5-HT能纤维向猫脊髓膈神经核及延髓膈肌前运动神经元的投射

实验在 6只成年猫上进行。将WGA HRP微量注入C5膈神经核内 ,通过逆行追踪及 5 HT免疫组织化学FITC荧光双重标记方法 ,研究了中缝核 5 HT能神经元向脊髓膈神经核的投射 ,同时观察了延髓膈肌前运动神经元接受 5 HT能纤维投射的情况。结果在中缝苍白核观察到较多的HRP 5 HT双标记神经元 ,在中缝大核、中缝隐核观察到少数散在的双标记神经元。在延髓疑核、孤束核腹外侧区域的HRP单标记神经元 (即膈肌前运动神经元 )周围观察到 5 HT能轴突末梢。结果表明 :发自中缝苍白核 5 HT能神经元的传出纤维可投射到脊髓膈神经核 ;延髓膈肌前运动神经元接受 5

中枢神经系统对大鼠咽肌前运动神经元的神经调控——假狂犬病毒跨突触标记

为了探讨中枢神经系统对咽肌前运动神经元的神经调控机制，用免疫组织化学方法研究了假狂犬病毒（ＰＲＶ）注射咽肌后跨突触标记细胞在脑中的分布。咽肌注射ＰＲＶ后，脑内ＰＲＶ标记细胞出现的部位随着动物存活时间的延长而增多。咽肌注射ＰＲＶ后４８ｈ，仅在疑核半致密部中出现阳性标记细胞。存活５６ｈ后，标记细胞可见于孤束核的中介亚核、中间亚核及吻内侧亚核。存活６２～７２ｈ后，在延髓的中缝核群、三叉旁核、外侧网状核，脑桥的蓝班、臂旁核、Ａ５细胞群等部位可见大量标记细胞。存活８０～９６ｈ后，延髓和脑桥中上述部位的标记细胞更为密集，并在三叉神经脊束核及Ｂａｒｉｎｇｔｏｎ核等出现标记细胞。中脑的中央灰质和中脑深核；丘脑下部的视前区、室旁核、外侧区、弓状核、连合前核；丘脑的室旁核和外侧缰核；端脑的外侧隔核、终纹床核、杏仁核等部位可见大量阳性细胞。存活１０２ｈ的动物，标记细胞的分布部位和存活９６ｈ者类似，但数量更多。且在皮层的边缘前区、内侧和外侧中央前区等出现较多标记细胞。

大鼠下丘脑生长抑素样神经元对食管前运动神经元的支配

用ＰＲＶ和ＳＯＭ免疫荧光双标记研究了下丘脑ＳＯＭ样神经元对大鼠孤束核中食管前运动神经元的支配，ＰＲＶ注射于大鼠颈部食管后，在下丘脑室旁核及弓状体周围可见密集的ＰＲＶ和ＳＯＭ双标记细胞，在视交叉上核，视交叉后区，下丘脑室周核，下丘脑前区，外侧区及后区，乳头体外侧核，乳头体前侧腹侧部，下丘脑尾侧大细胞核以及连合前核等部位也可见到数量不等的双标记细胞。

大鼠肾上腺素能神经元对咽肌前运动神经元的调控

用PRV和PNMT免疫组化双标记方法研究脑内肾上腺素能神经元对咽肌前运动神经元的调控.观察到在延髓的C1、C2及C3等部位有PRV和PNMT双标记细胞,直接证明脑干中的肾上腺素能神经元和孤束核中调控咽肌运动的前运动神经元有纤维联系.推测可能和调控咽肌的运动有关.

