重叠延伸PCR法构建人肿瘤坏死因子前体水解酶系列突变重组体及稳定转染HeLa细胞株的建立

目的构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系。方法以THP1细胞cDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长cDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体。在此基础上,应用重叠延伸PCR扩增出缺失解整合素区的TACE重组cDNA和缺失酶区的TACE重组cDNA,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pIRES2.0-EGFP中,同时TACE全长也构建入pIRES20.-EGFP。这3种真核表达载体经酶切和测序鉴定后,用脂质体法转染HeLa细胞,经过G418筛选,获得稳定转染的HeLa细胞株,采用RT-PCR、Westernblot及荧光法检测表达。结果成功构建了pIRES2.0-EG-FP/FL-TACE、pIRES20.-EGFP/disΔ-TACE、pIRES20.-EGFP/metΔ-TACE真核表达载体,并建立了稳定转染的HeLa细胞株,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染HeLa细胞株的建立为进一步研究TACE功能奠定了必要的实验基础。

超高分子量阴离子聚丙烯酰胺的合成

采用前水解法聚合工艺及低温偶氮引发体系，制备超高分子量阴离子聚丙烯酰胺。试验考察了聚合温度、引发剂加量、链转移剂加量及助溶剂加量等因素对产品性能的影响，得到了最佳合成条件：聚合温度5～25℃，偶氮引发剂加量100～300 mg／L，链转移剂加量380～550 mg／L，助溶剂加量2％～5％。

鹿茸多肽对轻度认知功能障碍模型大鼠海马组织中ADAM10、BACE-1表达的影响

目的观察鹿茸多肽对轻度认知功能障碍模型大鼠学习记忆功能及海马组织中解聚素和金属蛋白酶10(A DisintegrinAnd Metalloproteinase 10,ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1,BACE-1)表达的影响,探讨鹿茸改善MCI学习记忆障碍的相关作用机制。方法 Wistar大鼠60只随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性对照组、鹿茸多肽高、中、低剂量组,连续给药21 d,末次给药后1 h,腹腔注射氢溴酸东莨菪碱复制MCI大鼠模型。Morris水迷宫观察各组大鼠行为学变化,Elisa法检测各组大鼠海马组织中ADAM10和BACE-1含量,RT-PCR法检测各组大鼠海马组织中m RNA表达水平。结果 Morris水迷宫结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可以延长模型动物的平台穿越次数,增加有效区停留时间(P <0.05或P <0.01)。Elisa检测结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可明显提高模型动物海马组织中的AMAM10、降低BACE-1含量(P <0.05)。RT-PCR检测结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可明显提高模型动物海马组织中的AMAM10、降低BACE-1 mRNA表达水平(P <0.05或P <0.01)。结论鹿茸多肽可以提高氢溴酸东莨菪碱所致的MCI模型大鼠的学习记忆能力,其作用机制与提高海马组织中ADAM10m RNA表达水平,抑制BACE-1 mRNA表达有关。

联芳基氨基噻嗪类BACE1抑制剂的3D-QSAR分析与分子对接研究

目的:为新型高效联芳基氨基噻嗪类β-淀粉样前体蛋白水解酶1(BACE1)抑制剂的设计合成与新型AD治疗药物研发提供理论基础。方法:选取41个联芳基氨基噻嗪类BACE1抑制剂分子,运用SYBYL-X 2.0软件包,以比较分子场分析法(CoMFA)与比较分子相似性指数分析法(CoMSIA)构建该类衍生化合物的三维定量构效关系(3D-QSAR)模型,并以Surflex-dock分子对接方法分析该类化合物与BACE1的结合模式。结果:以CoMFA法和CoMSIA法构建的3D-QSAR模型的交叉验证系数(q^2)均大于0.5,表明其预测能力良好;所建三维等势图能直观反映不同位置引入取代基对化合物活性的影响。Surflex-dock对接分析显示,联芳基氨基噻嗪类分子与BACE1中的ASP80、ASP276、TYR246等氨基酸残基具有氢键作用。结论:基于联芳基氨基噻嗪类衍生化合物所构建的3D-QSAR模型具有良好的预测能力,可指导该类化合物的结构优化;TYR246可能是联芳基氨基噻嗪类抑制剂化合物分子与BACE1结合的另一潜在活性功能残基。通过3D-QSAR分析与分子对接,可进行新型高效联芳基氨基噻嗪类BACE1抑制剂的设计合成,进而用于研发新型AD治疗药物。

Electrocatalytic water oxidation by a nickel oxide film derived from a molecular precursor

In this study,we fabricated a NiOx film by electrodeposition of an ethanediamine nickel complex precursor(pH=11)on a fluorine‐doped tin oxide substrate.The resulting film is robust and exhibits high catalytic activity for electrochemical water oxidation.Water oxidation is initiated with an overpotential of375mV(1mA/cm2)and a steady current density of8.5mA/cm2is maintained for at least10h at1.3V versus the normal hydrogen electrode.Kinetic analysis reveals that there is a2e?/3H+pre‐equilibrium process before the chemical rate‐determining step.The low‐cost preparation,robustness,and longevity make this catalyst competitive for applications in solar energy conversion and storage.

高相对分子质量聚丙烯酰胺生产工艺的优化

采用前加碱均聚共水解工艺生产的油田用高相对分子质量聚丙烯酰胺,其相对分子质量和黏度受到了诸如氧化还原体系、链转移剂、反应温度等方面的影响。本文从上述几个因素出发,探讨了各个因素对聚丙烯酰胺产品的相对分子质量和黏度的影响,优化了高相对分子质量聚丙烯酰胺的配方体系,合成出了相对分子质量大于1.6×107,黏度大于45 mPa·s的产品。

反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病大鼠的海马神经元的保护作用

目的观察反式白藜芦醇(TR)对Aβ25-35诱导AD大鼠海马神经元的保护作用。方法将45只大鼠随机均分为假手术组、阳性对照组(多奈哌齐1 mg·kg-1)、模型组(Aβ25-35)及TR低、高剂量组(TR 10、40 mg·kg-1);Aβ25-35注射海马内后,各组ig给药,qd,连续15 d,假手术组和模型组给予同体积的生理盐水。Morris水迷宫检测大鼠学习和记忆能力;HE染色观察海马神经元损伤情况;实时PCR法定量检测海马中APP mRNA的表达;用免疫组化及Western Blot检测caspase8蛋白表达。结果与模型组比较,TR低、高剂量组在定向航行实验中,大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),在空间搜索实验中校正潜伏期明显延长(P<0.05);TR能明显减轻海马神经元损伤;显著降低大鼠海马中APP mRNA和caspase 8蛋白的表达(P<0.05)。结论 TRes对Aβ25-35致AD大鼠海马神经元有保护作用,可能与抑制APP mRNA和caspase 8蛋白的表达有关。

BACE抑制剂verubecestat的合成

目的:改进verubecestat的制备工艺。方法:以对甲氧基苯甲醛为起始原料通过10步反应合成了BACE(β-淀粉样前体蛋白水解酶)抑制剂verubecestat(N-{3-[(5R)-2H-1,1-二氧代-2,5-二甲基3-氨基-5,6-二氢-1,2,4-噻二嗪基]-4-氟苯基}-5-氟-2-吡啶甲酰胺)。结果:目标产物经1H-NMR和ESI-MS确认结构正确。结论:改进后的制备工艺反应条件温和,适合于实验室研究的小规模制备。