马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的探讨马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖的影响;以酶组织化学提取法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响;以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中细胞内脂肪积聚的影响。结果8,16,32μmol/L的马钱苷能够促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中GPDH的升高和脂肪积聚,作用呈明显量效关系。结论马钱苷具有促进大鼠前脂肪细胞增殖,抑制大鼠前脂肪细胞分化的作用。

六味地黄丸入血成分莫诺苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的:测定大鼠口服六味地黄丸后血清中莫诺苷浓度,并探讨莫诺苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法:反相高效液相色谱法检测大鼠口服六味地黄丸后血清中莫诺苷浓度;原代培养大鼠前脂肪细胞;以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测莫诺苷对大鼠前脂肪细胞增殖的影响;以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中的细胞内脂肪积聚的影响。结果:莫诺苷与血清中其它成分较好分离。在250～2000ng范围内线性关系良好(r=0.9991),平均回收率为95.27%,莫诺苷在大鼠血中的平均血药浓度为(16.92±3.63)μg/mL;8.5～68.0μg/mL的莫诺苷促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中的脂肪积聚。结论:莫诺苷可能为六味地黄丸的体内直接作用物质之一;有效成分分离测定与药效学研究相结合的方法将有助于阐明六味地黄丸的有效成分及作用机理。

不同剂型六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的:比较六味地黄方各剂型(汤、丸、超微饮片)对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法:原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖情况,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。结果:10%以内六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用;对分化过程中的GP-DH的升高有抑制作用;而对于分化过程中的脂肪积聚则有促进分解的作用。结论:六味地黄汤、丸、超微饮片能促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中的GPDH的升高和脂肪积聚;上述各作用皆以高剂量组为佳。

六味地黄丸4种入血成分组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化影响的最佳浓度配伍研究

目的:探讨六味地黄丸中马钱苷、芍药苷、莫诺苷、丹皮酚4种入血成分组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的影响,并优选其最佳浓度配伍。方法:原代培养大鼠的前脂肪细胞,将马钱苷等4种入血成分按四因素三水平的正交试验表L9(34)安排实验,同时设立空白对照组,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的速度,以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中的细胞内脂肪积聚的影响,以光密度为指标比较各因素、水平之间的差异。结果:六味地黄丸4种入血成分组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的影响以组合A3B1C3D2的作用最为显著(P<0.01);与各单体组分作用比较,具有高度显著性差异(P<0.01)。结论:六味地黄丸4种入血成分以马钱苷、莫诺苷高浓度,丹皮酚中浓度,芍药苷低浓度配伍组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化影响较单体组分作用显著,表现为中药组方的整体性和协同增效调节作用。

抗波形纤维蛋白单抗对大鼠前体脂肪细胞增殖分化及波形纤维形态的影响

将抗波形纤维蛋白单抗通过显微注射导入未分化的大鼠前体脂肪细胞的细胞质 ,观察其对细胞增殖、分化 ,及其中等纤维———内源波形纤维形态的影响。以注射人IgG和未注射的前体脂肪细胞作为对照 ,发现注射单抗的前体脂肪细胞呈现以下特征 :( 1)细胞呈典型的凋亡形态 ,经Hoechst 33342着染可见胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光 ,胞内脂滴几乎没有 ;( 2 )增殖的细胞数和甘油三酯值均极显著低于对照组 ;( 3)波形纤维蛋白间接免疫荧光染色微弱 ,纤维束解聚成短小团块状 ,分布无序、弥散。上述结果表明 ,抗波形纤维蛋白单抗对前体脂肪细胞的增殖和分化有明显阻滞作用。

