水稻小G蛋白OsRab5b的亚细胞定位研究

旨在研究水稻Os Rab5b亚细胞定位及第二位甘氨酸在蛋白定位中的作用。利用药物、细胞器标记物和示踪染料处理Os Rab5b-GFP与Os Rab5b(Gly2Ala)-GFP的转基因BY-2细胞,然后用激光共聚焦显微镜观察。结果表明,Os Rab5b-GFP转基因细胞呈现出大量的分散点状结构和少量细胞质弥散信号;wortmannin处理可以使Os Rab5b-GFP标记的点状结构膨胀成小的环状结构;采用100μg/m L布雷菲德菌素A(BFA)处理可使Os Rab5b-GFP标记的结构聚集。大部分的Os Rab5b-GFP信号都可以与前液泡区标记蛋白VSRAt-1共定位。在内吞示踪染料FM4-64摄取的第60 min,Os Rab5b-GFP标记的结构大部分被FM4-64标记。突变体Os Rab5b(Gly2Ala)-GFP弥散分布于细胞核和细胞质内,而且不受wortmannin或BFA药物处理的影响。Os Rab5b定位于BY-2细胞的前液泡区,Gly2在蛋白准确定位方面发挥重要作用。