大鼠脑去甲肾上腺素能神经元对咽肌前运动神经元的调控

用PRV和DβH免疫荧光双标记方法研究了脑内去甲肾上腺素能神经元对孤束核中咽肌前运动神经元的调控。观察到延髓和脑桥中A1、A2、A5、A6及A7等部位有PRV和DβH标记细胞。直接证明了脑中去甲肾上腺素能神经元和孤束核中调控咽肌运动的前运动神经元之间有纤维联系，推测可能和调控咽肌的运动有关。

针刺对实验性脊髓损伤前角运动神经元酶学的影响

目的:探讨针刺对大鼠脊髓损伤前角运动神经元酶学的影响。方法:采用酶组织化学染色方法定性分析针刺治疗前后脊髓前角运动神经元乙酰胆碱酯酶(ACHE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)的含量变化;同时,运用全自动图像分析仪系统进行定量分析。结果:脊髓损伤后ACHE和SDH含量减少(P<001);ACP含量增加(P<001)。而针刺组针刺后均较对照组同时段点ACHE、SDH酶含量高;ACP酶含量低(P<005,P<001)。结论:针刺能调节脊髓损伤后前角运动神经元酶含量,具有抑制或延缓神经元变性程度并能促进其恢复。

神经干细胞移植促进大鼠脊髓损伤后前角运动神经元存活及后肢运动功能恢复的实验研究

目的:研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后前角神经元的作用及后肢运动功能的恢复。方法:5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,采用电控脊髓损伤打击装置制作大鼠SCI模型。实验分为BrdU+NSCs组、NSCs组、SCI组、假手术组(Sham组)4组。SCI后3d进行NSCs移植,应用免疫组化法观察BrdU标记的移植细胞的存活及迁移情况,Nissl染色法观察脊髓前角运动神经元存活情况,采用行为学(BBB)评分法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果:BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs,BrdU+NSCs组和NSCs组脊髓前角存活运动神经元较SCI组明显增多(P<0.05),BBB评分亦明显高于SCI组(均P<0.05)。结论:体外培养的胚胎大鼠NSCs在移植到SCI区域后可存活、迁移,对SCI后前角运动神经元具有保护作用,从而促进了大鼠后肢运动功能的恢复。

高压氧前处理脊髓损伤大鼠前角运动神经元的凋亡

背景:脊髓损伤后难以修复,损伤后保护残存的神经元是促进神经再生的关键。目的:验证高压氧预处理可以通过抑制早期的细胞凋亡来保护脊髓前角运动神经元。方法:随机将26只雄性Wistar大鼠等分成模型组和实验组。实验组在给予高压氧5d后与模型组同时制作脊髓T9~10全横断模型。结果与结论:尼氏染色显示脊髓T9~T10全横断后8h及1d,脊髓前角的浓染的细胞多见,与模型组相比,实验组脊髓前角浓染的细胞较少。TUNEL染色也显示脊髓T9~T10全横断后脊髓损伤后8h^1d,2组大鼠脊髓前角内均可见大量的凋亡神经元,3d时凋亡神经元数量减少。相比于模型组,高压氧预处理8h,1d后大鼠脊髓前角凋亡神经元较少(P<0.05,P<0.01)。说明高压氧预处理能对脊髓损伤后前角运动神经元起保护作用。

大鼠脊髓全横断后TrkA和TrkB在前角运动神经元的表达

为了探讨脊髓全横断损伤后神经营养因子受体表达的变化 ,本研究取大鼠 C6 和 L5节段脊髓进行 Trk A和 Trk B的免疫组织化学反应。用 HPIAS-10 0 0高清晰度彩色图像细胞测量系统检测免疫阳性神经元的数量和平均灰度。结果显示 ,大鼠脊髓全横断后 ,两种受体 Trk A和 Trk B在运动神经元的表达均出现短暂上调 ,其中 Trk A在颈段的表达高峰出现在损伤后 14 d而腰段为损伤后 7d;与此不同 ,Trk B在颈段和腰段两个部位的表达高峰均出现在 3d。在高峰之后 ,两种受体的表达均下降 ,至术后2 8d已接近或低于正常水平。提示 ,大鼠脊髓全横断损伤后 ,神经营养因子特异性受体 Trk A和 Trk B的表达有一定的时空规律 ,即损伤后 Trk B的表达由短暂上调到表达下降 ,随之出现 Trk A的表达高峰 ,意味着 Trk B的表达下降可能促进 Trk