马钱子复合生物碱成分抑制成年大鼠海马神经前体细胞的分裂作用

目的探讨马钱子复合生物碱成分对成年大鼠海马神经前体细胞增殖的影响。方法提取马钱子生物碱,分离去除其中的士的宁和马钱子碱,制备马钱子复合生物碱成分。分别在HEK293和PC12细胞系上,采用MTT法观察马钱子复合生物碱成分对细胞存活的影响。然后在培养的成年大鼠海马神经前体细胞上,采用BrdU免疫荧光技术,研究不同浓度的马钱子复合生物碱成分对成年大鼠海马神经前体细胞增殖的影响。结果马钱子复合生物碱成分对HEK293细胞的存活无明显抑制作用,当其浓度>0.5mg/ml时,对HEK293细胞产生毒性作用(P<0.0001),但在PC12细胞中,马钱子复合生物碱成分在5μg/ml的浓度下即可明显抑制PC12的存活(P<0.0001)。在培养的成年大鼠海马神经前体细胞上,50μg/ml马钱子复合生物碱成分能够显著减少BrdU阳性细胞的数量(P<0.01),当浓度增加到100μg/ml时则能够产生明显的细胞毒性(P<0.001)。结论马钱子复合生物碱成分能够显著抑制PC12细胞的存活及成年大鼠海马神经前体细胞的分裂,并且这种抑制作用可能具有细胞选择性。

肾上腺素对大鼠前脂肪细胞增殖、分化及其细胞内cAMP的影响

目的研究肾上腺素对大鼠前脂肪细胞增殖、分化及其细胞内cAMP水平的影响,探讨肾上腺素对大鼠前脂肪细胞的作用机制。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测六味地黄超微饮片含药血清对前脂肪细胞的增殖,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。在大鼠前脂肪细胞生长旺盛时加入肾上腺素,以该细胞内的cAMP水平作为评价指标,利用cAMP与125I-cAMP和特异性蛋白激酶竞争结合原理测定该细胞内cAMP浓度。结果肾上腺素促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制分化过程中GPDH的升高及脂肪积聚;升高大鼠前脂肪细胞内cAMP水平。结论肾上腺素-β受体-cAMP系统可能参与大鼠前脂肪细胞的增殖与分化。

胃腺癌中莫洛尼鼠白血病病毒前病毒整合期-1、-3和原癌基因C-MYC的表达

目的检测胃腺癌中莫洛尼鼠白血病病毒前病毒整合基因(PIM)-1、-3和原癌基因C-MYC(C-MYC)的表达,分析其临床意义。方法61例行胃腺癌根治术的患者作为观察组,留取术后蜡块组织,距肿瘤边缘>5 cm的经病理医师证实为正常的胃黏膜组织15例作为对照组。PIM-1、PIM-3和C-MYC表达的检测应用免疫组化法。结果两组PIM-1、PIM-3和C-MYC的表达差别有统计学意义。观察组中PIM-1、PIM-3和CMYC的表达与肿瘤的最大径、浸润深度和Ki67增殖指数密切相关,PIM-1和PIM-3的表达与脉管内癌栓密切相关,C-MYC的表达与淋巴结转移相关。相关分析显示观察组中三者的表达无明显相关性。结论胃腺癌中PIM-1、PIM-3和C-MYC高表达是促进肿瘤形成和进展的重要因素。PIM-1、PIM-3和C-MYC三者间无相关性。

淀粉样前体蛋白转基因痴呆模型小鼠视网膜和视神经纤维层病理改变

目的观察淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)转基因痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠视网膜组织病理和视神经纤维记数的改变。方法本实验采用6只10月龄的C57BL/6JAPP转基因雄性小鼠模型作为模型组,6只同月龄的C57BL/6J正常雄性小鼠作为正常对照组。处死小鼠,完整取出眼球分离视网膜,进行视网膜常规HE染色,同时取球后视神经制作半薄切片,甲苯胺蓝染色,光镜观察视神经形态,行图像分析和轴突纤维计数。结果视神经横断面模型组小鼠与正常对照组相比:神经纤维组织疏松,排列较紊乱,染色深浅不均,间质增多,部分轴突水肿。与正常对照组(1.77±0.04)×106相比,模型组小鼠视神经纤维数量(2.28±0.06)×106明显减少,视神经纤维密度正常对照组和模型组分别为(0.3836±0.0697)μm-2和(0.2701±0.0517)μm-2,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组神经细胞平均光密度值无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠视网膜神经节细胞层细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),两组内颗粒层和外颗粒层细胞数量无明显变化,差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论 APP转基因AD模型小鼠视网膜神经节细胞数减少,视神经纤维数明显减少而且受损,提示APP转基因AD模型小鼠视网膜和视神经存在退行性病变。

Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响

目的探讨Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响。方法利用成骨诱导液诱导Mc3T3-E1成骨向分化,利用实时定量PCR分别检测诱导后0、3、7 d的Rap1b mRNA的相对表达量。同时向实验组细胞分别转染Rap1b-mus-462和Rap1b-mus-703,4 d后进行ALP染色,同时测定Rap1b的mRNA相对表达量,并对转染后细胞中成骨指标ALP、Runx2和Osterix 0、3、7 d时的mRNA相对表达量进行测定。再利用划痕实验观察siRNA转染对Mc3T3-E1细胞迁移能力的影响。结果 Real-time PCR结果显示在成骨诱导早期的不同时间点,Rap1b的表达量随诱导时间的增加而增加。当Rap1b的表达降低时,各成骨指标ALP、Runx2和Osterix的表达量也随之降低,Mc3T3-E1细胞迁移能力也有所减弱。结论 Rap1b对Mc3T3-E1细胞成骨分化早期以及细胞迁移有一定的促进作用。

金枪鱼鱼骨活性钙对鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)活力和凋亡作用

目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1μg/m L)CMC和低浓度(0.1μg/m L)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。

淀粉样前体蛋白/早老素1转基因小鼠脑皮质中过氧化物酶体增殖剂激活受体α的表达及意义

目的探讨淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠脑皮质中过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)的表达变化及意义。方法选择10只5月龄雄性APP/PS1双转基因C57BL/6J-TgN(APP/PS1)ZLFILAS小鼠为实验组,10只同遗传背景5月龄雄性C57BL/6J野生型小鼠为对照组。采用Morris水迷宫实验测定2组小鼠空间学习记忆能力,免疫组织化学法检测2组小鼠脑组织中β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况,Western blot法检测2组小鼠脑皮质中PPARα、APP蛋白及肝组织中PPARα、脂酰辅酶A氧化酶1(ACOX1)及肉碱脂酰转移酶1(CPT1)蛋白表达,生物化学法检测2组小鼠血清中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平。结果实验组小鼠不同时间点逃避潜伏期短于对照组,但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组小鼠在目标象限游动时间短于对照组,但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组小鼠脑组织中未见到Aβ阳性斑块,实验组小鼠脑皮质和海马区可见大量大小不等的Aβ阳性斑块。实验组小鼠脑皮质中PPARα蛋白相对表达量显著低于对照组,APP蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。实验组小鼠肝组织中PPARα、ACOX1、CPT1蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。实验组小鼠血清TG水平显著高于对照组(P<0.05),实验组与对照组小鼠血清TC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠存在脑组织和肝组织PPARα异常表达、脂质代谢紊乱,PPARα在阿尔茨海默病的发病机制中起重要作用。

睫状神经营养因子及神经突起素上调莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1表达促进受损神经元样细胞突起再生

