＧＦ－１Ｒ的表达，为内源性的ＩＣＦ－ｌ通过旁分泌和自分泌方式在局部发挥其功能，壶腹嵴感觉上皮ＩＧＦ－１及ＩＧＦ－１Ｒ表达与细胞增殖相同步，ＩＧＦ－１在发育早期是强烈的有丝分裂原，促进细胞增殖、分化。

豚鼠内耳前庭上皮发育过程IGF-1及ERK的表达及其意义

目的 检测胰岛素样生长因子 1(insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)及其受体 (insulin likegrowthfactor 1receptor ,IGF 1R)在豚鼠前庭上皮发育过程的表达和分布特点 ,胞外信号调控激酶 1及 2 (extracellularsig nalregulatedkinase ,ERK1and 2 )的活性变化 ,并探讨其生物学特性及意义。 方法 利用免疫组织化学方法 ,以IGF 1和IGF 1R抗体为标记物 ,检测发育期豚鼠前庭器中的表达情况及分布特点 ;利用Westernblot方法检测ERK1及ERK2的活性变化。结果 IGF 1及其受体可在豚鼠前庭上皮细胞中表达 ,随年龄增加而逐渐减少。ERK1及ERK2的活性随年龄的增长而逐渐降低 ,且ERK2的活性高于ERK1。结论 豚鼠正常发育过程内耳前庭上皮中有IGF 1及其受体的表达 ,为内源性的IGF 1,可能通过旁分泌和自分泌方式在局部发挥其功能。壶腹嵴感觉上皮IGF 1及其受体表达、ERK1及ERK2的活性变化与细胞增殖相同步。

内耳基因治疗的研究进展

由于先天性异常、后天性损伤如病毒性疾病和耳毒性药物以及老年退行性变等原因，内耳疾病患者不断增多。内耳疾病主要表现为听力下降和眩晕，重者导致语言交流障碍和行动困难，是一类严重影响人类正常生活的常见难治性、致残性疾病。内耳疾病的病理以耳蜗和／或前庭感觉上皮的细胞（如毛细胞和支持细胞）及神经元不同程度受损为主，在临床上表现为各种感音神经性聋（如遗传性聋、突发性聋、噪声性聋、药物性聋、老年性聋和自身免疫性聋等）及各类前庭周围性眩晕（如梅尼埃病）等。

实验性壶腹崤冷冻对鸽内耳功能和形态的影响

本文观察了４０只家鸽壶腹嵴于不同低温（－４０℃至－１６０℃）、时间（６、９分钟）冷冻后的内耳功能和前庭感觉上皮改变。结果：早期为冷冻－７０℃９分钟开始形态有轻度改变。－９０℃６分钟改变明显，感觉上皮细胞浆内线粒体损害，大量空泡形成，纤毛融解。更深低温显示细胞分解的严重破坏。晚期改变程度近似早期，前庭功能发生相应变化。耳蜗功能和形态无损。研究得出，本术可选择性地破坏壶腹嵴上皮细胞降低其功能，选用低温、时间以－９０℃６分钟为宜。