高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白对人视网膜血管内皮细胞生长抑制作用机制

目的探讨高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白（TTR）对人视网膜血管内皮细胞（hREC）生长抑制作用的机制。方法将hREC分为正常组、高糖组、正常缺氧组、高糖缺氧组、正常＋TTR组、高糖＋TTR组、正常缺氧＋TTR组及高糖缺氧＋TTR组，各组细胞均置于Dulbecco改良Eagle培养基中培养。正常组、正常缺氧组培养基中加入5．5mmol／L葡萄糖；高糖组、高糖缺氧组培养基中加入25．0mmol／L葡萄糖；正常缺氧组、高糖缺氧组培养基中加入200btmol／L氯化钴；正常＋TTR组、高糖＋TTR组、正常缺氧＋TT1潍及高糖缺氧＋TT嘲除高糖及缺氧诱导外，于细胞贴壁后再加入4p．mol／LTTR。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测各组细胞磷酸激酶B（Akt）、磷酸化Akt（P．Akt）、B细胞淋巴瘤／8血病．2（Bcl-2）、内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）及Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达量。结果正常缺氧组较正常组（Х^2=25．360）、高糖缺氧组较高糖组（Х^2=17．400）、高糖缺氧＋Tn选且较高糖缺氧组（Х^2=9．900）均表现为细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。正常组与高糖组（Х^2=0．010）、正常组与正常＋TTR组、高糖组与高糖＋TTR组、正常缺氧组与正常缺氧＋TTR组之间细胞凋亡率比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。Westernblot检测结果显示，各组Akt蛋白表达比较，差异无统计学意义（F=2．450，P〉0．05）。正常缺氧组较正常组（t=9．406、5．306、4．819、-4．503）、高糖缺氧组较高糖组（t=8．877、7．723、6．500、-14．646）均表现为P．Akt、eNOS、Bcl-2蛋白表达量明显减少，Bax蛋白表达量明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。与正常缺氧组比较，正常缺氧＋TTR组P．Akt蛋白表达量增加（户一5．024，P〈0．05），差异有统计学意义（P〈0．05）；eNOS、Bcl-2、Bax蛋白表达量无明显变化，差异无统计学意义（卢一2．235、-2．656、-0．272，P〉0．05）。与高糖缺氧组比较，高糖缺氧＋TTR组P．Akt、Bcl-2蛋白表达量明显减少（t=4．355、4．308），Bax蛋白表达量明显增加（t=-4．311），差异有统计学意义（P〈0．05）；eNOS蛋白表达量无明显变化，差异无统计学意义（t=-1．590，P〉0．05）。高糖组与正常组、正常＋TTR组与正常组、高糖＋TTRN与高糖组之间P—Akt、eNOS、Bcl-2、Bax蛋白表达量比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖缺氧环境下TTR对hREC生长抑制作用的机制与Akt／Bcl-2／Bax信号通路有关，而与Akt／eNOS信号通路无关。

高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白对视网膜血管内皮细胞的影响

目的观察高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白（TTR）对人视网膜血管内皮细胞（hREC）的影响。方法分别于5．5mmol／L葡萄糖（低糖，LG）、25．0mmol／L葡萄糖（高糖，HG）以及200μmol／LCoCl2诱导的缺氧环境中培养hREC、人视网膜色素上皮细胞（hRPEC），并据此分为LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组。实时无标记细胞功能分析仪检测细胞培养初始时间（Oh）及培养后4、8、16、24、36、48、60、72h的细胞生长指数。分别在LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组细胞培养基中添加4tLmol／LTTR，即LG组＋TTR、LG缺氧组＋TTR、HG组＋TTR、HG缺氧组＋TTR，观察TTR对hREC和hRPEC的作用以及hRPEC对hREc生长的影响。Transwell共培养体系观察hPEPC对hREC生长影响。结果培养后72h，LG组hREc、hRPEC生长指数明显高于LG缺氧组、HG组，差异均有统计学意义（hREC：F=17．098、22．970，P〈0．05；hRPEC：F=45．442、9．011，P〈0．05）；HG组、HG缺氧组hREC、hRPEC生长指数显著降低，差异均有统计学意义（hREC：F=146．184，P〈0．05；hRPEC：F=27．907，P〈0．05）。HG组＋TTR、HG缺氧组＋TTRhREC生长指数显著低于HG组、HG缺氧组，两组hREC生长指数比较，差异有统计学意义（F=161．430、24．106，P〈0．05）；LG组＋TTR、LG缺氧组＋TTRhREC生长指数高于LG组，LG缺氧组，两组hREC生长指数比较，差异有统计学意义（F=200．486、48．662，P〈0．05）。LG组＋TTR、LG缺氧组＋TTR、HG组＋TTR、HG缺氧组＋TTRhRPEC生长指数均较LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组略高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。共培养与单独生长细胞相比，共培养hRPEC对hREC生长有显著抑制作用，差异有统计学意义（LG组：F=15．711，P〈0．05；LG缺氧组：F=45．659，P〈0．05；HG组：F=7．857，P〈0．05；HG缺氧组：F=6．348，P〈0．05）。绪论高糖缺氧环境下TTR对hREC生长有抑制作用。