目的探讨莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1(Pim-1)基因在体外受损神经元中的表达变化,以及神经营养因子调节Pim-1表达进而促进受损神经元突起再生的相关分子基础。方法用反式视黄酸将Neuro-2a(N-2a)细胞诱导成为神经元样N-2a(N-2a-N)细胞,用去铁胺亚磺酸盐(DFO)抑制N-2a细胞增殖,用丙烯酰胺(ACR)损伤N-2a-N细胞突起。N-2a-N细胞分为正常对照组、损伤组、睫状神经营养因子(CNTF)及神经突起素(Nrn1)组,每组4个样本。免疫荧光细胞化学法检测N-2a-N细胞表型及Pim-1蛋白表达;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在各组的表达变化。用Western blotting检测调节Pim-1活性的相关分子,细胞存活、凋亡相关分子及轴突再生相关分子的表达变化。结果细胞免疫荧光显示,N-2a-N细胞表达神经元标志分子βⅢ-微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和neurofilament-200,并表达Pim-1。50μmol DFO有效抑制N-2a细胞的增殖。应用1 mmol/L的ACR成功建立N-2a-N细胞突起损伤模型。N-2a-N细胞损伤后,Pim-1基因表达呈现先降低后升高,再降低的趋势。与损伤组相比,CNTF组和Nrn1组最长神经突起所占比例明显增加,细胞内信号转导分子细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(p-STAT3)及Pim-1表达上调,凋亡相关分子cleaved Caspase-3及Bax表达下调,抗凋亡相关分子Bcl-2表达上调,神经突起生长相关分子生长相关蛋白43(GAP-43)表达上调。结论修复受损N-2a-N细胞需要过表达Pim-1基因。神经营养因子CNTF、Nrn1可激活受损N-2a-N细胞ERK1/2及STAT3信号通路,进而上调Pim-1及GAP-43表达,并促进细胞突起再生。

外周血转录激活因子6、莫氏小鼠白血病病毒前病毒插入序列2的表达对急性冠脉综合征患者短期主要心血管不良事件的预测价值

目的 探讨外周血转录激活因子6(STAT6)、莫氏小鼠白血病病毒前病毒插入序列2(Pim-2)的表达水平在预测急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者短期主要心血管不良事件中的应用价值。方法 选取2020年5月至2022年4月临沂市第三人民医院诊治的152例ACS患者为研究对象,根据随访6个月期间是否发生短期主要心血管不良事件(major adverse cardiovascular events,MACE)分为未MACE组(n=110)和MACE组(n=42)。比较两组患者的一般资料、实验室指标、STAT6、Pim-2水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估STAT6、Pim-2水平对ACS患者短期MACE的预测价值。结果 两组患者的血脂指标水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MACE组患者STAT6水平明显高于未MACE组,Pim-2水平明显低于未MACE组(P <0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示:STAT6预测ACS患者发生短期MACE的曲线下面积(AUC)为0.728,敏感度为74.19%,特异度为58.16%(95%CI:0.603~0.853,P <0.05);Pim-2预测ACS患者发生短期MACE的AUC为0.706,敏感度为67.74%,特异度为58.06%(95%CI:0.576~0.835,P <0.05)。结论 当ACS患者发生MACE时,机体外周血STAT6水平异常升高,Pim-2水平异常降低,两者在预测ACS患者发生MACE中均具有良好的价值。

地冬及天冬对荷瘤小鼠的抑瘤作用

地冬及天冬水提物分别灌胃给药可使荷瘤BALB/c小鼠瘤块 (S180 ,H2 2 )重量减小 ,使S180腹水型昆明种小鼠平均存活时间明显延长。提示地冬及天冬具有抗肿瘤作用。

絮语 猫——蛇——鼠

古今中外,人民一致公认狸猫是老鼠最大的克星,古国埃及曾将猫神化供奉在巴斯特女神庙,接受人们膜拜。我国唐朝以前,民间也在每年腊月对八种动物举行莫祭,猫就是其中之一,可见猫的赫赫身价了。其实,猫的捕鼠本领,远远不如蛇类,对厅屋窜扰的老鼠,尚能起点威慑作用,碰见高卧洞府的鼠类,只能望洞长叹,一筹莫展,徒呼奈何了!而且素有馋嘴的绰号,见不得鱼腥,要是主妇一时大意,盘中佳肴就会被猫弄得骨肉狼籍。