抗BDNF血清对小鼠坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元内GAP-43表达的影响

小鼠坐骨神经压榨损伤后 ,腹腔注射抗 BDNF血清 ,动物存活 2周。用组织原位杂交技术与免疫组织化学方法观察生长相关蛋白 ( GAP-4 3)在脊髓腰骶膨大部前角运动神经元的表达 ,并对实验结果进行图像分析。结果发现 ,注射抗 BDNF血清后坐骨神经损伤侧脊髓前角 GAP-4 3m RNA的阳性神经元与 GAP-4 3免疫反应阳性神经元的数目减少 ,阳性神经元的光密度也降低 ,上述改变在统计学上均有显著意义。结果提示 ,小鼠坐骨神经损伤后内源性 BDNF可能参与脊髓前角运动神经元 GAP-4

坐骨神经损伤后相应脊髓前角运动神经元的形态学变化

目的探讨坐骨神经损伤与修复过程中相应脊髓前角外侧核运动神经元的形态学变化,并对神经元尼氏染色法的应用价值进行评估。方法采用硅胶管套接切断的大鼠坐骨神经模型,应用焦油紫染色、甲苯胺蓝染色和硫堇染色等3种尼氏法对伤后7、14、30d脊髓前角运动神经元进行形态学观察。结果应用3种染色方法均观察到坐骨神经伤侧脊髓前角外侧核大、中型运动神经元的形态结构和存活率与对照侧有明显差别。与对照侧比较,伤后7d伤侧脊髓神经元数目减少,存活率降低;伤后14d和伤后30d,尤其是伤后30d,伤侧脊髓神经元数目减少更显著,存活率下降更明显,有些神经元轮廓不清且尼氏体模糊。结论随着大鼠坐骨神经损伤时间的延长,其相应脊髓前角运动神经元的损伤程度逐渐增加,尤其是伤后30d退变非常明显。焦油紫染色方法是显示神经元尼氏体及反映神经元生活状态的简捷有效的方法。

大鼠臂丛前根撕脱延期再植回对运动神经元存活的作用

目的 :建立大鼠臂丛前根撕脱延期再植回模型 ,研究脊髓前角运动神经元的存活与再生。方法 :采用FB逆行示踪法结合NADPH -d组化法与中性红复染 ,计数阳性神经元 .结果 :前根撕脱延期 3、7、14d再植回组 ,动物存活 3周及 6周 ,脊髓前角运动神经元的存活率分别为 79%和 75 %、5 8%和 5 1%、5 7%和 5 0 % ;NOS阳性神经元的表达率分别为 18%和 13 %、3 0 %和 8%、2 0 %和 7%。仅做前根撕脱组动物 ,脊髓前角运动神经元存活率为 41%和 2 9% ,NOS阳性神经元的表达率为 5 5 %和 5 8%。结论 :前根撕脱延期再植回能促进脊髓前角运动神经元的存活与再生。

神经生长因子对兔坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元乙酰胆碱酯酶的影响

钳夹损伤兔右坐骨神经，于损伤处注射蛇毒ＮＧＦ４００Ｂｕ／ｋｇ／日，损伤术后１，３，７天和２，３，４，６，８周动态观察脊髓腰段伤侧第Ⅸ板层外侧群的大型运动神经元的ＡＣｈＥ活性改变。结果表明术后１，３天实验组（指损伤给药组）和对照组（指损伤对照组）ＡＣｈＥ活性均下降（Ｐ＞００５）；术后１，２，３周对照组ＡＣｈＥ活性明显下降，而实验组ＡＣｈＥ活性逐渐趋于恢复（Ｐ＜００１）；术后６周实验组ＡＣｈＥ活性恢复至正常水平（Ｐ＜００１）。本研究显示蛇毒ＮＧＦ对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元ＡＣｈＥ活性恢复有促进作用。

