针刺对实验性脊髓损伤前角运动神经元酶学的影响

目的:探讨针刺对大鼠脊髓损伤前角运动神经元酶学的影响。方法:采用酶组织化学染色方法定性分析针刺治疗前后脊髓前角运动神经元乙酰胆碱酯酶(ACHE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)的含量变化;同时,运用全自动图像分析仪系统进行定量分析。结果:脊髓损伤后ACHE和SDH含量减少(P<001);ACP含量增加(P<001)。而针刺组针刺后均较对照组同时段点ACHE、SDH酶含量高;ACP酶含量低(P<005,P<001)。结论:针刺能调节脊髓损伤后前角运动神经元酶含量,具有抑制或延缓神经元变性程度并能促进其恢复。

神经干细胞移植促进大鼠脊髓损伤后前角运动神经元存活及后肢运动功能恢复的实验研究

目的:研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后前角神经元的作用及后肢运动功能的恢复。方法:5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,采用电控脊髓损伤打击装置制作大鼠SCI模型。实验分为BrdU+NSCs组、NSCs组、SCI组、假手术组(Sham组)4组。SCI后3d进行NSCs移植,应用免疫组化法观察BrdU标记的移植细胞的存活及迁移情况,Nissl染色法观察脊髓前角运动神经元存活情况,采用行为学(BBB)评分法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果:BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs,BrdU+NSCs组和NSCs组脊髓前角存活运动神经元较SCI组明显增多(P<0.05),BBB评分亦明显高于SCI组(均P<0.05)。结论:体外培养的胚胎大鼠NSCs在移植到SCI区域后可存活、迁移,对SCI后前角运动神经元具有保护作用,从而促进了大鼠后肢运动功能的恢复。

高压氧前处理脊髓损伤大鼠前角运动神经元的凋亡

背景:脊髓损伤后难以修复,损伤后保护残存的神经元是促进神经再生的关键。目的:验证高压氧预处理可以通过抑制早期的细胞凋亡来保护脊髓前角运动神经元。方法:随机将26只雄性Wistar大鼠等分成模型组和实验组。实验组在给予高压氧5d后与模型组同时制作脊髓T9~10全横断模型。结果与结论:尼氏染色显示脊髓T9~T10全横断后8h及1d,脊髓前角的浓染的细胞多见,与模型组相比,实验组脊髓前角浓染的细胞较少。TUNEL染色也显示脊髓T9~T10全横断后脊髓损伤后8h^1d,2组大鼠脊髓前角内均可见大量的凋亡神经元,3d时凋亡神经元数量减少。相比于模型组,高压氧预处理8h,1d后大鼠脊髓前角凋亡神经元较少(P<0.05,P<0.01)。说明高压氧预处理能对脊髓损伤后前角运动神经元起保护作用。

大鼠脊髓全横断后TrkA和TrkB在前角运动神经元的表达

为了探讨脊髓全横断损伤后神经营养因子受体表达的变化 ,本研究取大鼠 C6 和 L5节段脊髓进行 Trk A和 Trk B的免疫组织化学反应。用 HPIAS-10 0 0高清晰度彩色图像细胞测量系统检测免疫阳性神经元的数量和平均灰度。结果显示 ,大鼠脊髓全横断后 ,两种受体 Trk A和 Trk B在运动神经元的表达均出现短暂上调 ,其中 Trk A在颈段的表达高峰出现在损伤后 14 d而腰段为损伤后 7d;与此不同 ,Trk B在颈段和腰段两个部位的表达高峰均出现在 3d。在高峰之后 ,两种受体的表达均下降 ,至术后2 8d已接近或低于正常水平。提示 ,大鼠脊髓全横断损伤后 ,神经营养因子特异性受体 Trk A和 Trk B的表达有一定的时空规律 ,即损伤后 Trk B的表达由短暂上调到表达下降 ,随之出现 Trk A的表达高峰 ,意味着 Trk B的表达下降可能促进 Trk

抗BDNF血清对小鼠坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元内GAP-43表达的影响

小鼠坐骨神经压榨损伤后 ,腹腔注射抗 BDNF血清 ,动物存活 2周。用组织原位杂交技术与免疫组织化学方法观察生长相关蛋白 ( GAP-4 3)在脊髓腰骶膨大部前角运动神经元的表达 ,并对实验结果进行图像分析。结果发现 ,注射抗 BDNF血清后坐骨神经损伤侧脊髓前角 GAP-4 3m RNA的阳性神经元与 GAP-4 3免疫反应阳性神经元的数目减少 ,阳性神经元的光密度也降低 ,上述改变在统计学上均有显著意义。结果提示 ,小鼠坐骨神经损伤后内源性 BDNF可能参与脊髓前角运动神经元 GAP-4