静脉给予外源性神经干细胞聚集在APP小鼠脑内老年斑周围

目的研究静脉给予的外源性神经干细胞在淀粉样前体蛋白(APP)小鼠脑内的分布及可能起到的作用。方法采用14d小鼠胚胎的神经干细胞,经体外扩增、分化后,静脉注射到阿尔茨海默病动物模型——APP转基因小鼠体内,1周后通过磁共振成像(MRI)及激光共聚焦显微镜观察APP小鼠脑内外源性移植神经干细胞的分布。结果外源性标记的神经干细胞可通过血-脑屏障进入APP小鼠脑内,聚集在β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积周围,部分外源性细胞内出现Aβ信号。结论外源性神经干细胞可能在病变区神经元修复或Aβ清除方面起到一定的作用。

表没食子儿茶素没食子酸酯对APP/PS1双转基因小鼠神经元突触可塑性和神经细胞黏附分子表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠空间学习记忆能力、海马CA1区突触超微结构和神经细胞黏附分子表达的影响。方法选用8周龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、EGCG组、盐酸多奈哌齐组,另以同窝阴性小鼠设立正常组,每组12只。连续灌胃给药6个月后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观测APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力;透射电子显微镜观察小鼠海马CA1区突触超微结构;分别采用免疫荧光法及免疫印迹法检测APP/PS1转基因小鼠海马CA1区神经细胞黏附分子(NCAM)和唾液酸转移酶(ST8SiaⅡ)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组逃避潜伏期延长;与模型组比较,EGCG组、盐酸多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期下降(P<0.05)。电子显微镜结果显示,与模型组比较,EGCG组和盐酸多奈哌齐组突触界面曲率变化不明显;突触间隙宽度变窄,突触后致密物厚度增加(P<0.05)。免疫荧光结果显示,海马CA1区NCAM、ST8SiaⅡ蛋白表达在神经元的胞体内,EGCG组和盐酸多奈哌齐组NCAM、ST8SiaⅡ蛋白表达明显增加(P<0.05),免疫印迹实验发现其含量亦呈高表达水平(P<0.05)。结论EGCG对APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆功能具有改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高小鼠海马神经黏附分子表达有关。

Reelin在阿尔茨海默病小鼠发病中的作用

目的探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠病理改变、Reelin和Notch1的表达变化及DNA甲基化状态的改变,为深入了解阿尔茨海默病的发病机制提供理论依据。方法以淀粉样蛋白前体(APP)/早老素-1(PS1)双转基因小鼠为AD模型、同窝野生型小鼠为对照组,两组小鼠共计184只,利用高尔基染色、透射电子显微镜、免疫荧光染色、免疫印迹等技术检测AD模型鼠病理改变、Reelin和Notch1的表达变化及DNA甲基化状态的改变。结果AD小鼠在约6个月时开始出现淀粉样斑沉积、神经元纤维出现缠结等病理改变;AD小鼠发病后,星形胶质细胞和小胶质细胞在淀粉样斑周围聚集增多,随病情加重逐渐增加;Reelin在淀粉样斑周围聚积形成斑块,随病情加重逐渐增多;全长Notch1受体和其活性Notch细胞内片段(NICD)在AD鼠脑部表达减少;AD小鼠脑部甲基化状态减弱,淀粉样斑中有DNA片段,但甲基化状态消失,DNA甲基转移酶1(Dnmt1)和Dnmt3a在AD小鼠中表达减少。结论 AD小鼠脑内淀粉样斑沉积,促使胶质细胞聚集、Reelin聚积形成斑块、Notch1受体表达下降及甲基化状态减弱,进一步加剧AD神经功能紊乱。

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍胃癌前病变大鼠造模联合因素的探讨

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）是目前使用最广泛的胃癌癌前病变（PLGC）大鼠模型的造模用药,但造模时间过长。多种因素联合造模可缩短造模时间,促进造模效果。国内外文献中,除MNNG外,还有其他多种理化造模因素可供选用,是否适合与MNNG联合造模,笔者探讨如下。