抗－HBe阳性患者乙肝病毒前核心基因的扩增与克隆

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法从９例抗－ＨＢｅ阳性的乙肝患者血清中扩增了含ＰｒｅＣ和Ｃ基因的ＤＮＡ片段，并分别与载体ｐＵＣ１８相连接，成功地克隆入大肠杆菌中，为后续的ＤＮＡ测序及分析ＰｒｅＣ基因突变打下了基础。并建立了快速、简便的ＰＣＲ直接筛选和鉴定阳性克隆的方法。

我国乙型肝炎患者乙肝病毒前核心基因的分析

我国乙型肝炎患者乙肝病毒前核心基因的分析卫清，张菁，闻玉梅（上海医科大学医学分子病毒室上海２０００２３）关键词乙型肝炎病毒ｅ抗原，乙型肝炎病毒前核心基因，核苷酸序列分析乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的核衣壳是由核心基因（Ｃ）编码，由１８３个氨基酸组成。Ｃ基因...

慢性HBV感染者HBV前C区/基本核心启动子区基因突变与临床应用

目的:探讨2010年10月至2013年6月来我院门诊及住院慢性HBV感染者中HBV前C(Pre C)区/基本核心启动子(BCP)区基因突变与其病程进展的相关性。方法:165例慢性HBV感染者血清生化指标检测,血清HBV DNA含量和HBe Ag定性检测,HBV Pre C区/BCP区突变率比较,分析Pre C区l896、BCP区1762/1764变异在HBV携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)和慢性乙型肝炎肝硬化(CHB-LC)患者中的分布。结果:血清生化指标在慢性HBV感染者病程发展中呈现相关性。与As C组比较:CHB组、CHB-LC组患者血清ALT、AST、AFP、TBA水平升高,差异有显著性意义(p<0.01),呈显著正相关,而TP、Alb、A/G水平降低,差异有显著性意义(p<0.05),呈负相关。HBe Ag(+)、HBe Ag(-)的标本中,BCP的突变率高于前C区突变率,差异有非常显著性意义。BCP区1762/1764双突变的突变率高于Pre C1896突变率。As C、CHB、CHB-LC 3组患者Pre C A1896、BCP区1762/1764变异率依次升高,与As C组比较,CHB组差异有显著性意义(P<0.05);CHB-LC组差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:对165例慢性HBV感染者观察,HBe Ag(+)/HBe Ag(-)患者及其病程不同发展阶段,Pre C/BCP出现相关联的突变率。特别需要注意的是HBe Ag(-)的慢性HBV感染者BCP区的突变率高于Pre C区的突变率,需要慎防HBV复制的危害性。HBV Pre C区/BCP区突变率可以预测到慢性HBV感染者病情的发展程度,对临床此类患者的研究具有重要意义。

乙型肝炎病毒前核心区基因变异的研究

应用聚合酶链（ＰＣＲ）方法，分别扩增乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）标志为ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗ＨＢｃ（＋）的慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）１８例（第一组），ＨＢＶ标志为ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｅ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）的慢性乙型肝炎２１例（第二组），以及ＨＢＶ标志与第二组相同的体检健康的正常人１５例（第三组）。其ＰＣＲ的阳性率分别为８３．３％，７１．４％和３３．３％。第二组与第三组相比有显著差异（Ｐ＜０．０５），提示病毒的复制与病情活动有关。对ＰＣＲ扩增后阳性的３０例进行克隆测序分析，发现有５例前核心区基因有变异，均见于第二组病例中。第一组病例无穷变株出现，二组相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。其突变情况为：２例１８９８位Ｇ→Ａ突变，其中１例临床表现为重型肝炎，１例为１９０１位Ｇ→Ａ突变，１例为１８９１位Ｔ→Ｃ突变，另１例为１８３９位Ａ→Ｇ突变。后二种突变形式目前尚未见报道，所有这些均表明ＨＢＶ标志为ＨＢ－ｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｅ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）的慢乙肝病例，ＨＢＶ前核心区基因变异的发生率较高，可能与病毒迫于机体免疫压力所产生的免疫逃避有关。

乙型肝炎的遗传学研究进展

业已表明,在乙型肝炎(HB)的发生、发展中可有许多遗传学变化,因此,从遗传学角度研究HB,为探讨HB的发病机制、传播、预防和治疗提供了一条新的研究途径。本文对HB的遗传学进展加以综述。

基于生物信息学构建结肠癌内源性RNA网络

目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的高发病率和高病死率对人类健康构成了巨大威胁。环状RNA(circRNAs)和微RNA(microRNAs,miRNAs)作为相互竞争的内源性RNA(endogenous RNAs,ceRNAs),已被发现在致癌过程中发挥了重要作用。本文通过构建CRC中的circRNA/miRNA/mRNA调控网络,旨在探讨CRC发生过程中的具体分子机制。方法:从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库获得CRC的circRNA测序数据,筛选差异circRNA并用癌症特异性circRNA数据库(Cancer-specific CircRNA Database,CSCD)鉴定其结构;采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载miRNAs和mRNAs测序数据并筛选差异基因;应用CircInteractome数据库预测差异circRNA对应的miRNA;采用DIANA、miRanda、PicTar和TargetScan数据库预测差异miRNA对应靶基因;应用R语言进行靶基因的基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)的富集分析;采用蛋白质相互作用分析数据库String结合网络可视化分析软件Cytoscape3.7.2构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图和筛选核心基因;验证前10位核心基因(Top10 hub基因)的mRNA表达量;采用Cytoscape3.7.2构建circRNAs/miRNAs/mRNAs和circRNAs/miRNAs/Top10 hub mRNAs网络图;采用real-time PCR检测hsa_circRNA_0065173、hsa-mir-450b、hsa-mir-582、腺苷酸环化酶5(adenylate cyclase 5,ADCY5)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(muscarinic acetylcholine receptor M2,CHRM2)、大麻素I型受体(cannabinoid receptor 1,CNR1)和溶血磷脂酸受体1(lysophosphatidic acid receptor 1,LPAR1)在CRC组织和癌旁组织中的表达水平。结果:共筛选出14个差异circRNAs,在CSCD上可查询到8个;获得circRNAs靶向miRNAs 34个;mRNA在进行PPI和Top10 hub基因筛选时,得到Top10 hub基因分别为CHRM2、黑色素浓集激素受体2(melanin concentrating hormone receptor 2,MCHR2)、G蛋白γ3亚单位(G-protein gamma 3 subunit,GNG3)、神经肽Y受体Y1(neuropeptide Y receptor Y1,NPY1R)、CNR1、LPAR1、ADCY5、腺苷酸环化酶2(adenylate cyclase 2,ADCY2)、G蛋白偶联受体γ7抗体G(gamma 7,GNG7)、趋化因子12(chemokine 12,CXCL12);Top10 hub基因的表达量验证显示:Top10 hub基因在CRC中均下调;构建的网络图表明hsa_circRNA_0065173可能通过调控hsa-mir-450b、hsa-mir-582而调控ADCY5、CHRM2、CNR1、LPAR1基因,这些基因可能可作为治疗CRC的潜在相关靶点。Realtime PCR结果显示:与癌旁正常组织比较,CRC组织中hsa_circRNA_0065173、ADCY5、CHRM2、CNR1和LPAR1的表达水平均显著降低(均P<0.05);hsa-mir-450b、hsa-mir-582的表达水平均显著升高(均P<0.05)。结论:本研究构建了潜在的circRNAs/miRNAs/mRNAs网络,它可为circRNA通过ceRNA机制介导CRC的发生、发展提供新的见解。