坐骨神经损伤后相应脊髓前角运动神经元的形态学变化

目的探讨坐骨神经损伤与修复过程中相应脊髓前角外侧核运动神经元的形态学变化,并对神经元尼氏染色法的应用价值进行评估。方法采用硅胶管套接切断的大鼠坐骨神经模型,应用焦油紫染色、甲苯胺蓝染色和硫堇染色等3种尼氏法对伤后7、14、30d脊髓前角运动神经元进行形态学观察。结果应用3种染色方法均观察到坐骨神经伤侧脊髓前角外侧核大、中型运动神经元的形态结构和存活率与对照侧有明显差别。与对照侧比较,伤后7d伤侧脊髓神经元数目减少,存活率降低;伤后14d和伤后30d,尤其是伤后30d,伤侧脊髓神经元数目减少更显著,存活率下降更明显,有些神经元轮廓不清且尼氏体模糊。结论随着大鼠坐骨神经损伤时间的延长,其相应脊髓前角运动神经元的损伤程度逐渐增加,尤其是伤后30d退变非常明显。焦油紫染色方法是显示神经元尼氏体及反映神经元生活状态的简捷有效的方法。

神经生长因子对兔坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元乙酰胆碱酯酶的影响

钳夹损伤兔右坐骨神经，于损伤处注射蛇毒ＮＧＦ４００Ｂｕ／ｋｇ／日，损伤术后１，３，７天和２，３，４，６，８周动态观察脊髓腰段伤侧第Ⅸ板层外侧群的大型运动神经元的ＡＣｈＥ活性改变。结果表明术后１，３天实验组（指损伤给药组）和对照组（指损伤对照组）ＡＣｈＥ活性均下降（Ｐ＞００５）；术后１，２，３周对照组ＡＣｈＥ活性明显下降，而实验组ＡＣｈＥ活性逐渐趋于恢复（Ｐ＜００１）；术后６周实验组ＡＣｈＥ活性恢复至正常水平（Ｐ＜００１）。本研究显示蛇毒ＮＧＦ对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元ＡＣｈＥ活性恢复有促进作用。

急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞凋亡相关蛋白的表达规律

背景:马尾综合征往往遗留有会阴区皮肤感觉减退,尿便控制功能降低,甚至出现男性功能受损。实验研究发现外周神经纤维损伤后,神经元胞体会发生凋亡,这与损伤的性质、神经元种类、动物种属、年龄、与神经元距离等因素有关。目的:探讨急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞凋亡及相关蛋白的表达规律。方法:27只家犬随机分为3组,压迫组及对照组制备马尾神经压迫模型,正常组不造模。压迫组又分为水囊压迫持续4,8,12,24,48,72,168 h组,每组3只;对照组只置入水囊,不注水。采用TUNEL标记法检测脊髓前角运动神经元凋亡情况,免疫组化SABC法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,用Qwin550Cw型图像采集与分析系统检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达阳性细胞灰度值。结果与结论:急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞发生凋亡,压迫12 h即有阳性细胞检出,72 h神经元凋亡达到高峰。Bax、Bcl-2蛋白在正常组即有少量表达,Caspase-3蛋白在正常组、对照组无表达。Bax、Bcl-2蛋白表达于压迫持续8 h开始显著增加,72 h达高峰,168 h降至正常;Bax蛋白表达增幅较Bcl-2大。Caspase-3蛋白于压迫持续12 h开始表达,72 h达高峰,168 h仍有少量表达;Bax、Caspase-3蛋白表达在72 h达高峰,Bcl-2蛋白表达则无明显上升。提示急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元发生凋亡;Bax、Bcl-2蛋白表达呈相互拮抗作用,在Bax/Bcl-2复合体中,Bax蛋白占优势时促进凋亡,诱发Caspase-3蛋白表达,导致神经元凋亡发生。

神经生长因子对兔脊髓前角运动神经元保护作用的定量研究

钳夹损伤兔右坐骨神经，于损伤处注射蛇毒ＮＧＦ４００Ｂｕ／ｋｇ／日，损伤术后１，３，７天和２，３，４，６，８周动态观察脊髓腰段伤侧第ＩＸ板层外侧的大型运动神经元的ＡＣＰａｓｅ活性改变并应用图像分析仪对其进行定量研究。结果表明术后１，３天实验组和对照组ＡＣＰａｓｅ活性均增加；术后３周实验组ＡＣＰａｓｅ活性达高峰，溶酶体数目及溶酶体、高尔基复合体上的电子密度也明显增加，对照组酶活性不如实验组高，组间差异显著（Ｐ＜００１）。术后６周实验组ＡＣＰａｓｅ活性恢复至正常水平，而对照组ＡＣＰａｓｅ活性才开始回降。本研究显示蛇毒ＮＧＦ对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元ＡＣＰａｓｅ活性恢复有促进作用。

