西妥昔单抗对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、胶质细胞活化及脑组织淀粉样前体蛋白表达的影响

目的:探讨西妥昔单抗对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡、胶质细胞活化及脑组织淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:27只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、西妥昔单抗组,每组9只。结扎大脑中动脉制备缺血再灌注模型,立即经侧脑室注射给予西妥昔单抗(106μg/d),持续7 d。每组选取3只,在术后第3和7天进行神经功能评分。每组分别在缺血再灌注术后第3和7天处死3只,取脑组织制备冰冻切片,用免疫荧光染色观察APP及胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,用TUNEL染色法检测神经元凋亡指数。提取新生大鼠大脑皮层组织制备胶质细胞悬液,培养的胶质细胞换成含有西妥昔单抗(10μg/mL)的无糖无血清培养基在缺氧培养箱中培养2 h,然后换成正常糖/血清的培养基在正常氧的培养箱中继续培养6 h,收集细胞,观察胶质细胞GFAP荧光强度的变化,对照组不进行缺氧/复氧处理,缺氧/复氧组不加西妥昔单抗。结果:与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠神经功能评分升高,凋亡指数增加,胶质细胞GFAP免疫荧光强度增强,APP表达升高(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,西妥昔单抗组神经功能评分下降,凋亡指数降低,GFAP免疫荧光强度减弱,APP表达下降(P<0.05)。体外实验结果显示,与对照组比较,缺氧/复氧组胶质细胞GFAP免疫荧光强度增强,而西妥昔单抗组较缺氧/复氧组降低(P<0.05)。结论:西妥昔单抗能促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复,其机制可能与减少APP的表达、抑制神经元凋亡及胶质细胞活化有关。

淀粉样前体蛋白胞内结构域对阿尔茨海默病模型小鼠神经发生和学习记忆的影响

【目的】探讨淀粉样前体蛋白胞内结构域(AICD)对阿尔茨海默病(AD)模型动物神经发生、学习记忆的影响。【方法】本研究使用免疫荧光染色检测AICD转基因小鼠来源的体外培养的神经前体细胞(NPCs)、胚胎大脑皮质、成年海马齿状回(DG)中增殖和分化的细胞数目;水迷宫实验检测老年AICD转基因小鼠对学习记忆能力影响;生物信息学预测和分析潜在的分子机制。【结果】免疫荧光染色结果显示AICD转基因模型体外NPCs、胚胎皮质、海马DG区域的神经干细胞和神经元数量减少(P<0.05),即AICD抑制不同时期AD模型小鼠的神经发生。水迷宫结果显示AICD增加AD模型小鼠逃逸潜伏期,减少其跨越平台次数,并减少DG区域神经元数目(P<0.05)。生物信息学结果显示,AICD参与调节AD发病进程中神经发生和学习记忆的靶点有1723个,关键靶点有TP53、CTNNB1、Akt1、EGFR、SRC、EP300、HDAC1、STAT3、HSP90AA1和MAPK1;另外,KEGG通路注释分析发现PI3KAkt、HIF-1等信号通路在AICD调节神经发生和学习记忆起关键作用。【结论】表明AICD可以抑制AD模型小鼠海马神经发生进而损害学习记忆能力,这可能与PI3K-Akt和HIF-1等信号通路有关。本研究为进一步理解AICD在AD发病进程中作用提供实验依据。

罕见前纵隔上皮样黏液纤维肉瘤1例

目的 对上皮样黏液纤维肉瘤的临床病理特点及治疗等进行探讨与分析。方法 本院2021年10月29日收治的1例罕见前纵隔上皮样黏液纤维肉瘤患者,行胸腔镜下纵隔病损切除术++胸腔闭式引流术,术后给予前纵隔调强放疗,95%PTV6000cGy/30F。对其进行病理组织学及相关治疗等的分析。结果 患者因体检查胸部CT提示前纵隔结节来本院行胸腔镜下纵隔病损切除术,无胸闷胸痛,患者既往有肝细胞肝癌病史。病理诊断为:“前纵隔”上皮样黏液纤维肉瘤Ⅱ级(上皮样肿瘤区域约占全部肿瘤的30%)。结论 本例发生于前纵隔,较罕见。目前,黏液纤维肉瘤仍以手术治疗为主,将肿瘤完整切除,并使各切缘阴性,术后辅助放疗可降低局部复发率。