急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞凋亡相关蛋白的表达规律

背景:马尾综合征往往遗留有会阴区皮肤感觉减退,尿便控制功能降低,甚至出现男性功能受损。实验研究发现外周神经纤维损伤后,神经元胞体会发生凋亡,这与损伤的性质、神经元种类、动物种属、年龄、与神经元距离等因素有关。目的:探讨急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞凋亡及相关蛋白的表达规律。方法:27只家犬随机分为3组,压迫组及对照组制备马尾神经压迫模型,正常组不造模。压迫组又分为水囊压迫持续4,8,12,24,48,72,168 h组,每组3只;对照组只置入水囊,不注水。采用TUNEL标记法检测脊髓前角运动神经元凋亡情况,免疫组化SABC法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,用Qwin550Cw型图像采集与分析系统检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达阳性细胞灰度值。结果与结论:急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞发生凋亡,压迫12 h即有阳性细胞检出,72 h神经元凋亡达到高峰。Bax、Bcl-2蛋白在正常组即有少量表达,Caspase-3蛋白在正常组、对照组无表达。Bax、Bcl-2蛋白表达于压迫持续8 h开始显著增加,72 h达高峰,168 h降至正常;Bax蛋白表达增幅较Bcl-2大。Caspase-3蛋白于压迫持续12 h开始表达,72 h达高峰,168 h仍有少量表达;Bax、Caspase-3蛋白表达在72 h达高峰,Bcl-2蛋白表达则无明显上升。提示急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元发生凋亡;Bax、Bcl-2蛋白表达呈相互拮抗作用,在Bax/Bcl-2复合体中,Bax蛋白占优势时促进凋亡,诱发Caspase-3蛋白表达,导致神经元凋亡发生。

神经生长因子对兔脊髓前角运动神经元保护作用的定量研究

钳夹损伤兔右坐骨神经，于损伤处注射蛇毒ＮＧＦ４００Ｂｕ／ｋｇ／日，损伤术后１，３，７天和２，３，４，６，８周动态观察脊髓腰段伤侧第ＩＸ板层外侧的大型运动神经元的ＡＣＰａｓｅ活性改变并应用图像分析仪对其进行定量研究。结果表明术后１，３天实验组和对照组ＡＣＰａｓｅ活性均增加；术后３周实验组ＡＣＰａｓｅ活性达高峰，溶酶体数目及溶酶体、高尔基复合体上的电子密度也明显增加，对照组酶活性不如实验组高，组间差异显著（Ｐ＜００１）。术后６周实验组ＡＣＰａｓｅ活性恢复至正常水平，而对照组ＡＣＰａｓｅ活性才开始回降。本研究显示蛇毒ＮＧＦ对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元ＡＣＰａｓｅ活性恢复有促进作用。

前角运动神经元向脊神经节投射的探讨——CB-HRP示踪及电镜研究

本实验将１％ＣＢ－ＨＲＰ注入大鼠左侧腰４节段脊神经节（ＤＲＧ）两天后，观察到同侧相应节段脊髓前角第Ⅷ层和Ⅸ层内有ＨＲＰ标记胞体。电镜观察显示，在切断大鼠左侧Ｌ４和Ｌ５前根后５～７天，在相应节段的ＤＲＧ内见到变性纤维或终末。上述结果提示，前角运动神经元可发出纤维经前根到ＤＲＧ，及可能参与调节一级感觉信息的传入。

胎鼠前角运动神经元的取材与培养研究

目的探讨脊髓前角运动神经元的取材时间、方法和体外培养。方法取胎龄为14~18 d的SD大鼠胚胎及新生鼠脊髓腹侧半,分别采用DMEM/F12和Neurobasal-A培养基进行培养,观察前角运动神经元的生长状态。结果胎龄15~16 d的胎鼠易取材,联合Neurobasal-A＋2%B27培养基培养的前角运动神经元细胞状态好、纯度高。结论采用胎龄15~16 d的胎鼠脊髓腹侧半,联合Neurobasal-A＋2%B27培养基培养细胞能获得高纯度的前角运动神经元,为研究运动神经元疾病打下实验基础。