前角运动神经元向脊神经节投射的探讨——CB-HRP示踪及电镜研究

本实验将１％ＣＢ－ＨＲＰ注入大鼠左侧腰４节段脊神经节（ＤＲＧ）两天后，观察到同侧相应节段脊髓前角第Ⅷ层和Ⅸ层内有ＨＲＰ标记胞体。电镜观察显示，在切断大鼠左侧Ｌ４和Ｌ５前根后５～７天，在相应节段的ＤＲＧ内见到变性纤维或终末。上述结果提示，前角运动神经元可发出纤维经前根到ＤＲＧ，及可能参与调节一级感觉信息的传入。

胎鼠前角运动神经元的取材与培养研究

目的探讨脊髓前角运动神经元的取材时间、方法和体外培养。方法取胎龄为14~18 d的SD大鼠胚胎及新生鼠脊髓腹侧半,分别采用DMEM/F12和Neurobasal-A培养基进行培养,观察前角运动神经元的生长状态。结果胎龄15~16 d的胎鼠易取材,联合Neurobasal-A＋2%B27培养基培养的前角运动神经元细胞状态好、纯度高。结论采用胎龄15~16 d的胎鼠脊髓腹侧半,联合Neurobasal-A＋2%B27培养基培养细胞能获得高纯度的前角运动神经元,为研究运动神经元疾病打下实验基础。

大鼠脊髓颈段前角运动神经元核团分布

目的观察大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布特征。方法取12只SD大鼠颈段和T1、T2脊髓横断面冰冻切片,用焦油紫和Pal-Weigert染色法染色。在显微镜下观察SD大鼠颈段脊髓的前角运动神经元的分布。对SD大鼠颈段的前角运动神经元的分布特征进行研究。结果在颈段的膨大处大鼠的前角运动神经元的核团可以分为三组:内侧组、外侧组和中央组。内侧组分为:前内侧核和后内侧核;外侧组分为:前外侧核、后外侧核和后外侧后核;中央组:前角前核。C1.0～C4.0前角运动神经元分为两个核团:前内侧核和前外侧核;C4段出现了前角前核;C5起始处出现了后内侧核;1/2 C5处又出现了前外侧核,后外侧核;1/2 C6处出现了后外侧后核;3/4 T1后外侧后核消失;1/4 T2前角前核和后外侧后核消失;1/2 T2后外侧核和后内侧核消失。结论大鼠脊髓颈段的前角运动神经元的分布具有明显的特征。

脊髓内移植神经干细胞对臂丛神经根性撕脱伤后前角运动神经元生存和修复的影响

目的:观察臂丛根性撕脱伤后脊髓内移植神经干细胞的存活、分化、迁移情况以及对原有前角运动神经元的影响。方法:实验于2004-01/12在福建医科大学分子生物学中心以及福建省骨科研究所完成。将雄性SD大鼠60只随机分为3组,每组20只。①单纯组:将C5～7神经根经后路撕脱制作大鼠臂丛根性撕脱伤模型,不进行细胞移植。②对照组:模型制作后即刻移植灭活神经干细胞(5×108L-1)4μL于C6脊髓前角。③实验组:模型制作后即刻把体外培养的5-溴尿嘧啶标记的神经干细胞(5×108L-1)4μL移植于C6脊髓前角。各组于术后1,2,4,8,12周5个时间点取脊髓标本制备切片,每个时间点4只,分别计算损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率。观察移植神经干细胞存活、迁移、分化情况采用免疫组织化学染色方法。结果:60只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠臂丛根性撕脱伤后不同时间前角运动神经元存活率:实验组2,4,8,12周时间点均高于对照组和单纯组犤实验组:(79.3±2.9)%,(66.2±3.8)%,(57.0±5.4)%,(47.6±4.8)%;对照组:(69.4±3.1)%,(45.4±3.7)%,(33.4±6.5)%,(29.2±2.3)%;单纯组:(71.0±3.0)%,(45.9±2.9)%,(35.5±5.4)%,(27.9±1.9)%,t=3.8730～8.5009P<0.01犦。②神经干细胞移植入脊髓后不仅能存活,迁移达一个脊髓节段,并可以进一步分化为神经元以及星型胶质细胞。结论:①臂丛神经根性撕脱伤后脊髓前角内可以提供神经干细胞分化成星型胶质细胞和神经元的适宜微环境,而随时间不同表现出不同的分化趋向。②移植神经干细胞大鼠前角运动神经元存活率增高,说明神经干细胞移植除能分化为神经元而发挥神经元替代作用外,对神经根撕脱引起脊髓运动神经元死亡也具有保护作用,能明显减少神经根撕脱后运动神经元的继发性变性死亡。