血栓弹力图参数、血小板平均体积/淋巴细胞比值与急性大动脉粥样硬化前循环脑梗死患者脑损伤程度的相关性

目的探讨血栓弹力图(TEG)参数、血小板平均体积/淋巴细胞比值(MPVLR)与急性大动脉粥样硬化前循环脑梗死(ACCI)患者脑损伤程度的相关性。方法选取2020年8月-2022年6月淮北矿工总医院收治的136例ACCI患者为研究组,另选取89例同时期来本院进行体检的健康志愿者为对照组。比较两组TEG参数(CI值、MA值、R值、α角、K值)和MPVLR水平。将患者根据NIHSS评分分为轻度组(54例)、中度组(48例)和重度组(34例)。比较轻、中、重度组患者基线资料、TEG参数和MPVLR水平。采用有序Logistic回归分析影响ACCI患者脑损伤程度的危险因素。采用Pearson相关性分析TEG参数、MPVLR水平与患者脑损伤的关系。结果研究组CI值、MA值、α角、MPVLR水平均高于对照组(P<0.05),R值、K值水平均低于对照组(P<0.05)。中重度组患者D-二聚体(D-D)、CI值、MA值、α角、MPVLR水平均高于轻度组(P<0.05),R值、K值水平均低于轻度组(P<0.05)。有序Logistic回归分析显示,D-D、CI值、MA值、R值、α角、K值、MPVLR水平异常均是影响ACCI患者脑损伤程度的危险因素(P<0.05)。Pearson相关性分析显示CI值、MA值、α角、MPVLR水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.525、0.586、0.574、0.491,P<0.05),R值、K值水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.425、-0.464,P<0.05)。结论TEG参数与MPVLR是影响脑损伤严重程度的危险因素,且CI值、MA值、α角、MPVLR与ACCI患者脑损伤程度呈正相关,R值、K值与ACCI患者脑损伤程度呈负相关。上述指标可用于评估ACCI患者脑损伤严重程度。

表观遗传和蛋白质翻译后修饰对β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达调控的研究进展

β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)最早于1999年被发现鉴定,它是催化β淀粉样蛋白(Aβ)生成的关键限速酶,而Aβ单体的异常聚集所形成的淀粉样斑块是阿尔茨海默病(AD)的典型病理特征。在AD患者的大脑及体液中BACE1的浓度及活性异常增高,BACE1在AD的病理级联过程中发挥重要作用。因此,BACE1是减少Aβ生成,改善早期AD的重要药物靶标。

小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用(英文)

目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法该研究将设计好的一对寡核甘酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带两个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFP-APP重组质粒。利用EGFP作为报告基因,在COS-7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFP-APP的重组质粒来观察沉默效应。结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。

淀粉样前体蛋白在痴呆模型大鼠背海马结构内的表达

研究用AlCl_3灌胃,建立鼠老年性痴呆模型.用免疫细胞化学ABC法,观察了淀粉样前体蛋白在背海马结构的表达.结果显示在痴呆模型鼠背海马结构双侧各部均可见较强的淀粉样前体蛋白表达,且与对照组间有显著性差异.光镜结果,阳性反应产物主要位于神经元核周质和突起及其分支.细胞大小不等,多数淀粉样前体蛋白样免疫反应阳性神经元胞体为梭形和锥形.背海马结构内淀粉样前体蛋白样免疫反应神经元主要分布在CA1、CA2、CA3和CA4区的锥体细胞层、光辉细胞层及齿状回多形细胞层,其中在CA1和CA3区淀粉样前体蛋白样免疫反应神经元数量最多.说明海马CA1、CA3区淀粉样前体蛋白表达的改变与老年性痴呆的发生有密切关系;同时也提示铝的毒性作用可改变淀粉样前体蛋白在脑内的表达水平.

维生素E抑制痴呆模型大鼠海马结构淀粉样前体蛋白表达的实验研究

目的观察ＶＥ对ＡＤ大鼠海马β－ＡＰＰ表达的影响。方法使用三氯化铝诱导建立ＡＤ模型大鼠。用ＶＥ（１０ｍｇ／ｄ／只）对ＡＤ模型大鼠进行灌胃治疗３月。采用行为测试，光镜免疫细胞化学ＡＢＣ法，观测大鼠海马结构淀粉样前体蛋白反应阳性神经元的数目和β－淀粉样前体蛋白表达的变化。结果ＶＥ组大鼠受电击次数和潜伏期较对照组明显减少和延长（Ｐ＜０．０５）；ＶＥ组大鼠海马结构齿状回和ＣＡ１区淀粉样蛋白反应阳性神经元的数目较对照组均有明显减少（Ｐ＜０．０５），β－淀粉样前体蛋白呈弱阳性表达。结论ＶＥ可以改善ＡＤ模型大鼠的学习记忆，降低海马结构β－淀粉样前体蛋白过度表达。