条件性损伤的时间与频次对神经根撕脱伤后脊髓前角运动神经元死亡及NOS表达的影响

目的 探索条件性损伤 (CL)的时间和频次对神经根撕脱 (TL)后脊髓前角运动神经元一氧化氮合酶 (NOS)表达及细胞死亡的影响。方法 成年SD雌性大鼠 116只 ,体重 2 0 0～ 30 0g ,以钳夹神经干为CL ,分为两个系列。时间系列 :在CL后 1d、3d、1w、2w后进行TL ,频次系列分别在 1w和 2w内行 1次、2次、6次钳夹 ,术后不同时间点处死动物 ,以单纯撕脱臂丛为对照 ,取C5～C8节段脊髓 ,行NADPH d组化染色 ,中性红复染。定量观察前角运动神经元NOS表达及神经元数目。结果 单纯撕脱组术后第 5d脊髓前角运动神经元开始表达NOS ,术后 3wNOS阳性神经元数达到高峰 ,随后逐渐下降并伴有神经元丢失。时间系列 :撕脱后 3d和 2w ,CL与TL间隔 1d组的NOS表达和神经元数目与对照组无显著性差异 ,但 3d、1w、2w组的NOS细胞数及神经元的丢失均较对照组明显 (P <0 0 5P <0 0 1) ,但在撕脱后 4w各CL时间的NOS表达和神经元存活均较对照组减少 (P <0 0 5 )。频次系列 :在 1w和 2w内增加CL次数可使NOS的表达水平和神经细胞的死亡数目有显著增加 ,在撕脱后 2w和 4w等较后的时间点更为明显 ;但在一定时间内 2次与 6次钳夹之间则无显著性差异。结论 条件性损伤与二次损伤之间的间隔影响撕脱后神经元NOS表达和神经元的死亡 。

GDNF及dvHSV-GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的影响

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子及单纯疱疹病毒载体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (dv HSV-GDNF)对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的作用 ,本实验对成年大鼠造成双侧坐骨神经损伤后 ,于右侧损伤处分别施加胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF;左侧损伤处施加生理盐水作为对照。分别取损伤后 4、7、14和 2 8d大鼠的脊髓 L4 ～ L6 节段 ,经石蜡包埋切片后行 Nissl染色 ,计数前角运动神经元数量并进行统计学分析。结果发现 :坐骨神经损伤后 4、7、14和 2 8d,右侧脊髓前角运动神经元的数量明显高于左侧。提示 :胶质细胞源性神经营养因子和 dv

川芎嗪对新生SD大鼠全横断脊髓前角运动神经元外向延迟整流钾电流的影响

目的 研究新生SD大鼠全横断损伤1h脊髓前角运动神经元外向延迟整流钾电流的变化及川芎嗪（tetramethypyrazine，TMP）对全横断脊髓前角运动神经元外向延迟整流钾电流的影响，探讨TMP治疗脊髓损伤的机制．方法新生SD大鼠22只，随机分成两组：即正常组（n=12）和脊髓T 10全横断损伤1h组（n=10），正常组和脊髓全横断损伤1h组又分别灌流8mM TMP．取各组脊髓的L3—L5段，振动切片机切片（厚300μm），36℃孵育1h．

神经生长因子对神经损伤后脊髓前角运动神经元影响的研究

为探讨神经生长因子(NGF)对神经损伤后运动神经元的影响,采用定位、定量、定时的方法钳夹大耳白兔右坐骨神经,于损伤处注射蛇毒 NGF 400 BU·kg^(-1)·d^(-1),神经损伤后按规定时间动态观察伤侧脊髓腰段第Ⅸ板层外侧群的大型运动神经元的三偏磷酸酶(TMPase)组织细胞化学改变。结果表明,术后3周实验组 TMPase 活性达高峰(P<0.01),溶酶体数量及溶酶体、高尔基复合体上的电子密度也明显增加,而对照组 TMPase 活性较低。本研究证明,蛇毒 NGF 对神经损伤后脊髓前角运动神经元 TMPase 活性恢复有促进作用,提示对运动神经元可起促进恢复的作用。

神经生长因子对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元乙酰胆碱酯酶的影响

为探讨神经生长因子(NGF)对促进运动神经元的恢复作用,于钳夹损伤兔右坐骨神经处注射蛇毒 NGF 400 BU/kg·d,损伤术后1、3、7天和2、3、4、6、8周,动态观察脊髓腰段伤侧第Ⅸ板层外侧群的大型运动神经元的乙酰胆碱醇酶(AchE)活性的改变。结果表明,术后1、3天的实验组和对照组 AchE 活性均下降(P>0.05);术后1、2、3周对照组 AchE 活性明显下降,而实验组 AchE 活性逐渐趋于恢复(P<0.01);术后6周实验组 AchE 活性恢复至正常水平(P<0.01)。本研究显示蛇毒 NGF 对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元 AchE 活性恢复有促进作用,从而对运动神经元可起一定的保护作用和促进恢复的作用。