川续断对Alzheimer病模型大鼠海马内淀粉样前体蛋白表达的影响

有关Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）的治疗尚无有效的措施。文中用铝诱导建立ＡＤ大鼠模型，将ＡＤ大鼠分为对照、续断和ｖｉｔａｍｉｎＥ（ＶＥ）三组，用川续断／ＶＥ处理ＡＤ大鼠１，３，５个月，分别进行行为学测试、光镜形态学观察、免疫细胞化学图像分析处理。结果：１．川续断／ＶＥ处理１，３，５个月三个时间段中三组间①大鼠学习记忆力有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；②海马结构内淀粉样前体蛋白样免疫反应（ＡＰＰ－ＬＩ）神经元的胞体平均截面积及光密度（ＡＳＯ）各存在有统计学差异（Ｐ＜０．０５）。２．续断组和ＶＥ组于川续断／ＶＥ处理１，３，５个月间的纵向比较显示①大鼠学习记忆力也有显著性差异（Ｐ＜０．０５或０．０１）；②海马结构内ＡＰＰ－ＬＩ神经元的胞体平均截面积及ＡＳＯ各存在有统计学差异（Ｐ＜０．０１）。提示川续断和ＶＥ对淀粉样前体蛋白在神经元的过度表达有明显的抑制作用，并且可以改善大鼠学习记忆力。

淀粉样前体蛋白生理功能研究进展

阿尔茨海默病(alzheimer's diasese,AD)是一种神经退行性疾病,以β淀粉样肽(βamyloid,Aβ)为主要成分的老年斑是脑内的主要病理改变,因此Aβ的过量产生和沉积是AD主要发病机制。Aβ主要由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)经β和γ分泌酶异常剪切产生,APP表达增加被认为是AD的风险因素之一,目前关于APP的研究主要集中在作为Aβ的前体如何剪切及在AD发病中的作用,而对APP的生理功能关注较少。近年研究发现APP具有广泛的生理功能,APP缺失可以影响学习记忆,这与其剪切及Aβ的产生均无关。APP广泛表达于多种器官和组织,生理功能具有多样性,因此了解APP的生理功能将为AD发病机制的研究与治疗干预提供重要的理论依据。本文对此进行综述。

β-淀粉样前体蛋白与β-淀粉样蛋白在糖尿病大鼠脑组织中的表达意义及行为学相关性研究

目的观察糖尿病大鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)、β-淀粉样前体蛋白(APP)表达,探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病中的作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分组:正常组(N组)、假手术组(S组)、4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组)。穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,蛋白质免疫印迹法、RT-PCR和酶联免疫吸附法检测APP,酶联免疫吸附法检测Aβ,用图像分析仪测定光密度值。结果模型组与正常组、假手术组比较有明显差别(P<0.01),模型组APP、Aβ表达明显增高。3个模型组比较无显著性差异,Aβ与APP正相关,APP表达水平与学习、记忆损伤负相关,Aβ与学习、记忆损伤正相关。结论APP、Aβ在糖尿病大鼠脑组织表达增高,糖尿病糖代谢异常增强Aβ表达参与了阿尔茨海默病的发病机制,APP具有双重作用机制,既具有脑保护作用,又有增高Aβ表达作用。

H102对APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的:研究H102对APP695转基因模型小鼠脑内淀粉样蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响方法:9月龄转基因小鼠随机分为模型组和药物注射组,正常对照组采用月龄和性别与之相匹配的C57BL/6J小鼠。药物注射组给予侧脑室注射H102,每只每次3μl,连续10d;模型组和正常对照组给予等体积NS。应用免疫组织化学结合刚果红组织学染色,普通光学显微镜观察海马和颞叶皮层蛋白表达的变化。免疫印迹法检测小鼠大脑皮层APP蛋白的表达。结果:Aβ和APP免疫组化染色结果显示对照组海马CA1区神经元胞浆着色呈阴性或弱阳性,模型组较对照组阳性细胞增多,表达增强,胞浆着色明显加深。药物注射组同模型组相比,胞浆着色变淡,表达减弱。刚果红染色观察转基因小鼠模型组和H102注射组大脑颞叶皮层和海马的淀粉样斑块,可见H102注射组淀粉样斑块数较模型组明显减少。正常对照组未见阳性淀粉样斑块。免疫印迹检测显示模型组APP蛋白表达明显增加,给药组与模型组相比具有统计学意义。结论:APP695转基因小鼠大脑CA1区Aβ蛋白和APP蛋白表达增加,H102能够明显抑制该转基因小鼠Aβ蛋白和APP蛋白表达。

阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10的mRNA表达及突变研究

于上海地区汉人群中,探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周血中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10(APP9～10)的mRNA表达水平,并作cDNA的点突变检测。采用半定量竞争性反转录聚合酶链反应(semi quantitivecompetitiveRT PCR)技术测定APP9～10的mRNA表达水平;以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态(RFLP)方法检测基因组DNA中载脂蛋白E基因(APOE)和早老素1基因(PS1)多态;APP9～10cDNA的点突变检测采用变性梯度凝胶电泳法。结果表明(1)AD患者中APP9～10的mRNA表达水平显著高于健康老人(P<0.05);(2)作为AD的主要风险因子,APOE ε4等位基因并不影响AD患者中APP9～10的mRNA表达水平,而另一可疑风险因子PS1基因1等位基因的存在却可显著增加AD患者中APP9～10的mRNA表达;(3)AD患者中不存在APP9～10cDNA的点突变。提示上海汉人群中,AD患者外周血中APP基因外显子9、10的mRNA表达水平显著升高,也许这一生物学改变可作为一种生物学辅助诊断指标应用于AD的临床研究。

广东海风藤提取物对痴呆鼠脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的 研究老年痴呆鼠脑内 β淀粉样前体蛋白基因 (β APP)表达的改变 ;及广东海风藤提取物 (HS2 )对老年痴呆鼠学习记忆及脑内 β APP基因表达的影响。方法 选用昆明种小鼠 ,腹腔注射D 半乳糖和灌胃三氯化铝制备老年痴呆小鼠模型 ,三个治疗组在造模的同时分别灌胃低、中、高剂量的HS2 。通过Morris水迷宫和半定量反转录聚合酶链反应 (RT PCR)来测定HS2 对老年痴呆模型小鼠学习记忆和脑内 β APPmRNA含量的影响。结果 老年痴呆模型小鼠学习记忆成绩下降 ,脑内 β APP基因表达增强。模型小鼠口服低、中、高剂量HS2 能提高其学习记忆成绩 ,降低脑内β APPmRNA含量并呈现一定的量效关系。 结论 HS2 能改善老年痴呆鼠学习记忆能力并下调β APP基因的表达。

红花黄酮对孵育海马脑片分泌型淀粉样前体蛋白释放的影响

目的 应用海马脑薄片孵育模型 ,考察红花黄酮对于孵育海马脑片分泌型淀粉样前体蛋白 (sAPP)释放的影响。方法 通过应用红花黄酮孵育海马脑薄片 ,应用WesternBlot技术 ,使用特异性的针对sAPP氨基末端的单克隆抗体 2 2C11检测释放到孵育液中的sAPP。结果 红花黄酮 (浓度为 1.0× 10 -9～ 1.0× 10 3 μmol·L-1)对sAPP的作用则表现出明确的双向性 ,小剂量增加其释放 ,而较大剂量又抑制其释放。结论 红花黄酮对sAPP的作用显示明确的双向性 ,值得进一步研究。

海马注射β-淀粉样蛋白前体蛋白抗体诱导神经元的退行性变及学习记忆障碍(英文)

探讨海马内注射淀粉样蛋白前体蛋白(APP)抗体诱导细胞表面APP的铰链是否影响大鼠的水迷宫行为学以及是否诱导神经元的退行性改变,并进一步探讨其可能的机制.成年雄性SD大鼠海马内分别注射生理盐水、对照IgG和APP抗体.水迷宫行为学检测测试动物的学习和记忆能力.Cresyl Violet(CV)和Fluoro-Jade B染色观察神经元的退行性变.免疫组织化学方法检测MAP-2和磷酸化paxillin及磷酸化tau蛋白在海马的异常表达和分布.海马内注射APP抗体可延长动物的寻台潜伏期,减少大鼠在平台所在象限的探索时间和穿梭次数.CV和Fluoro Jade-B染色结果显示,海马注射APP抗体可导致海马锥体细胞的死亡和退变.同时伴MAP2免疫染色的减少和磷酸化paxillin及磷酸化tau的免疫染色的增加.上述结果表明,海马内注射APP抗体可诱导学习和记忆功能障碍及神经元的退行性改变,其机制可能与MAP-2和磷酸化paxillin及磷酸化tau的异常表达分布有关.

风药、补虚药对脑缺血大鼠淀粉样β蛋白及其蛋白前体表达的影响

目的:观察侯氏黑散方中风药、补虚药、风药补虚药联用对脑缺血大鼠淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响。方法:线栓法阻断大鼠大脑中动脉,制备局灶性脑缺血大鼠模型,采用免疫组化与医学图像分析相结合的方法检测侯氏黑散方中风药、补虚药、风药补虚药联用对APP及Aβ42表达的影响。结果:脑缺血24h、48h,模型组大鼠皮层APP、Aβ42表达较假手术组明显增强(P<0.01)。缺血24h,补虚药、风药补虚药联用可明显下调APP表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);缺血48h,风药组大鼠皮层APP表达较模型组明显降低(P<0.05);缺血48h,风药补虚药联用可明显降低Aβ42表达,与模型组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:风药补虚药联用可明显下调APP表达,抑制Aβ42的异常积聚,降低Aβ42的毒性,从而发挥抗脑缺血损伤的作用。

二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠脑内β淀粉样前体蛋白及分拣蛋白相关受体1 mRNA表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(APP)及分拣蛋白相关受体(SORL)1表达的影响。方法 3月龄APP/PS1双转基因鼠50只,随机分为模型组、阳性药石杉碱甲组、TSG高、中及低(0.3,0.1,0.033 g/kg)剂量组,另取同龄C5B7L/6J鼠10只为正常对照组。各组给予相应药物60 d后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠海马神经元的一般结构;免疫组化SABC法检测各组小鼠脑组织APP蛋白的表达。FQ-PCR法检测SORL1 mRNA表达情况。结果与模型组比较,各组小鼠大脑皮层及海马区形态均有不同程度恢复;APP表达量均下降(P<0.01,P<0.05);SORL1 mRNA表达均有所上调(P<0.05)。结论 TSG治疗阿尔茨海默病(AD)的机制可能与促进SORL1 mRNA生成、抑制APP异常代谢、减少老年斑的生成等机制有关。

急性髓系白血病骨髓“前ALIP”样结构的特征研究

本研究提出骨髓组织"前ALIP"样结构的概念,采用计算机图像处理技术研究其特征,并探讨其与急性髓系白血病(AML)的相关性。以抽吸-活检一步取材法采集化疗后完全缓解(CR)的AML患者骨髓,常规方法制作骨髓病理切片、光学显微镜成像系统摄片;比较4种计算机图像分割技术,筛选最佳方法对前体细胞进行识别、定位;结合形态学及面积法分割骨小梁;计算AML患者骨髓图像中单个及2个聚集前体细胞数量并以欧式距离变换法检测其与骨小梁的相对距离,与正常骨髓比较;分析在ALIP出现之前前体细胞定位、定量异常与AML的关系,探讨"前ALIP"的结构特征。结果表明,与8-sobel算子、canny算子、分水岭法相比,本研究创建的基于形态学的计算机图像分割方法能准确识别骨髓切片中前体细胞,同时结合面积法实现了骨小梁的分割。检测CR组骨髓切片中单个前体细胞为(19.27±11.60)个/mm2,2个聚集前体细胞为(1.77±1.76)簇/mm2,均明显高于正常对照组(p<0.05)。欧式距离变换法检测前体细胞与骨小梁间相对距离的结果显示,CR组单个前体细胞与骨小梁相距(230.12±97.68)μm(523±222像素),与正常对照组(260.92±99.88)μm(593±227像素)相比明显靠近骨小梁(p<0.05);而CR组两个聚集细胞与骨小梁相距(274.56±139.48)μm(624±317像素),与正常对照组相比无统计学差异(p>0.05),但与CR组单个前体细胞相比明显向骨小梁间区迁移(p<0.05)。结论:前体细胞从正常定位、定量到ALIP1结构出现之前存在更早期的骨髓异常状态,即"前ALIP"状态,其结构特征为定位或定量异常的单个及2个聚集前体细胞。

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样前体蛋白表达的影响

目的探讨耳针对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆障碍的改善及其与β淀粉样前体蛋白(APP)表达的关系。方法采用4血-管阻断(4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,针刺脑、肾耳穴后,作行为学检测、免疫组化、图像分析。结果迷宫学习记忆能力测试表明,耳针组大鼠成绩优于VD模型组(P<0.05)。耳针组大鼠脑内APP免疫阳性神经细胞数低于VD模型组,其平均光密度值高于VD模型组(P<0.05)。结论耳针改善了VD模型大鼠学习记忆,这可能是耳针抑制了VD大鼠APP的过量表达,从而对VD模型大鼠海马神经元起到保护作用。